全 文 ：第49卷第 3期
2 00 9年 5月
大 连 理 工 大 学 学 报
Journal of Dalian University of Technology
Vol.49 , No.3
May 2 0 0 9
文章编号:1000-8608(2009)03-0345-04
角叉菜不同溶剂提取物抗氧化活性
周 革 非1 ,2 , 　邢 荣莲1 , 　王 长海＊1
(1.大连理工大学 环境与生命学院 , 辽宁 大连　116024;
2.烟台大学 海洋学院 , 山东 烟台　264005 )
摘要:采用甲醇 、乙醇 、乙醚 、乙酸乙酯 、石油醚 、丙酮 6种溶剂分别对角叉菜进行冷浸提取.
对提取物进行超氧阴离子自由基(· O-2 )、羟自由基(· OH -)、H2O 2 诱导的小鼠红细胞氧化
溶血和小鼠肝匀浆脂质过氧化的清除作用实验.结果表明 , 角叉菜不同溶剂提取物对各种自
由基均具有一定的清除作用 , 而且溶剂对提取物活性有一定的影响.在相同的浓度下 ,对自由
基的清除作用最大的分别为乙醚 、丙酮 、乙醚和乙酸乙酯提取物.
关键词:角叉菜;溶剂;提取物;抗氧化活性
中图分类号:O64 文献标志码:A
收稿日期:2007-05-20;　修回日期:2008-12-03.
基金项目:中国博士后基金资助项目(20060390982);山东省中青年科学家科研奖励基金资助项目(2008BS06012).
作者简介:周革非(1968-),女 ,副教授;王长海＊(1962-),男 ,教授 ,博士生导师 , E-mai l:chw ang2001@sina.com.
0　引　言
Cuzzocrea 等[ 1] 的研究证实肿瘤 、炎症 、衰老
等的起因和发展与自由基和脂质过氧化作用有
关.因此 ,寻找抑制自由基和脂质过氧化的物质越
来越受到广泛关注.确切证据表明 ,很多天然产物
具有显著的抗氧化活性[ 2] .海藻是一类具有独特
生理活性的天然产物 ,这是由其特殊的生存环境
造成的.很多学者对海藻提取物的抗氧化活性进
行了深入的研究和探讨.Duan 等[ 3] 对海藻
Poly siphonia urceolata 的提取物进行了抗氧化
活性检测 ,证明对 DPPH 具有很显著的抑制作
用;Yuan 等[ 4] 的研究结果表明红藻 Palmaria
palmata 的正丁醇提取物对 AAPH 诱导的脂质
过氧化有一定的抑制作用 ,但是对 AMVN 诱导
的脂质过氧化的抑制作用不明显.
角叉菜(Chond rus ocellatus), 属于红藻门
(Rhodpophy ta)、杉藻科(Gigartinaceae)、角叉菜
属 ,自然分布于大西洋沿岸和我国东南沿海以及
青岛 、大连等海域 ,是我国的一种重要经济海藻.
国内外学者曾对角叉菜生理 、生态 、化学结构及组
成等方面进行过较深入的研究[ 5 ～ 7] .角叉菜具有
多方面的生理活性.从古至今 ,我国沿海居民就有
食用角叉菜的习惯.据《中国海洋药物辞典》[ 8] 记
载:该藻全体均可食 、入药 ,具有润肠通便 、止血消
肿 、止痛生肌之功效 ,主治慢性便秘 、骨折 、跌打损
伤等症.现代药理实验证明 ,角叉菜具有收敛 、消
炎 、保湿的功效.近年来角叉菜开始应用于医药领
域.日本科学家最近发现 ,角叉菜可以促进皮肤的
角化细胞分化 ,改善因干燥和紫外线造成的皮肤
粗糙现象.但是到目前为止 ,对角叉菜不同溶剂提
取物的抗氧化活性尚未见报道.本文采用不同溶
剂对角叉菜进行提取 ,并对提取物进行抗氧化活
性检测 ,以期为活性成分的进一步分离提供实验
依据 ,并为海藻药物的综合开发利用提供参考.
1　材料与方法
1.1　实验材料
角叉菜 2002年 4月采于青岛太平角 ,由中科
院海洋研究所徐祖洪 、李智恩研究员鉴定为角叉菜
属植物 Chondrus ocellatus ,自来水清洗 ,除去泥沙
和杂藻 ,样品自然阴干 ,塑料袋封口 ,室温保存.
昆明种小鼠 ,雄性 ,体质量 32.0 g ,购自山东
省实验动物中心.
1.2　仪器和试剂
电热恒温水浴锅 HH.SY21-Ni(北京市长风
仪器仪表公司);循环水式多用真空泵(郑州长城
科工贸有限公司);YP202N 电子天平(上海精密
科学仪器有限公司);UV-2102PC 型紫外可见分
光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司).
实验中所用试剂均为国产分析纯.
1.3　实验方法
1.3.1　海藻的提取　取烘干 、粉碎的角叉菜 15
g ,室温下分别用乙醇 、甲醇 、乙酸乙酯 、乙醚 、丙酮
和石油醚各浸提 3 次 ,每次 250 mL 浸泡 4 d ,合
并 3次提取液 ,在 42 ℃水浴下减压蒸干溶剂 ,得
深绿色油状物 ,称量 ,用 4 mL 二甲基亚砜溶解 ,
配成 0.1 g/mL 溶液 ,进行抗氧化活性检测.
1.3.2　抗氧化活性检测　
(1)对超氧阴离子自由基(·O -2 )的清除作
用:采用邻苯三酚体系[ 9]
在 T ris-HCl缓冲液中加入适量提取物溶液 ,
混匀后在 25 ℃水浴保温 20 min ,取出后立即加
入 25 ℃预热的 3 mmol/ L 邻苯三酚 2 mL(以 10
mmo l/L HCl配制 ,空白管用 10 mmo l/L HCl代
替邻苯三酚的 HCl溶液),迅速摇匀倒入比色杯 ,
在 25 ℃条件下测定 325 nm 的比色值(以
T ris-HCl缓冲液为空白测定).
(2)对羟自由基(·OH-)的清除作用:按照
Smirno ff等[ 10] 的方法改进
在 3 mL 150 mmo l/L 的磷酸缓冲液中含有
0.15 mmol/ L FeSO 4-EDTA 、2 mmol/L 水杨酸
钠 、6 mmol/L H 2O 2 以及不同浓度的提取物.37
℃恒温水浴中准确反应 1 h 后 ,快速测定 510 nm
处的吸光值.
(3)对 H2O 2 诱导的小鼠红细胞氧化溶血实
验[ 11]
健康昆明种小鼠 ,雄性 ,体质量 32 g ,断头取
血 ,加适量肝素溶液制成抗凝血 , 2 000 r/min离
心 10 min ,移弃血浆和白细胞 ,往沉淀的红细胞
中加入等渗的生理盐水 ,混匀 , 2 000 r/min离心
10 min ,弃上清 ,如此反复 2次洗涤红细胞 ,将红
细胞制成 0.5%的悬浮液.取红细胞悬浮液 1
mL ,加不同浓度的提取物 ,最后加 100 mmo l/L
的 H 2O 2 ,混匀 ,37 ℃温浴 60 min ,用生理盐水稀
释 5倍 , 2 500 r/min离心 10 min , 上清液于 415
nm 比色.
(4)对小鼠肝匀浆脂质过氧化作用的测定[ 11]
健康昆明种小鼠 ,雄性 ,体质量 32 g ,断头取
血后 ,迅速分离肝组织 ,用冰冷的 T ris-HCl缓冲
液(20 mmol/L)制成 20%的匀浆 ,于 5 000 r/min
离心 20 m in ,沉淀再洗 1次并离心 ,合并上清液.
在 0.2 mol/ L 的 T ris-HCl缓冲液(pH7.4)中含
肝匀浆液 0.2 mL 、FeSO 4 10 μmol/ L 、维生素 C
0.1 mmol/ L 及不同浓度的提取物 ,在 37 ℃温浴
1 h ,保温结束后加入 20%三氯乙酸(TCA)1.0
mL 终止反应 ,混匀 ,再加入 0.67%硫代巴比妥酸
(TBA)1.5 mL ,沸水浴加热 15 min.离心去除蛋
白质沉淀后 ,于 532 nm 测定吸光值.
1.4　数据处理
计算对各自由基的清除率(I)
I =[ 1-(A3 -A2)/ A1 ] ×100%
式中:A1 为对照组吸光值 , A2 为提取物本身的吸
光值 , A3 为测定值.每组测定值重复 3次 ,结果以
x±s表示.
2　结果与分析
2.1　对超氧阴离子自由基(·O-2 )的清除作用
邻苯三酚在碱性条件下会发生自氧化 ,生成
有机中间体和超氧阴离子自由基 ,而超氧阴离子
自由基对自氧化有催化作用.角叉菜不同溶剂提
取物对邻苯三酚自氧化体系产生的自由基的清除
作用见表 1.
表 1　各角叉菜提取物对超氧阴离子自由基的清除作用
Tab.1　Scavenging effect of ex tracts from Chondrus oce llatus on supero xide free r adical
ρ/(mg·mL -1) I/ %甲醇 乙醇 乙醚 乙酸乙酯 石油醚 丙酮
3.30
1.70
0.85
61.0
58.0
53.8
58.7
57.9
54.4
71.0
67.9
64.7
61.7
59.2
57.3
55.0
54.4
51.1
59.8
58.2
55.5
注:表中浓度为提取物在反应体系中的浓度 ,各提取物起始浓度均为 0.1 g/mL
由表 1可见 , 6 种不同溶剂的提取物对超氧
阴离子自由基(·O -2 )都具有一定的清除作用 ,并
且呈明显的量效关系.提取物在体系中的最终浓
度为 3.30 mg/mL 时 ,乙醚提取物对超氧阴离子
346 大 连 理 工 大 学 学 报 第 49卷　
自由基的清除作用最大 ,清除率为 71.0%.其他
溶剂的提取物在此浓度下的清除率基本在 60%
左右 ,差别不大.
2.2　对羟自由基(·OH-)的清除作用
角叉菜不同溶剂提取物对羟自由基的清除作
用见表 2.
表 2　各角叉菜提取物对羟自由基的清除作用
Tab.2 　Scavenging effect of e xtr acts f rom Chondrus
ocellatus on hydro xy l f ree radical
溶剂 I/% 溶剂 I/ %
甲醇 22.5 乙醇 72.9
乙酸乙酯 33.6 乙醚 -
丙酮 75.8 石油醚 -
注:提取物在反应体系中的浓度为 10 mg/mL
表 2结果表明 , 6 种溶剂的提取物对羟自由
基的清除作用相差很大 ,在浓度为 10 mg/mL 时 ,
丙酮提取物的清除作用最大 ,清除率为 75.8%;
其次是乙醇提取物 ,清除率为 72.9%;乙酸乙酯
和甲醇提取物的抑制活性较低 ,清除率分别为
33.6%和 22.5%.而乙醚提取物和石油醚提取物
对羟自由基没有清除活性 ,可能是由于醚类溶剂
的极性较低 ,提取出较多的非极性物质 ,而通常的
抗氧化剂多为极性较强的不饱和物质.
2.3　对 H2O2 诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑
制作用
H2O2 与 Fe2+结合产生羟自由基(·OH -)
引发氧化作用 ,使红细胞膜损伤 ,物质外流;H2O2
自身也可引发氧化反应 ,从而引起脂质过氧化作
用而破坏细胞膜 ,导致红细胞溶血.表 3列出了角
叉菜不同溶剂提取物对 H 2O 2 诱导的小鼠红细胞
氧化溶血的抑制作用.
表 3　各角叉菜提取物对小鼠红细胞氧化溶血
的抑制作用
Tab.3　Effect o f ex tracts f rom Chondrus ocellatus on
hemolysis of rat ery thro cy tes
溶剂 I/% 溶剂 I/ %
甲醇 60.9 乙醇 50.0
乙酸乙酯 59.8 乙醚 82.6
丙酮 - 石油醚 67.4
注:提取物在反应体系中的浓度为 2.7 mg/mL
表 3结果表明 ,在样品浓度为 2.7 mg/mL
时 ,除丙酮提取物外 ,甲醇 、乙醇 、乙酸乙酯 、乙醚 、
石油醚 5种有机溶剂的提取物都具有对 H2O 2 诱
导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制作用.乙醚提取
物的抑制作用最大 ,抑制率为 82.6%,其次分别
为石油醚 、甲醇 、乙酸乙酯提取物 ,抑制率分别为
67.4%、60.9%、59.8%.对于丙酮提取物没有抑
制作用的原因还需进一步探讨.
2.4　对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用
·OH -生成系统(Fe2+ + H 2O 2 ※·OH -)
可诱导机体组织的脂质过氧化反应 ,生成丙二醛.
表 4为角叉菜不同溶剂提取物对小鼠肝匀浆脂质
过氧化的抑制作用实验结果.
表 4　各角叉菜提取物对小鼠肝匀浆脂质过
氧化的抑制作用
Tab.4 　Effect of ext racts fr om Chondrus ocellatus
on lipid pe rox ide of ra t liv er homogenate
溶剂 I/% 溶剂 I/ %
甲醇 72.4 乙醇 69.9
乙酸乙酯 77.9 乙醚 73.6
丙酮 71.9 石油醚 75.6
注:提取物在反应体系中的浓度为 4 mg/mL
结果表明:6种有机溶剂的提取物对小鼠肝
匀浆脂质过氧化都有较强的抑制作用 ,提取物浓
度为 4 mg/mL 时的抑制率均超过 50%,抑制率
最大的是乙酸乙酯提取物 ,为 77.9%,其余提取
物抑制率基本也在 70%左右.
3　结　语
角叉菜提取物具有较强的抗氧化活性 ,是一
种有效的自由基清除剂 ,但是不同溶剂的提取物
对各种自由基的清除作用有较大的差别 ,这可能
是因为溶剂的极性差异导致提取的化学成分有一
定的差别 ,从而导致对不同自由基的抑制作用的
不同 ,其作用机理还需进一步的探讨.
近年来 ,寻找天然无毒的抗氧化剂已成为药
品和食品添加剂的一个重要研究方向 ,而从藻类
提取物中寻找天然 、高效抗氧化剂是其中一个重
要方向.随着人们对海洋藻类生物活性的关注 ,藻
类提取物的研究已经得到很大进展 ,然而其结构 、
生物活性 、作用机理以及它们的相互关系还不明
确 ,也缺乏有效的检测手段 ,仍需作进一步的探
索.
347　第 3期　 周革非等:角叉菜不同溶剂提取物抗氧化活性
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Antioxidant activities of extracts by different solvents
from Chondrus ocellatus
ZHOU　Ge-fei1 , 2 , 　XING　Rong-lian1 , 　WANG　Chang-hai＊1
(1.School of Environmental and Biological Science and Technology , Dalian University of Technology , Dalian 116024, China;
2.School of Ocean, Yantai University , Yantai 264005, China)
Abstract:Chondrus ocel latus was ext racted by methano l , ethanol , e thyl ethe r , ethyl acetate ,
petroleum ethe r and ace tone , respectively .Antio xidant act ivities of these ext racts we re de termined by
scavenging ef fect on superoxide f ree radicals , hydro xide f ree radicals , H2O2 induced hemo ly sis o f rat
e ry throcy tes and lipid peroxide o f rat liver m icro some.The resul ts indicate tha t dif ferent ex t racts of
Chondrus ocel latus all show some antioxidant activities on dif ferent f ree radicals , and solvents have
some effects of ex t racts on these activi ties.A t the same concentration , ex t racts show the highest
scavenging rate on the four dif ferent f ree radicals ex t racted by ethyl ethe r , acetone , ethy l ether and
e thyl acetate , respectively.
Key words:Chondrus ocel latus;solvents;ext ract;ant ioxidant activi ties
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