全 文 ：收稿日期: 2010 -10-14;　修稿日期:2010-12-17
基金项目:国家科技部资助攻关项目(2005BA741C)
作者简介:杨智慧(1985-),女 ,硕士 ,主要从事天然产物化学成分研究 , E-mail:caienbo8251@163.com。
通信作者:郑友兰(1954-),女 ,教授 ,主要从事天然产物化学成分研究 ,通信地址:130118吉林长春市新城大街 2888号 吉林农业大学
中药材学院 , E-mail:zcx 11@126.com。
栽培与野生无梗五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究
杨智慧1 ,张崇禧 2 ,蔡恩博 1 ,李小叶1 ,李　娇 1 ,韩　雪1 ,郑友兰 1
(1.吉林农业大学中药材学院 ,长春 130118;2.山东大学威海分校海洋学院 ,山东 威海 264209)
摘要:研究不同采收期栽培与野生无梗五加叶中总黄酮及多糖含量的变化 ,为更好地开发利用无梗
五加资源提供理论依据。采用紫外分光光度法 ,以芦丁作为对照品 ,在 500nm波长下测定不同采收期
栽培与野生无梗五加叶中总黄酮的含量;采用蒽酮 -硫酸比色法 ,以葡萄糖作为对照品 ,在 620nm波长
下测定不同采收期栽培与野生无梗五加叶中可溶性多糖和粗多糖的含量;采用 SPSS16.0统计分析软件
对试验结果进行统计分析 。在 0.05mg～ 0.5mg范围内 ,芦丁质量(mg)与吸光度 A值线性关系良好 , R2
=0.9996;在 0.0208mg～ 0.104mg范围内 ,葡萄糖质量(mg)与吸光度 A值线性关系良好 , R2 =0.9996;
结论:栽培无梗五加叶中黄酮及多糖含量均略高于野生无梗五加叶但含量差异并不显著。同时从方法
学考察可知 ,本方法简便 、快速 、可靠 、易行 、重现性好 ,适合无梗五加叶总黄酮及多糖的含量测定 。
关键词:无梗五加叶;栽培与野生;总黄酮;总多糖;可溶性多糖;粗多糖
中图分类号:TS202.3;T567　文献标识码:A　文章编号:1005-1295(2011)02 -0010 -04
doi:10.3969 /j.issn.1005 -1295.2011.02.003
ComparisonStudyofTotalFlavonoidandPolysaccharidesinLeavesof
theBiomimeticandWildAcanthopanaxSessiliflorus
YANGZhi-hui1 , ZHANGChong-xi2 , CAIEn-bo1 , LIXiao-ye1 , LIJiao, HANXue1 , ZHENGYou-lan1
(1.ColegeofChineseMedicinalMaterial, JilinAgriculturalUniversity, Changchun130118, China;
2.MarineColege, ShandongUniversityatWeihai, Weihai264209, China)
Abstract:TostudythecontentoftotalflavonoidandpolysaccharidesinleavesofAcanthopanaxsessiliflo-
rusproducedindiferentgrowthstages.ToprovideatheoreticalbasisinordertobeterusetheresourceofAc-
anthopanaxsessiliflorus.ThecontentoftotalflavonoidandpolysaccharidesinAcanthopanaxsesiliflorus(Ru-
pr.etMaxim.)weredeterminedbyColorimetry.RutinandGlucosewerestandardpreparation, andwave
lengthwere500nmand620nm.ThestatisticalanalysiswasperformedwithSPSS16.0.ThemassofRutin
(mg)andAbswerelinearintherangeof0.05mg-0.5mg, R2 =0.9996.Themassofglucose(mg)and
Abswerelinearintherangeof0.0208mg-0.104mg, R2 =0.9996.Thecontentsoftotalflavonoidandpoly-
saccharidesinleavesofbiomimeticAcanthopanaxsessiliflorusshowedapparentlyhigherthanthatinleavesof
wildAcanthopanaxsessiliflorus.Thediferencesofthepolysacharidesandtotalflavonoidbetweenwildandsim-
ulatingsamplesarenotobvious.Themethodwassimple, quick, accurate, canbeusedtodeterminethecon-
tentoftotalflavonoidandpolysaccharidesintheleavesofAcanthopanaxsessiliflorus(Rupr.etMaxim).
Keywords:Acanthopanaxsessiliflorus;biomimeticandwild;totalflavonoid;totalpolysaccharides;sol-
ubilitypolysaccharides;crudepolysaccharides
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包装与食品机械　2011年第 29卷第 2期
　　无梗五加 [ Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.
etMaxim)Seem]为五加科五加属植物。性温 ,
味辛 , 无毒 ,具滋补强壮 、祛风除湿 、抗炎 、解热
镇痛等功效 [ 1] 。本草记载:无梗五加的根皮即
五加皮是我国传统中药 ,具有祛风湿 、补肝肾 、
强筋骨 、活血脉等功效 [ 2] 。目前 ,国内外的专家
学者对其根的研究颇多 ,但对其叶的研究则甚
少 [ 3] 。
据有关文献报道 ,多糖和黄酮类化合物是具
有广泛生物活性的植物活性成分。黄酮具有耐缺
氧作用 ,无梗五加黄酮可增加冠脉流量并有抗心
肌缺血的作用 ,主要表现为扩张血管 、降低血压 、
改善冠状动脉循环 [ 4] 。无梗五加多糖对抗肿瘤 、
清除自由基 、抗疲劳 、耐缺氧及提高免疫调节能力
等都具有一定功效 [ 5] 。因此 ,不仅无梗五加叶中
黄酮及多糖的测定为临床应用奠定了基础 ,而且
对不同生长环境下无梗五加叶中活性成分的比较
分析又为开辟新的药源途径提供依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
无梗五加叶于 2009年采自吉林临江 ,经专家
鉴定为五加科 (Araliaceae)五加属 (Acantho-
panax)植物无梗五加的干燥叶 ,样品来源见表 1。
表 1　无梗五加叶的样品来源
采收日期 样品类别 采收日期 样品类别
2009-05-29 栽培 2009-07-23 栽培
2009-05-29 野生 2009-07-23 野生
2009-06-08 栽培 2009-08-02 栽培
2009-06-08 野生 2009-08-02 野生
2009-06-29 栽培 2009-08-12 栽培
2009-06-29 野生 2009-08-12 野生
1.2　仪器
T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通
用仪器有限责任公司);LA114型电子天平 (精
度:0.0001g, 常熟市百灵天平仪器有限公司);电
子恒温水浴锅 (天津泰斯特仪器有限公司);101
– 2型数显电热鼓风干燥箱(上海锦屏仪器仪表
有限公司)。
1.3　试剂
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批
号:086 -9303);葡萄糖 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢
氧化钠 、蒽酮 -浓硫酸 、乙醇等均为分析纯 。
2　方法
2.1　标准溶液的制备
2.1.1　芦丁标准溶液的制备
将芦丁标准品置于 105℃烘箱中恒重 6h,精
密称取 10.00mg,加入 80%乙醇 50ml溶解并定容
于 100mL容量瓶中 ,摇匀 ,备用。
2.1.2　葡萄糖标准溶液的制备
将葡萄糖置于 60℃烘箱中 1h,再逐渐升温至
105℃干燥至恒重。精密称取 10.40mg置 100mL
容量瓶中 ,并用蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 ,备用 。
2.2　标准曲线的绘制
2.2.1　黄酮标准曲线的绘制
分别精密量取芦丁标准溶液 0.0、0.5、1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0mL置于 25mL容量瓶中 ,分别
加入 80%乙醇 5.0mL,加入质量分数为 5%的亚
硝酸钠溶液 1.0mL,摇匀 ,静置 6min;加入质量分
数为 10%的硝酸铝溶液 1.0mL,摇匀 ,静置 6min,
加入质量分数为 4%的氢氧化钠溶液 10mL,用
80%的乙醇定容至刻度 , 摇匀 ,放置 15min。以
80%乙醇作空白 ,于 500nm波长处测定吸光度。
以吸光度值 A为纵坐标 ,浓度 (mg/mL)为横坐
标 ,绘制标准曲线 , 得回归方程 y=0.0468x-
0.0128 (R2 =0.9996),结果表明 ,芦丁检测浓度
在 0.002 ～ 0.020 mg/mL(0.05 ～ 0.5mg)范围内
与吸光度值成良好的线性关系 。
2.2.2　多糖标准曲线的制备
分别精密量取葡萄糖标准溶液 0.0、0.2、0.4、
0.6、0.8、1.0mL置于具塞试管中 ,分别加入蒸馏
水 1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.0mL置于上述试管中 ,
再各加入蒽酮 -浓硫酸溶液 5.0mL摇匀 ,静置 ,
于 620nm处测定吸光度值 ,记录数据 ,试验平行 3
次 。以吸光度 A为纵坐标 ,质量 mg为横坐标 ,绘
制标准曲线 ,其回归方程为 y=5.0817x+0.0327
﹙ R2 =0.9996﹚ ,结果表明 ,葡萄糖检测质量在
0.0208 ～ 0.104mg范围内线性关系良好 。
2.3　样品待测溶液的制备
2.3.1　总黄酮待测液的制备
精密称取各采收期的无梗五加叶样品各 0.5g
(恒重),各称取 3份(3次平行),分别置于 50mL
具塞锥形瓶中 ,在各锥形瓶中精密加入 80%乙醇
30mL,浸泡一夜 ,密塞超声提取 30min,超声 3次 ,
合并提取液 ,摇匀 ,过滤 ,滤液至 100mL容量瓶中
11
栽培与野生无梗五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究——— 杨智慧 ,张崇禧 ,蔡恩博 , 李小叶 ,李娇 , 韩雪 ,郑友兰
定容 ,再从中移取上述溶液 1.0mL置于 25mL容
量瓶中 ,分别加入 80%乙醇 5mL,并按 “2.2.1”项
下的方法依次加入显色剂 ,以 80%乙醇为空白 ,
同法配制空白对照液 ,待测 。
2.3.2　可溶性多糖待测液的制备
精密称取无梗五加叶样品 0.5g(恒重),各采
收期的样品都称取 3份 (3次平行), 分别置于
50mL具塞三角瓶中 ,加 80%乙醇 30mL,浸泡一
夜 ,密塞超声提取 30min,超声 3次 ,过滤(保存滤
渣),合并滤液置 100mL容量瓶中 ,以 80%乙醇定
容至刻度。再移取上述提取液 5.0mL,分别置于
25mL容量瓶中 ,用 80%的乙醇定容至刻度 , 混
匀 。再从定容后的溶液中分别取 1.0mL溶液加
入具塞试管中 ,再加入蒽酮 -浓硫酸试剂 5.0mL,
混匀 ,同时另取一支具塞试管加 80%乙醇1.0mL,
加入蒽酮 -浓硫酸试剂 5.0mL,作为空白对照。
置沸水浴中加热 10min,冷却至室温 ,待测。
2.3.3　粗多糖待测液的制备
将制备可溶性多糖待测液时保存的滤渣蒸
干 ,加 2%的盐酸 30mL,置沸水浴中提取 lh,充分
放冷 ,于 100 mL容量瓶中 ,重复提取 3次 ,过滤 ,
洗涤滤纸 ,以 2%HCl定容至刻度 。从定容后的
100mL提取液中各取 2.5mL溶液 , 分别置于
25mL容量瓶中 ,用 2%的盐酸定容至刻度 ,混匀 ,
再从定容后的 25mL提取液中分别量取 1.0mL粗
多糖提取液加入具塞试管中 ,再加入蒽酮 -浓硫
酸试剂 5.0mL,混匀 ,同时另取一支具塞试管加入
2%的盐酸 1.0mL, 再加入蒽酮 -浓硫酸试剂
5.0mL,混匀 , 作空白对照 。置沸水浴中加热
10min,冷却至室温 ,待测。
3　结果与分析
3.1　方法学考察
3.1.1　精密度试验
分别精密称取已知总黄酮和总多糖含量的无
梗五加叶粉末各 0.5 g,按样品测定操作连续测 5
次 ,测得吸光度并计算含量 , RSD分别为 0.28%
和 0.23%(n=5)。
3.1.2　稳定性试验
取已知总黄酮和总多糖含量的无梗五加叶样
品 ,分别于 0、4、8、12、16 h测吸光度 , RSD分别为
1.26%和 1.45%,结果表明供试品溶液在 16 h内
吸光度值基本稳定(n=5)。
3.1.3　重复性试验
称取已知总黄酮和总多糖含量的无梗五加叶
样品(平行 5次),制备样品溶液 ,进样测定 , RSD
分别为 1.98%和 1.76%(n=5)。
3.1.4　回收率试验
称取已知总黄酮和总多糖含量的无梗五加叶
粉末各 0.5g,称取 5份 ,置于磨口三角瓶中 ,分别
加入芦丁标准品溶液 2.0mL和葡萄糖标准品溶
液 0.5mL,按前述样品处理法处理 ,并按样品测定
项操作 ,计算黄酮与多糖的含量和回收率 ,平均回
收率分别为 101.06%和 100.32%, RSD分别为
0.77%和 0.64%(n=5)。
3.2　试验结果
无梗五加叶总黄酮 、可溶性多糖 、粗多糖及总
多糖含量见表 2。
表 2　无梗五加叶样品中总黄酮及多糖含量测定结果 (%)
采收日期 部位 来源 黄酮 可溶性多糖 粗多糖 总多糖
2009-05-29 叶 栽培 6.900 4.525 15.768 20.293
2009-06-08 叶 栽培 2.655 2.643 22.419 25.062
2009-06-29 叶 栽培 2.769 2.098 21.251 23.349
2009-07-23 叶 栽培 1.060 8.973 21.488 30.461
2009-08-02 叶 栽培 4.350 4.729 17.499 22.228
2009-08-12 叶 栽培 5.419 4.545 16.292 20.837
2009-05-29 叶 野生 1.573 1.278 17.604 18.882
2009-06-08 叶 野生 2.741 3.509 18.510 22.019
2009-06-29 叶 野生 2.541 2.748 14.062 16.810
2009-07-23 叶 野生 1.587 1.462 11.963 13.425
2009-08-02 叶 野生 1.687 1.908 17.775 19.683
2009-08-12 叶 野生 1.658 5.804 21.697 27.501
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包装与食品机械　2011年第 29卷第 2期
3.3　结果与分析
采用 SPSS16.0统计软件对试验结果进行统
计分析 ,如表 3所示 。
　　由表 3可知 ,栽培无梗五加叶中黄酮和多糖
含量的平均值均高于野生品且含量差异并不显著
(Sig.(2 -tailed)>0.05),因此 ,可以将栽培无梗
五加叶代替野生无梗五加叶应用 ,将会极大地改
善野生资源严重不足的状况。
4　小结与讨论
　　(1)无梗五加叶黄酮含量在 5月下旬达到最
高值 ,而在 5月至 8月间呈现不规则变化;可溶性
多糖在 7月下旬含量最高 ,粗多糖在 6月中下旬
含量达到最高值 。随着天气转冷 ,叶子枯黄凋落 ,
其黄酮和多糖含量基本呈下降趋势 ,这种起伏变
化可能与当时的天气(温度 、雨水)等情况有关 。
　　(2)无梗五加不仅可作药用还可食用 ,是具
有潜在开发价值的药用植物 。近年来 ,随着市场
需求量的逐渐增加 ,造成该植物渐渐面临濒危的
边缘 ,通过本试验得知栽培品种黄酮和多糖含量
均高于野生品种 ,这对于无梗五加的持续利用 ,加
大栽培品种的开发具有重大意义。
参考文献:
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物活性的研究 [ J] .食品科学 , 2008, 29(4):378 -
380.
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栽培与野生无梗五加叶中黄酮及多糖含量的比较研究——— 杨智慧 ,张崇禧 ,蔡恩博 , 李小叶 ,李娇 , 韩雪 ,郑友兰