全 文 ：基金项目:国家科技部资助攻关项目(2005BA741C)
作者简介:蔡恩博,男 ,硕士 ,实验师　　研究方向:天然产物化学成分研究　　＊通讯作者:郑友兰 ,女 ,教授　　研究方向:天然产物化学成分
研究　　Tel:(0431)84533087-8005　　E-mail:zcx 11@ 126.com
不同采收期刺五加叶与无梗五加叶活性成分分析
蔡恩博 1 ,张崇禧 2 ,雷冰1 ,陆珞 1 ,韩佳宏 1 ,郑友兰 1＊(1.吉林农业大学中药材学院 ,长春 130118;2.山东大学威海分校海洋学
院 ,山东威海 264209)
摘要:目的　探讨刺五加叶与无梗五加叶的最佳采收期 , 比较二者金丝桃苷 、紫丁香苷及微量元素含量的差异, 从而区分两个相
近种的差异 ,并讨论二者混用的弊端。方法　采用高效液相色谱法测定金丝桃苷及紫丁香苷含量 ,采用原子吸收光谱法测定微
量元素含量 ,采用 SPSS16.0软件对测定结果进行统计分析。结果　刺五加叶中紫丁香苷与金丝桃苷含量明显高于无梗五加叶 ,
且在 6月 21日和 7月 6日达到最高值, 分别为 0.311 1%与 0.686 8%。无梗五加叶中微量元素含量高于刺五加叶 ,其中 ,铁在 6
月 5日达到最高值 ,锰 、锌、铜在 6月 21日达到最高值。结论　刺五加叶的最佳采收期为 6月 21日至 7月 6日 ,无梗五加叶的最
佳采收期为 6月 5日至 6月 21日。二者活性成分含量存在显著差异 ,刺五加叶适于药用 ,而无梗五加叶适于食用。
关键词:刺五加叶;无梗五加叶;金丝桃苷;紫丁香苷;微量元素;食品
中图分类号:R282　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)03-0175-04
AnalysisoftheActiveIngredientoftheLeavesinDiferentColectingTimeofAcanthopanaxsenticosusand
Acanthopanaxsessiliflorus
CAIEn-bo1 , ZHANGChong-xi2 , LEIBing1 , LULuo1 , HANJia-hong1 , ZHENGYou-lan1＊(1.ColegeofChinese
MedicinalMaterial, JilinAgriculturalUniversity, Changchun130118, China;2.MarineCollege, ShandongUniversity, Weihai
264209, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToevaluatatheoptimumcolectingtimeofAcanthopanaxsenticosusleavesandAcanthopanaxsessiliflorus
leaves, andcomparethediferencesofhyperin, syringinandtraceelements, inordertodistinguishbetweenthetwosimilarspeciesand
discussthedisadvantagesofconfusion.METHODS　ThecontentsofhyperinandsyringinweredeterminedbyHPLC, andthecon-
tentsoftraceelementsweredeterminedbyflameatomicabsorptionspectrophotometry.Thestatisticalanalysiswasperformedwith
SPSS16.0.RESULTS　ThecontentofhyperinandsyringininAcanthopanaxsenticosusleavesshowedapparentlyhigherthanthatin
Acanthopanaxsessiliflorusleaves.Thehighestcontentsofsyringinreached0.311 1% onJune21standhyperinreached0.686 8% on
July6th.ThecontentsoftraceelementsinAcanthopanaxsessiliflorusleaveswereapparentlyhigherthanthatinAcanthopanaxsenticosus
leaves.ThecontentsofironreachedthehighestpointonJune5th.Thecontentsofmanganese, zincandcopperreachedthehighest
contentonJune21st.CONCLUSION　TheoptimumcolectingtimeofAcanthopanaxsenticosusleavesisfromJune21sttoJuly6th,
whileAcanthopanaxsessiliflorusleavesisfromJune5thtoJune21st.Thediscrepancyofactiveingredientbetweenthemareobvious, so
thattheyarenotsuitableforbeingmixed.TheAcanthopanaxsenticosusleavesaresuitableformedicinalmaterials, andtheAcantho-
panaxsessiliflorusleavesaresuitableforfood.
KEYWORDS:Acanthopanaxsenticosusleaves;Acanthopanaxsessiliflorusleaves;hyperin;syringin;traceelements;food
　 　刺 五 加 [ Acanthopanaxsenticosus(Rupr.et
Maxim.)Harms]与无梗五加 [ Acanthopanaxsesiliflo-
rus(Rupr.etMaxim.)Seem.]均为五加科(Araliace-
ae)植物 ,前者具有益气健脾 、补肾安神之功效[ 1-2] ,
后者根皮为我国传统中药 ,具有滋补强壮 、祛风除湿
等功效[ 3] 。因刺五加与无梗五加的根 、茎和叶在形
态上没有明显差异 [ 4] ,所以易将二者混用。本实验
通过测定二者在不同时期金丝桃苷 、紫丁香苷及微
量元素的含量 ,以确定最佳采收期 ,并考察二者活性
成分的差异 ,为二者的开发方向提供科学参考依据 。
1　实验材料
1.1　药材
刺五加叶与无梗五加叶均于 2008年采自临江 ,
经吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为五加科
五加属植物刺五加与无梗五加的干燥叶。
·175·中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 3期　　　 　 　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.3
1.2　仪器
ALLTECH高效液相色谱仪 、3510型原子吸收
分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、VELP
凯氏定氮仪消化炉 、百灵 LA114型电子天平(常熟
市百灵天平仪器有限公司)等 。
1.3　试剂
甲醇 、乙腈(色谱纯),硝酸 、高氯酸(优级纯),
去离子水 ,金丝桃苷对照品(成都曼思特生物科技
有限公司),本实验室自制紫丁香苷 ,白色针晶 , mp
190 ～ 192 ℃(甲醇),三氯化铁-铁氰化钾显色反应
呈阳性 ,示存在酚羟基;Mo1ish反应阳性 ,示存在糖
基。主要质谱峰 m/z395.2, 由于糖苷类化合物在
正离子谱中主要以和 Na+形成加和离子峰 [ M +
Na] +的形式出现 ,由此可以断定化合物的相对分子
质量 372,与文献报道紫丁香苷的相对分子质量相
吻合 。m/z364为 [ 395 -CH3 O] , m/z232.2为
[ 395 -glc] ,这与紫丁香苷(紫丁香 -β-葡萄糖苷)的
结构完全符合 。与对照品紫丁香苷同板 3种不同展
开剂(A、B、C)共薄层 ,二者的 Rf值 、颜色均一致。
且与对照品混合熔点不下降 。因此 ,化合物鉴定为
紫丁香苷(syringin),纯度为 98.9%。
2　实验方法与结果
2.1　高效液相色谱法测定金丝桃苷含量
2.1.1　色谱条件　色谱柱:ODS-C18(4.6 mm×250
mm, 5 μm);流动相:甲醇-0.1%乙酸 (55∶45);流
速:1.0 mL·min-1;柱温:30 ℃;检测波长:360 nm;
进样量:10 μL。
2.1.2　样品液制备　将不同采收期的刺五加叶与
无梗五加叶分别干燥并粉碎 ,过 100目筛。恒重后
分别精确称定样品粉末各 0.500 0 g,精密加入甲醇
20 mL, 称重 ,记录质量 , 浸 12 h后 , 超声处理 30
min,静置至室温 ,补足质量 ,过滤后取续滤液备用 。
2.1.3　对照品溶液的制备　精确称取金丝桃苷对
照品 2.0 mg置于 10 mL量瓶中 ,用甲醇溶解定容 ,
制成质量浓度为 0.2 g· L-1的金丝桃苷对照品溶
液。
2.1.4　线性关系考察　吸取 “ 2.1.3”对照品溶液 ,
分别进样 2, 4, 8, 12, 16 μL,按 “ 2.1.1”色谱条件
测定峰面积。以金丝桃苷峰面积 Y为纵坐标 ,进样
量 X为横坐标 ,绘制标准曲线并进行线性回归 ,计
算得回归方程为 Y=2.975 17 ×105X-1.416 36 ×
10
5 , r2 =0.999 5。结果表明 ,金丝桃苷在 0.4 ～ 3.2
μg内线性关系良好。
2.1.5　重现性实验　分别重复制备采集于 2008年
5月 6日的刺五加叶和无梗五加叶供试品液 5次 ,
进样测定 ,金丝桃苷峰面积的 RSD分别为 1.92%和
1.96%(n=5)。
2.1.6　精密度实验　将 5月 6日的刺五加叶和无
梗五加叶供试品液连续进样 5次 ,测金丝桃苷的峰
面积 ,得 RSD分别为 1.47%和 1.65%(n=5)。
2.1.7　稳定性实验　将 5月 6日的刺五加叶和无
梗五加叶供试品液每 2 h进样测定金丝桃苷的峰面
积一次 ,结果表明 ,样品在 24 h内稳定 ,计算得出
RSD分别为 0.83%和 1.02%(n=5)。
2.1.8　回收率实验　采取加样回收法 。将 5月 6
日的刺五加叶和无梗五加叶供试品液精密加入金丝
桃苷对照品溶液 1.0 mL。制备样品并测定样品中
金丝桃苷的峰面积 , 计算得出平均回收率分别为
101.08%和 98.46%, RSD分别为 1.63%和 1.47%
(n=5),表明结果准确可靠 。
2.2　高效液相色谱法测定紫丁香苷含量
2.2.1　色谱条件　色谱柱:ODS-C18(4.6 mm×250
mm, 5 μm);流动相:乙腈 -水 (20∶80);流速:1.0
mL·min-1;柱温:25 ℃;检测波长:265 nm;进样量:
10 μL。
2.2.2　样品液制备　将不同采收期的刺五加叶与
无梗五加叶分别干燥并粉碎 ,过 100目筛 。恒重后
精确称定两种样品粉末各 2.000 0 g,精密加入甲醇
30 mL,称重 , 记录质量 , 浸 12 h后 , 超声处理 30
min,静置至室温 ,补足质量 ,过滤后取续滤液备用。
2.2.3　对照品溶液的制备　精密称取紫丁香苷对
照品 1.5 mg,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇使溶解定容 ,
制成 0.15 g·L-1紫丁香苷对照品溶液 。
2.2.4　线性关系的考察　取紫丁香苷对照品溶液 ,
分别进样 2, 4, 8, 12, 16 μL,按 “2.1.1”色谱条件
测定峰面积 。以紫丁香苷峰面积 Y为纵坐标 ,进样
量 X为横坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得回归方程为
Y=1.252 80 ×105X+5.818 2 ×104 , r2 =0.999 4。
结果表明 ,紫丁香苷在 0.3 ～ 2.4 μg内线性关系良
好 。
2.2.5　重现性实验　分别重复制备 5月 6日的刺
五加叶和无梗五加叶供试品液 5次 ,进样测定 ,紫丁
香 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1.90% 和
1.76%(n=5)。
2.2.6　精密度实验　将 5月 6日的刺五加叶和无
梗五加叶供试品液连续进样 5次 ,测紫丁香苷的峰
面积 ,得 RSD分别为 1.18%和 0.94%(n=5)。
·176· ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.3　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 3期
2.2.7　稳定性实验　将 5月 6日的刺五加叶和无
梗五加叶供试品液每隔 2 h进样 1次 ,测定紫丁香
苷峰面积 ,结果表明 ,样品在 24 h内稳定 ,得出 RSD
分别为 1.56%和 1.62%(n=5)。
2.2.8　回收率实验　采取加样回收法。将 5月 6
日的刺五加叶和无梗五加叶供试品液精密加入紫丁
香苷对照品溶液 1.0 mL, 制备供试品溶液 , 按
“2.1.1”色谱条件测定 ,计算回收率 ,结果平均回收
率分别为 98.54%和 101.29%, RSD分别为 1.72%
和 1.89%(n=5)。
2.3　原子吸收光谱法测微量元素含量
2.3.1　样品制备及仪器工作条件的选定　将刺五
加叶与无梗五加叶样品粉碎后过 80目筛。恒重后
精密称取 2.000 0 g粉末置于凯氏瓶中 ,精密加入混
酸(HNO3 -HClO4 =5∶1)20 mL,浸泡 12 h后置于
VELP凯氏定氮仪消化炉上消煮 ,冷却后用去离子
水定容至 50 mL。仪器工作条件见表 1。
2.3.2　方法准确度考察　为了考察方法的准确度 ,
我们对 5月 6日所采的刺五加叶与无梗五加叶做了
4种元素加标回收实验 ,计算加标回收率 ,两种样品
各元素回收率在 98.44%到 102.36%(n=5)之间 ,
能满足实验的要求 ,证明方法准确可靠 。
2.4　含量测定结果
不同采收期刺五加叶与无梗五加叶主成分含量
测定结果见表 2,微量元素含量测定结果见表 3,统
计分析结果见表 4。
表 1　仪器的工作条件
Tab.1　Workingconditionsoftheinstrument
Elements Wavelength/nm
Lampcurent
/mA
Bandwidth
/nm
Burner
height
/mm
Flowrateof
acetylene
/L· min-1
Fe 248.2 8.0 0.2 6 1.5
Mn 279.4 8.0 0.2 6 1.5
Zn 213.7 8.0 0.7 6 1.5
Cu 324.8 8.0 0.7 6 1.5
3　讨　论
3.1　利用 SPSS统计软件 ,从表 4我们看出以金丝
桃苷等成分为指标做 t检验(n=9), P值都普遍小
于 0.05,说明刺五加与无梗五加活性成分存在显著
差异 ,不应将二者混用 。
3.2　从表 2可以看出 ,叶的整个生长周期内刺五加
金丝桃苷及紫丁香苷含量都明显高于无梗五加 ,所
以刺五加叶适于药用 。将无梗五加叶混入刺五加叶
　　
表 2　不同采收期刺五加叶与无梗五加叶主成分含量
Tab.2　Contentsofactiveingredientindiferentcolectingtime
ofAcanthopanaxsenticosusleavesandAcanthopanaxsessiliflorus
leaves.
Colecting
time
Hyperin/% Syringin/%
A.senticosus A.sesiliflorus A.senticosus A.sesiliflorus
May6th 0.311 2 0.178 8 0.129 8 0.245 4
May21st 0.362 0 0.195 6 0.104 6 0.241 2
June5th 0.452 8 0.356 0 0.264 2 0.223 2
June21st 0.670 8 0.542 8 0.311 1 0.275 4
July6th 0.686 8 0.488 8 0.253 8 0.231 7
July24th 0.443 2 0.328 4 0.265 2 0.174 9
Augest12nd 0.596 4 0.316 8 0.246 5 0.230 6
Augest27th 0.462 8 0.357 6 0.206 9 0.126 3
September12nd 0.450 4 0.314 4 0.160 5 0.098 1
表 3　不同采收期刺五加叶与无梗五加叶中微量元素含量
Tab.3　Contentsoftraceelementindifferentcolectingtimeof
AcanthopanaxsenticosusleavesandAcanthopanaxsessiliflorus
leaves
Colecting
time
A.senticosusleaves/×10-6 A.sessiliforusleaves/×10-6
Fe Mn Zn Cu Fe Mn Zn Cu
May6th 296.00 21.88 36.60 8.58 300.25 27.80 35.85 10.30
May21st 195.55 19.28 33.15 8.93 258.75 25.30 27.28 7.48
June5th 389.75 0.50 24.60 6.03 463.00 24.03 27.43 6.45
June21st 212.18 16.53 32.43 12.18 348.25 45.23 36.43 10.93
July6th 90.95 13.65 22.40 5.00 129.98 14.65 31.53 8.85
July24th 94.25 15.78 22.93 5.18 100.08 16.13 30.80 4.25
August12nd 120.95 19.18 23.58 6.63 130.80 24.65 34.75 4.50
August27th 180.63 20.30 20.20 5.33 199.73 26.73 33.90 5.25
Septumber12nd 176.48 24.43 22.33 4.73 175.63 26.83 33.23 6.63
表 4　刺五加叶与无梗五加叶化学成分 t检验结果.n=9
Tab.4　StatisticanalysisofAcanthopanaxsenticosusleavesandAcanthopanaxsessiliflorusleaves.n=9
Chemical
composition
Homogeneity
testofvariances
Levenestestforequalityofvariances
F Sig. Sig.(2-tailed)
Hyperin Equalvariancesasumed 0.404 0.534 0.021
Equalvariancesnotasumed 0.021
Mn Equalvariancesasumed 0.054 0.819 0.029
Equalvariancesnotasumed 0.030
Zn Equalvariancesasumed 5.307 0.035 0.020
Equalvariancesnotasumed 0.023
·177·中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 3期　　　 　 　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.3
中作为药材会明显降低药材的质量及它的药效。 6
月 21日至 7月 6日为刺五加叶的最佳采收期 。
3.3　从表 3可以看出 ,无梗五加叶做食用可使人们
获得更多的微量元素 ,起到营养 、保健等作用 。无梗
五加叶中微量元素含量在 6月 5日至 6月 21日达
到最高 ,因此 ,这段时间为无梗五加叶的最佳采收
期。
3.4　刺五加叶中金丝桃苷含量无论在哪一采收期
都明显高于无梗五加 ,而且含量较高 。药理实验表
明 ,金丝桃苷具有提高动物耐低压缺氧的能力和镇
静效果 ,并对垂体后叶素引起的急性心肌缺血有保
护作用。另外 ,金丝桃苷还对缺血性脑损伤有很好
的保护作用[ 5] 。因此 ,建议将刺五加叶作为入药部
位 、以金丝桃苷含量作为指标 ,这样能更好的评价刺
五加的质量 。
REFERENCES
[ 1] 　Ch.P(2005)VolⅠ (中国药典 2005年版 .一部)[ S].2005:
144.
[ 2] 　StateAdministrationofTraditionalChineseMedicineChineseMa-
teriaMedicaEditorialBoard.ChineseMateriaMedica(中华本草)
[ M] .Shanghai:ShanghaiScienceandTechnologyPublishing
House, 1997:760.
[ 3] 　LIUSE.MedicinalFloraoftheNortheast(东北药用植物志)
[M].Beijing:SciencePress, 1959:134.
[ 4] 　HAYN, GAOFL.IdentificationandapplicationofAcanthopanax
sessiliflorus[ J] .HeilongjiangJTraditChinMed(黑龙江中医
药), 1991, 35(4):50-51.
[ 5] 　CAOJG, ZHAOZH, YANGFJ, etal.Determinationofhyperin
intheleavesofAcanthopanaxsenticosus[ J].ChinBulBot(植物
学通报), 2005, 22(2):203-206.
(收稿日期:2009-04-27)
基金项目:国家杰出青年科学基金资助项目(30325047);广西自然科学基金资助项目(桂科自 0447040)
作者简介:谭小明,男 ,硕士 ,助理研究员　　研究方向:药用植物菌根生物学研究　　＊通讯作者:郭顺星 ,男 ,研究员 ,博士生导师　　研究方
向:药用植物菌根物学研究　　Tel:(010)62829619　　E-mail:sxguo2006@yahoo.com.cn
广西金线莲内生真菌的分离及抗菌活性研究
谭小明 1 , 郭顺星 2＊ , 周雅琴 1 , 余丽莹 1(1.广西药用植物园 ,南宁 530023;2.中国医学科学院-北京协和医学院药用植物研究所药
用植物菌根研究室 ,北京 100094)
摘要:目的　研究广西野生金线莲内生真菌的抗菌活性 , 旨在获得有良好抗菌活性的菌株 , 以寻找新型抗菌物质。方法　以
金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌和白色念珠菌为实验菌株 ,用琼脂块法和纸片扩散法对分离的真菌进行了抑菌实验。结果　从广
西野生金线莲植物中共分离到 23株内生真菌 , 其中有 6株真菌对至少 1种实验菌株有抗菌活性 ,占总分离菌株的 26.0%。结
论　广西野生金线莲内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质 , 这可为寻找新型抗菌物质提供资源。
关键词:药用植物;内生真菌;抗菌活性
中图分类号:R931　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)03-0178-04
IsolationofEndophyticFungifromAnoectochiusrroxburghi(wal.)lindlandItsAntimicrobialActivity
TANXiao-ming1 , GUOShun-xing2＊ , ZHOUYa-qin1 , YULi-ying1 (1.BotanicalGardenofMedicinalPlant, Nanning
530023, China;2.MycorrhizalDepartmentofMedicinalPlantDevelopment, ChineseAcademyofMedicinalSciencesandPekingUnion
MedicalCollege, Beijing100094, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToisolateandinvestigatetheendophyticfungifrommedicinalplantAnoectochiusrroxburghii(wal.)
lindl.METHODS　Staphylococcusaureus, Escherichiacoli, Candidaalbicanswereselectedastheindicatorsforhumanpathogenic
microbes.Antimicrobialtestsoftheisolatedendophyticfungiwerecarriedoutbyagarblockanddiscdifusion.RESULTS　Among
23 strainsofendophyticfungiisolatedfromA.roxburghi, sixstrains(26.0% ofthetotalstrainsisolated)showedtheantimicrobial
activityagainstoneormoreofthreehumanpathogenicmicrobes.CONCLUSION　Diverseantimicrobialnaturalproductsareexisted
inendophyticfungifromA.roxburghii, whichcanbetheresourcesfornewantimicrobialproducts.
KEYWORDS:medicinalplant;endophyticfungi;antimicrobialactivity
·178· ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.3　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 3期