全 文 ：［作者单位］ 1. 河北医科大学第四医院皮肤科，河北 石家庄 050011;2. 浙江萧山医院皮肤科，浙江 杭州 311202
氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬治疗系统性
普通裂褶菌感染小鼠模型的观察
万力1，张金芳1，任强强2，林元珠1
［摘 要］ 目的 观察氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬治疗系统性普通裂褶菌感染的疗效。方法 建立小鼠系统性
普通裂褶菌感染模型，观察给药后小鼠的生存率、中位生存时间、组织逆培养阳性率、肝脏组织载菌量。
结果 氟康唑组、伊曲康唑组、特比萘芬组、生理盐水对照组小鼠 21d观察期内生存率分别为64． 00%，
68． 00%，20． 00%，12． 00%;中位生存时间分别为 ＞ 21d，＞ 21d，11d和 8d;肝脏组织逆培养阳性率分别
为 60． 00%，68． 00%，100． 00%，100． 00%;肝脏组织载菌量分别为 19． 533 ± 4． 121，20． 706 ± 5． 193，
32． 920 ± 8． 485，36． 520 ± 9． 138。结论 氟康唑和伊曲康唑在小鼠体内均有较好的抗普通裂褶菌活
性，而特比萘芬效果较差，氟康唑与伊曲康唑之间无疗效差别。
［关键词］ 氟康唑;伊曲康唑;特比萘芬;普通裂褶菌，系统性;感染;小鼠
［中图分类号］ R 519 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1001 － 7089(2011)06 － 0415 － 04
Therapy of Fluconazole，Itraconazole，Terbinafine in Mice Model with Systemic Infection of Schizophyllum com-
mune
WAN Li1，ZHANG Jin-fang1，REN Qiang-qiang2，LIN Yuan-zhu1
(1. Department of Dermatology，Fourth Affiliated Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050011，China;
2. Department of Dermatology，Xiaoshan Hospital of Zhejiang，Hangzhou 311202，China)
［Abstract］ Objective To investigate the efficacy of Fluconazole，Itraconazole，Terbinafine for systemic infection of
Schizophyllum commune in mice model． Methods Mice model suffered from systemic infection of Schizo-
phyllum commune were established on and their survival rates，median survival time，Fungal retro-culture，
fungal burden of liver of mice were observed after administration． Results During the observation period，
the survival rates of Fluconazole group，Itraconazole group，Terbinafine group and control group were
64． 00%，68． 00%，20． 00%，12． 00% respectively;the median survival time were ＞ 21d，＞ 21d，11d and
8d;Fungal retro-culture of liver were 60． 00%，68． 00%，100． 00%，100． 00%;fungal burden of liver were
19． 533 ± 4． 121，20． 706 ± 5． 193，32． 920 ± 8． 485，36． 520 ± 9． 138． Conclusion Fluconazole and Itracon-
azole show good activity against Schizophyllum commune in vivo． Terbinafine is ineffective in vivo． There are
no significant difference between the therapy of Fluconazole and Itraconazole ．
［Key words］ Fluconazole;Itraconazole;Terbinafine;Schizophyllum commune，systemic;Infection;Mouse
普通裂褶菌(Schizophyllum commune)属担子菌
纲，伞菌目，裂褶菌科，裂褶菌属，广泛分布于自然界。
在临床致病方面，以吸入其孢子引起过敏反应比较常
见。2002 年 RuiKano［1］首次报道普通裂褶菌感染犬齿
动物狗引起颈部皮下真菌性肉芽肿结节，2008 年和
2009 年 Tanaka等［2］和 Mori等［3］分别报道 1 例普通裂
褶菌感染致狗真菌性骨髓炎。2009 年我国台湾地区
jun-NengRoan等［4］报道 1 例心脏移植术后普通裂褶菌
感染致无症状性肺部结节，本科 2008 年从一位心脏搭
桥术后患变应性支气管肺真菌病(ABPM)患者的痰液
中多次分离出普通裂褶菌。笔者进行了氟康唑、伊曲
康唑、特比萘芬治疗系统性裂褶菌感染的动物实验研
究，以探寻治疗该菌所致系统感染的最佳药物。
1 材料与方法
1． 1 实验菌株 河北医科大学第四医院皮肤科真菌
室保存菌株，分离自 1 例冠状动脉搭桥术后患变应性
支气管肺真菌病(ABPM)患者的痰液，并经中国科学
院微生物研究所鉴定为普通裂褶菌(编号 S-003) ，于
－ 80℃冰箱冻存。
1． 2 实验动物 昆明种远交系雄性小白鼠(清洁
级) ，6 ～ 8 周龄，体重 22 ～ 25g，200 只，购自河北医科
大学实验动物中心，合格证编号:1007154。在具有层
流装置的屏蔽系统内饲养，室温，经消毒的鼠颗粒饲料
喂养［生产许可证号:SCXK(冀)-1-003］。
1． 3 主要药物及试剂 氟康唑胶囊(FLCZ，上海三维
制药有限公司生产) ，伊曲康唑胶囊(ITCZ，西安杨森
制药有限公司生产) ，特比萘芬片(TBNF，北京诺华制
药有限公司生产) ，注射用环磷酰胺(CY，江苏恒瑞医
药股份有限公司生产) ，二甲基亚砜(DMSO，天津永大
化学试剂开发中心 )。
1． 4 药物的配制 伊曲康唑溶于二甲基亚砜溶液中，
配成质量浓度 5． 2mg /mL溶液，特比萘芬溶于二甲基亚
砜溶液中，配成质量浓度 6． 5mg /mL溶液，氟康唑用注射
用水溶解制成 2mg /mL贮存液，放于 －20℃贮存备用。
1． 5 建立小鼠系统性普通裂褶菌感染模型
1． 5． 1 动物分组 将 200 只雄性昆明小鼠适应性喂
养 1 周后，随机分为两部分:生存保护实验部分和组织
载菌量观察部分。每部分又随机分为 4 组:①氟康唑
治疗组，②伊曲康唑治疗组，③特比萘芬治疗组，④生
理盐水对照组。各组的受试小鼠为 25 只。
1． 5． 2 菌悬液制备 经预试验激活的菌株接种在沙
堡氏培养基上，37℃培养 10d，在无菌条件下挑取生长
良好的数块菌落置于含生理盐水的研磨器中均匀研
磨，以肉眼观察无明显颗粒，外观呈毛玻璃状为度。将
研磨好的菌液用 3 ～ 4 层无菌纱布过滤去除杂质和过
多菌丝，重复 2 次，用血细胞计数板调整滤液菌丝及孢
子浓度至 5． 0 × 105 ～ 1． 0 × 106 CFU /mL﹙一个孢子或
一个分隔断裂处的菌丝为一个 CFU) ，备用。
1． 5． 3 小鼠免疫抑制模型的建立 各组小鼠接种菌
悬液前给予腹腔注射环磷酰胺 200mg /kg，1 次 /d，连
续 3d，诱导其产生免疫抑制状态。
1． 5． 4 菌悬液的接种 将小鼠腹部皮肤脱毛消毒，沿
腹中线左或右下腹部进针，有落空感，固定针头，回抽
无肠液、尿液后缓缓注入菌悬液 0． 5mL。
1． 5． 5 给药方法 接种后第 2 天开始腹腔内注射给
药，氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬的给药剂量分别为:
52mg /kg，26mg /kg，32． 5mg /kg［5］，对照组腹腔注射生
理盐水 0． 4mL和二甲基亚砜 0． 1mL，1 次 /d，连续5d。
1． 6 小鼠接种治疗后的生存观察、肝脏真菌计数、组
织逆培养与菌落鉴定、组织病理检查
1． 6． 1 小鼠接种治疗后的活动情况、生存率及中位生
存时间的观察 连续观察生存保护实验部分各组小鼠
接种治疗后的一般情况(饮食、反应、活动及毛发变化)
和 21d内的死亡情况，并记录死亡日期和死亡只数。
1． 6． 2 肝脏真菌载菌量测定 在无菌条件下取出小鼠
的肝脏，洗净，称重放入无菌研磨器中充分研磨成组织
匀浆，按 1∶ 10 的量加入无菌生理盐水混匀。用移液器
吸取 10μL组织匀浆，接种于沙堡琼脂平皿培养基上，
37℃孵育 72h。计数培养基平面上生长的菌落数，并计
算出单位重量小鼠脏器组织所含的菌量(个 /mg)。
1． 6． 3 组织逆培养及菌落鉴定 感染第 7 天，即接种
后的第 8 天引颈处死组织载菌量部分各组存活小
鼠［6］。解剖小鼠，无菌条件下取各脏器洗净、称重、研
碎，取等量组织匀浆接种至沙堡氏琼脂培养基平皿上，
3 点接种，每个脏器移种 2 个置于 37℃恒温箱中培养，
2 周后观察结果。阳性结果判定:①每个脏器 2 个接
种平皿中只要有 1 个阳性，即视为该脏器逆培养阳性;
2 个平皿均阴性则视为阴性;2 个平皿均污染则被剔
除。1 个或 1 个以上脏器阳性即视为小鼠系统性感染
阳性。②观察平皿中生长菌落的形态并挑取少许菌落
置于载玻片上，乳酸酚棉蓝染色后光镜下观察，如果其
菌落形态及镜下菌丝形态均与接种菌株相同，即为逆
培养阳性。
1． 7 统计学处理 使用 SPSS13． 0 软件处理实验数
据。实验小鼠存活情况采用生存分析:Kaplan-Meier
法(K-M法)描绘生存曲线;采用四格表确切概率法
(Fishers exact test)比较各组间组织真菌逆培养阳性
率的差异;各组肝脏组织载菌量采用单因素方差分析
(One-way Anova) ，其两两比较采用 SNK-q 检验。P ＜
0． 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 实验模型建立 各组小鼠经环磷酰胺免疫抑制
后，进食和活动明显减少，接种菌悬液后，身体畏缩，逐
渐消瘦，皮毛倒逆无光，不断有自然死亡小鼠出现。解
剖后发现受试小鼠内脏均有不同程度的病理变化，部
分小鼠脏器表面有明显的粟粒至绿豆大小感染病灶，
以肝脏多见(图 1 ～ 2) ，心、肝、脾、肺、肾组织病理检
查:HE染色可见较明显的炎症细胞浸润，除肾脏外其
余脏器组织 PAS 染色均可见组织内较多紫红色的菌
丝(图 3 ～ 4) ，组织逆培养长出的菌落与实验菌株形态
及镜下结构一致。
2． 2 生存保护实验 受试小鼠经氟康唑和伊曲康唑
治疗 5d，进食和活动增加，精神状况有所改善，而特比
萘芬组和生理盐水对照组小鼠无明显变化，进食和活
动减少，精神状况差，大部分死亡。小鼠接种后 21d观
察期内生理盐水对照组小鼠在接种后的第 3 天开始死
亡，第 4 ～ 6 天达到高峰，第 15 天止，存活率12． 00%
(3 /25) ;氟康唑组第 7 天达死亡高峰，第 11 天止，存
活率 64． 00%(16 /25) ;伊曲康唑组第 7 天达死亡高
峰，第 10 天止，存活率 68． 00%(17 /25) ;特比萘芬组
第 6 ～ 7 天为死亡高峰，第 14 天小鼠不再死亡，存活率
为 20． 00%(5 /25) (图 5)。氟康唑治疗组和伊曲康唑
治疗组的中位生存时间超过 21d，较特比萘芬治疗组
(11d)和生理盐水对照组(8d)中位生存时间长，差异
有统计学意义(χ2 = 20． 939，P = 0． 000)。药物治疗组
和生理盐水对照组在生存率方面差异有统计学意义
·614· 中国皮肤性病学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 6 期 Chin J Derm Venereol，Jun． 2011，Vol． 25，No． 6
图 1 肝脏表面粟粒大小白色脓肿;图 2 脾脏表面粟粒大小白色脓肿;图 3 肝脏组织内可见大量紫红色分枝菌丝 (PAS染
色 × 100) ;图 4 脾病灶内大量紫红色分枝菌丝 (PAS染色 × 100)
Fig． 1 White microabscess on the surface of liver;Fig． 2 White microabscess on the surface of spleen;Fig． 3 Magnanimous septate
hypha of liver (PAS × 100) ;Fig． 4 Mauve hypha can be seen in spleen (PAS × 100)
(χ2 = 26． 251，P = 0． 000) ;氟康唑、伊曲康唑治疗组和
特比萘芬治疗组之间生存率比较差异有统计学意义
(χ2 = 9． 934，11． 688，P ＜ 0． 05) ;伊曲康唑治疗组较氟
康唑治疗组生存率高，但差异无统计学意义(χ2 =
0． 890，P = 0． 765) ;特比萘芬治疗组和生理盐水对照
组的生存率比较差异无统计学意义(χ2 = 2． 914，P =
0． 088)。
2． 3 组织真菌逆培养 见表 1。部分小鼠内脏组织
培养 3d后可见白色菌落生长，其菌落形态及镜下结构
与实验菌株一致。肝脏逆培养阳性率:氟康唑组和伊
曲康唑组较特比萘芬组和生理盐水对照组低，其中氟
康唑组和特比萘芬组之间差异有统计学意义(χ2 =
12． 50，P = 0． 000) ，伊曲康唑组和特比萘芬组之间差
异有统计学意义(χ2 = 9． 524，P = 0． 002) ，氟康唑组和
伊曲康唑组之间差异无统计学意义(χ2 = 0． 347，P =
0． 556) ;脾脏逆培养阳性率:氟康唑组和伊曲康唑组
较特比萘芬组和生理盐水对照组差异有统计学意义
(χ2 = 0． 8140，P = 0． 004) ;肺脏逆培养阳性率:生理盐
水对照组和氟康唑组差异有统计学意义(χ2 = 9． 441，P
= 0． 002) ，氟康唑组和特比萘芬组之间差异有统计学
图 5 生存曲线图
Fig． 5 Survival curve
意义(χ2 = 5． 357，P = 0． 021) ，生理盐水对照组和伊曲
康唑组之间差异无统计学意义(χ2 = 2． 381，P =
0． 123) ，生理盐水对照组和特比萘芬组之间差异无统
计学意义(χ2 = 0． 802，P = 0． 370) ，氟康唑组和伊曲康
唑组之间差异无统计学意义(χ2 = 3． 03，P = 0． 082) ，
伊曲康唑组和特比萘芬组之间差异无统计学意义(χ2
·714·中国皮肤性病学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 6 期 Chin J Derm Venereol，Jun． 2011，Vol． 25，No． 6
= 0． 439，P = 0． 508) ;各组小鼠心、肾逆培养阳性率较
低，差异均无统计学意义。
表 1 各组之间组织真菌逆培养阳性数的比较
Tab． 1 The comparison of the positive numbers of Visceral re-
verse fungal culture between different groups
Group n Liver(%) Spleen Lung Heart Kidney
Fluconazole 25 15(60． 00) 18 1 0 0
Itraconazole 25 17(68． 00) 18 5 0 0
Terbinafine 25 25(100． 00) 25 7 2 0
Control 25 25(100． 00) 25 10 5 3
2． 4 肝脏组织载菌量 见表 2。氟康唑组与伊曲
康唑组之间肝脏组织载菌量无显著变化;氟康唑和
伊曲康唑组与特比萘芬组之间肝脏组织载菌量差
异有统计学意义(F = 25 ． 470，P = 0． 000)。
表 2 各组之间肝脏组织载菌量的比较 (个 /mg)
Tab． 2 The fungi residual burden of liver were compared
in different groups (n /mg)
Group n Colonies number(x ± s)
Fluconazole 25 19． 533 ± 4． 121*
Itraconazole 25 20． 706 ± 5． 193*
Terbinafine 25 32． 920 ± 8． 485
Control 25 36． 520 ± 9． 138
Notes:Comparing with Terbinafine* P ＜ 0． 05
3 讨论
随着广谱抗生素、免疫抑制剂的广泛使用，恶性
肿瘤发病率的升高，艾滋病的蔓延以及实体器官移
植，导管插管技术的普遍应用，系统性真菌病的发病
率呈逐年增高趋势，且成为重要的致死原因之一。
普通裂褶菌在自然界广泛存在，正常情况下，由于机
体的免疫系统制约，不引起机体致病。但当机体免
疫力下降时，普通裂褶菌可在局部定植并大量繁殖，
破坏局部组织器官，甚至播散全身引起系统性普通
裂褶菌感染。
有学者通过腹腔注射普通裂褶菌悬液建立白色瑞
士小鼠系统性普通裂褶菌感染模型来研究普通裂褶菌
的潜在致病性，其结论认为普通裂褶菌同大多数机会
致病菌一样，通过免疫抑制剂诱导感染，感染的程度取
决于宿主的年龄、接种致病菌的数量以及感染之前的
免疫状态［7］。环磷酰胺可使小鼠外周血和脾内活化
的 NK细胞和 T 淋巴细胞比例下降，T 淋巴细胞转化
增殖能力和脾 NK 细胞活性降低［8］，因此本研究采用
环磷酰胺腹腔注射使小鼠免疫力低下，然后经腹腔将
普通裂褶菌悬液接种于免疫力低下的小鼠，成功建立
了系统性普通裂褶菌感染的动物模型。
本实验在建立系统性普通裂褶菌感染的动物模型
的基础上进行了氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬治疗系统
性普通裂褶菌感染的实验研究，生存保护实验结果显
示氟康唑组和伊曲康唑组小鼠生存率和中位生存时间
明显高于特比萘芬组和生理盐水对照组，内脏真菌逆
培养发现生理盐水对照组和特比萘芬组肝脏和脾脏逆
培养阳性率为 100%，氟康唑组和伊曲康唑组小鼠肝
脏、脾脏逆培养部分转阴，且与生理盐水对照组和特比
萘芬治疗组差异有统计学意义。系统性普通裂褶菌感
染最易受累的器官是肝脏，氟康唑组和伊曲康唑组小
鼠肝脏组织真菌载菌量明显低于特比萘芬治疗组和生
理盐水对照组，差异有统计学意义，氟康唑组和伊曲康
唑组、特比萘芬组和生理盐水对照组之间差异无统计
学意义。表明氟康唑和伊曲康唑在小鼠体内抗普通裂
褶菌活性较特比萘芬高。
本实验应用氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬这三种常
用抗真菌药物治疗系统性普通裂褶菌感染小鼠，通过
对受试小鼠中位生存时间、生存率、组织真菌逆培养阳
性率、肝脏组织载菌量的观察，发现氟康唑、伊曲康唑
在肝脏、脾脏组织中有较高的抗普通裂褶菌活性，可显
著延长系统性普通裂褶菌感染小鼠的中位生存时间、
提高生存率，而特比萘芬在各方面效果均差。普通裂
褶菌作为条件致病菌，机体的免疫状态在发病过程中
起着至关重要的作用，这也提示在临床治疗系统性普
通裂褶菌感染时，将抗真菌药与免疫增强剂联合应用
可能会取得更好的疗效。
［参 考 文 献］
［1］Kano R，Oomae S，Nakano Y，et al． First report on Schizophyllum
commune from a dog［J］． Clin Microbiol，2002，40(9) :3535 － 3537．
［2］Tanaka H，Takizawa K，Baba O，et al． Basidiomycosis:Schizophyllum
commune Osteomyelitis in a Dog［J］ ． Vet Med Sci，2008，70(11) :
1257 － 1259．
［3］Mori T，Seki A，Kano R，et al． Mycotic osteomyelitis caused by Schizo-
phyllum commune in a dog［J］． Vet Rec，2009，165(12) :350 － 351．
［4］Roan JN，Hsieh HY，Tsai HW，et al． Pulmonary nodules caused by
Schizophyllum commune after cardiac transplantation［J］． Journal of In-
fection，2009，58(2) :164 － 167．
［5］刘福英，刘田福． 实验动物学［M］． 北京:中国科学技术出版社，
2005:209 － 210．
［6］江淮苏，刘平，谭升顺，等．特比萘芬与氟康唑或伊曲康唑联合治疗
系统性耐药性白念珠菌感染小鼠模型研究［J］．中国皮肤性病学杂
志，2005，19(5) :272 － 275．
［7］Unno H，Kamei K，Honda A，et al． A murine model of pulmonary ba-
sidiomycosis by Schizophyllum commune［J］． Infect Chemother，2005，
11(3) :136 － 140．
［8］杨颖，蔡玟，黄志彪，等． 环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与
评价［J］． 中国公共卫生，2008，24(5) :581 － 583．
［收稿日期］ 2011-01-27 ［修回日期］ 2011-02-14
·814· 中国皮肤性病学杂志 2011 年 6 月第 25 卷第 6 期 Chin J Derm Venereol，Jun． 2011，Vol． 25，No． 6