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木豆叶水提物抗脑缺血缺氧损伤的作用研究



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收稿日期:#;;< B ;! B ;<
作者简介:黄桂英 C !DEA B F,女,主管技师。主要研究方向为中药与复方药效学、毒理学和药代动力学。
度、抑制血小板活性 G !; H;! B细辛醚是石菖蒲挥发油
的主要成份 C含 大鼠缺血缺氧再灌注脑损伤有保护作用 G !# H,能降低
脑缺血大鼠血小板 -1<#L 的表达,抑制脑缺血后血
小板的活化:降低血小板的聚集及黏附,减轻缺血性
脑损伤 G !A H 。为了直接观察 ! B细辛醚干预缺氧诱导
的内皮细胞黏附分子表达的作用,本实验采用流式细
胞术检测血管内皮细胞表面黏附分子 >-M= B !、
-1<#L 的表达,结果表明,缺氧模型组 >-M= B !、
-1<#L 的表达率明显高于正常对照组,提示内皮细
胞缺氧 B复氧后 >-M= B ! 和 -1<#L 明显上调,与
报道一致 G !N H。! B细辛醚有不同程度的抑制内皮细胞
黏附分子表达的作用,且与 -1<#L 表达呈量效关
系,表明 ! B细辛醚可直接作用于内皮细胞:调节内
皮细胞功能,增强对缺氧的抵抗力和耐受性,有效地
保护 >L- 免受缺氧 B复氧的损害:对预防和治疗 MO
具有一定意义。
参考文献:
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东医学,!DD#: A# (D):NA?
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C编辑:方琴 F
木豆叶水提物抗脑缺血缺氧损伤的作用研究
黄桂英,廖雪珍,廖惠芳,邓素坚,谭永恒,周玖瑶 C广州中医药大学中药学院药理教研室: 广州 E!;N;E)
摘要:目的 探讨木豆叶水提物对脑缺血、缺氧损伤的保护作用。方法 采用急性脑缺血再灌注模型法观察小鼠脑
缺血后脑组织中超氧化物歧化酶 (Od1)及过氧化脂质 (=1M)的含量;采用急性脑缺血模型法观察大鼠脑缺血后
脑组织的含水量、脑指数及脑毛细血管伊文思蓝的渗出量;采用小鼠断头法观察小鼠断头喘气时间。结果 木豆叶
水提物可显著降低急性脑缺血再灌注模型小鼠脑内 =1M的含量,而 Od1活力则显著提高, ! e ;? ;!;显著减少急
性脑缺血模型大鼠脑组织的含水量及脑指数, ! e ;? ;E J ;? ;!;显著减少急性脑缺血模型大鼠脑毛细血管伊文思蓝
的渗出量, ! e ;? ;!;明显延长小鼠断头喘气时间, ! e ;? ;!。结论 木豆叶水提物对大鼠、小鼠脑缺血、缺氧损
伤均有一定的保护作用。
关键词:木豆叶水提物;脑缺血;缺氧;Od1;=1M
中图分类号:4#KE? E 文献标识码:M 文章编号:!;;A B DKA (#;;<);A B ;!# B ;A
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·!#·中药新药与临床药理 !#年 $月第 %&卷第 ’ 期
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D-5%’?&-5?).>?)
木豆 !#$%& ’#$ ; :@ = D&55*/ 为豆科木豆属植
物,又名柳豆、豆蓉、扭豆等。目前已从木豆叶中分
离得到 !! 种结晶。在研究生的课题研究中,发现以
木豆叶为君药组成的复方具有补肾健骨、活血祛瘀、
消炎镇痛及提高免疫功能等作用。本文主要探讨单味
木豆叶水提物对脑缺血、缺氧损伤的保护作用。
: 材料与方法
:; : 药品 木豆叶水提物 (以下简称木豆)由我校袁
浩教授提供,实验时以蒸馏水配成所需浓度。
:; < 动物 QRO小鼠、AC大鼠,由本校医学实验动
物中心提供,合格证号:SEK!。
:; = 试剂 ABC及 DCE试剂盒,南京建成生物工程
研究所产品。伊文思蓝 4 T56U-,进口分装,上海化
学试剂采购供应站分装厂产品,批号:V 4 KW 4 K!。
甲酰胺,上海化学试剂站中心化工厂产品,批号:
S!K!S。
:; > 对急性脑缺血再灌注模型小鼠脑内 .?! 与
@)?的影响 取雄性 QRO小鼠 #X只,XL Y XV ,。以
乌拉坦 ! #KK 9, M U,麻醉,按急性脑缺血再灌注法 Z ! [
正中切口分离双侧颈总动脉,并分离迷走神经。以无
损动脉夹夹闭颈总动脉 !L 9&’,再通 !L 9&’,再次夹
闭 !L 9&’。第 !次缺血的同时于眶静脉放血造成低血
压,整个缺血过程应保持小鼠置于 #\ ]环境中。术
后肌注青霉素 K@ X万单位。假手术组 (正常组)操作
同模型组,但不夹闭动脉、不放血。于术后第 X天将
造模小鼠随机分为模型组、木豆叶高剂量组 (木豆叶
水提物 #@ VW , M U,)、木豆叶低剂量组 (木豆叶水提
物 !@ SX , M U,)。按 XK 9: M U, 灌胃给药,假手术
组、模型组给予等量蒸馏水。!次 M ?,连续 !K ?。末
次药后 !.处死动物,解剖取脑组织称重,制成 !K ^
匀浆 (须在冰冻条件下进行)。按试剂盒方法分别测
定 ABC及 DCE。ABC活力以每毫克蛋白中亚硝酸盐
抑制单位数表示,DCE以每毫克蛋白中含量表示。
:; A 对急性脑缺血模型大鼠脑含水量及脑指数的影响
取 AC大鼠 XK只,体重 ;XKK _ XK= ,,雌雄各半。随机
分为假手术组、模型组、木豆叶高剂量组 (木豆叶水提
物 X@ VV , M U,)、低剂量组 (木豆叶水提物 !@ WW , M
U,),按 XK 9: M U,体重灌胃给药,每天 !次,连续 !L
?。末次药后 ! .,参照脑缺血模型试验方法 ZX[,结扎双
侧颈动脉及迷走神经 (假手术组不结扎),结扎后 .,断头取脑,称重,计算脑指数 (脑指数 ‘脑重 a !KK
^ M体重)。然后置于 !!K ]烤箱至恒重,计算脑含水
量 Z脑含水量 ‘ (湿重 4干重) M湿重 a !KK^ [。
:; B 对急性脑缺血模型大鼠脑毛细血管通透性的影响
取AC大鼠 #X只,体重 ; XKK _ XK = ,,雌雄各半,分组
和给药同 “!@ L”。末次药后 ! .,参照脑缺血模型试
验方法 ZX[,结扎双侧颈动脉及迷走神经 (假手术组不结
扎),结扎前 L 9&’尾静脉注射 K@ L^伊文思蓝 !K 9: M
U,体重,结扎后 # .,断头取脑,称重,然后浸入甲酰
胺溶液中,置于 WL ]温箱温育 X .,取浸出液于 \XK
’9比色测定,以 BC值为结果作 )检验。
:; C 对小鼠断头致脑缺氧模型的影响 取体重 ; XK _
X = , 的 QRO 小鼠 #K 只,雌雄各半。随机分为正常
组、木豆叶高剂量组 (水提物 #@ VW , M U,)、木豆叶
低量组 (水提物 !@ SX , M U,)。按 XK 9: M U, 体重灌
胃给药,每天 ! 次,连续 !L ?。末次药后 ! .,按小
鼠断头致脑缺氧模型法 Z ! [,逐只在小鼠双耳连线处快
速断头,立即记录小鼠断头后至张口喘气持续时间,
以此作为耐缺氧指标。
:; D 数据处理方法 实验数据均以 “* + &”表示,组
间比较用 )检验。
·!#· $%&’()(*+&, -.(+/0/ 1%23 4/0/&%5. 6 -,(+(5&, 7.&%8&5*,*39: ;<<= >&9: ?*,@ ! A*@ B
组 别
正常组
木豆高剂量组
木豆低剂量组
剂量 C 3·D3 E !
E
B@ F#
!@ G;
断头喘气时间 C 0
!@ < H !@ #
;<@ ;< H ;@ <#!!
;<@ F< H !@ F!!!
组 别
正常组
模型组
木豆叶高剂量组
木豆叶低剂量组
剂量 C 3·D3 E !
E
E
;@ FF
!@ ##
脑毛细血管伊文思蓝渗出量 I J1值 K
<@ !;B H <@ <@ !=B H <@ <;LL
<@ !<@ !;# H <@ <;!!
组 别
正常组
模型组
木豆叶高剂量组
木豆叶低剂量组
剂量 C 3·D3 E !
E
E
B@ F#
!@ G;
NJ1活力 C O·83 E !
=@ ;G= H <@ BBF
M@ FF< H <@ BG=L
F@ !!; H <@ BBB!! LL
@ G#; H <@ ;>1P含量 C +8*,·83 E !
#@ !; H <@ =
=@ ; H !@ <=LL
B@ M< H <@ !!!
B@ ; H <@ #!!
! 结果
! # 对急性脑缺血再灌注模型小鼠脑内$%&与 ’(%
的影响 结果见表 !。术后 !< ’模型组脑组织内 NJ1
活力较正常组显著降低 (! Q<@ 1P含量则
显著升高 (! Q <@ NJ1活力显著高于模型组与正常组 (! Q<@ 1P
含量则显著低于模型组 (! Q<@ 无显著性差异。
表 ! 对小鼠脑缺血再灌注模型脑内 NJ1活力、
>1P含量的影响 ( R F, # $ %)
注:! K与正常组比较, L ! Q <@ !!Q<@ ! ! 对急性脑缺血模型大鼠脑含水量及脑指数的影响
结果见表 ;。木豆叶水提物高、低剂量均能显著减少
急性脑缺血模型大鼠的脑含水量,与模型组比较 ! Q
<@ 数, ! Q <@ 的脑指数 (减少 !!@ F S),但无统计学差异。
表 ; 对急性脑缺血模型大鼠脑含水量及脑指数的影响 ( R M, # $ %)
注:与正常组比较, L ! Q <@ ! ! Q <@ ! ) 对急性脑缺血模型大鼠脑毛细血管通透性的影响
结果见表 B。木豆叶水提物高、低剂量均能显著减少
急性脑缺血模型大鼠脑毛细血管伊文思蓝的渗出量,
与模型组比较, ! Q <@ 表 对急性脑缺血模型大鼠脑毛细血管通透性的影响 ( R F, # $ %)
注:与正常组比较,LL! Q<@ ! * 对小鼠断头致脑缺氧模型的影响 结果见表 #。
木豆叶水提物高、低剂量均能显著延长小鼠断头喘气
时间,与正常组比较, ! Q <@ 表 # 对小鼠断头致脑缺氧模型的影响 ( R !<, # $ %)
注:与正常组比较,!!! Q <@ ) 讨论
在脑缺血再灌期,缺血区产生大量氧自由基,
而 NJ1 活力下降,氧自由基攻击生物膜中的多不
饱和脂肪酸,引发脂质过氧化作用,形成脂质过氧
化物,如醛基 (丙二醛,>1P)、酮基等。脂质过
氧化作用破坏细胞膜整合,使继发性离子内环境紊
乱,严重损伤 A 元细胞膜,导致细胞坏死。故模型
组 (缺血组)可见脑组织内 >1P 显著升高,NJ1
活力则显著下降。而木豆叶水提物能使过氧化脂质
(>1P)明显下降、NJ1 活力显著提高。急性脑缺
血时,大脑皮层组织的血流量显著减少,提供的氧
及营养物质也减少,致使脑组织代射发生障碍,自
由基增高至膜磷脂过氧化。缺血缺氧后 P$7 耗
竭,A& T E U T E P$7 酶活性降低,葡萄糖含量减
少,乳酸生成增多,使脑细胞膜及毛细血管通透性
增高,渗出增多,引起脑水肿。故在试验中可见脑
缺血组在缺血 B . 后,脑血管伊文思蓝渗出明显增
多,缺血 = . 后,脑含水量明显升高。而木豆叶水
提物能显著减少大鼠急性脑缺血模型脑组织的含水
量、脑指数及脑毛细血管伊文思蓝的渗出量。提示
木豆叶水提物对脑缺血时脑组织中 A 细胞膜及微血
管膜的稳定性有一定的保护作用。这些作用对开发
以木豆叶为主的复方防治心脑血管病等方面可能有
重要意义。有关的作用机理及其他方面的作用有待
进一步研究。
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I编辑:方琴 K
组 别
正常组
模型组
木豆叶高剂量组
木豆叶低剂量组
剂量 C 3·D3 E !
E
E
;@ FF
!@ ##
脑含水量 C S
@ BG H <@ ==
G@ #< H !@ BMLL
@ B H <@ =F!
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脑指数 C 3·D3 E !
<@ =M< M H <@ <= ;
<@ FM ; H <@ !<# BL
<@ =G; # H <@ <@ =