全 文 ：收稿日期:2010-05-21
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30870136)
作者简介:晁菲(1986-), 女 , 在读硕士 , 从事中药资源学及
植物化学研究 , E-mail:princess 5209@126.com
＊通讯作者:魏朔南 , 男 ,西北大学教授 , 从事中药资源学及
植物化学教学科研工作 , E-mail:wsn0505@
nwu.edu.cn
doi:10.3969/j.issn.1006-9690.2011.01.015
RP-HPLC-MS分析漆叶中漆酚类化合物
晁　菲 ,邵　杨 ,魏朔南＊
(西北大学生命科学学院 , 陕西 西安 710069)
摘　要　采用反相高效液相色谱法结合液 -质联用技术对漆叶提取物进行分离 , 并对其中的漆酚类化合物进行定
性分析。结果显示:液相色谱分离得到 10个峰 ,经质谱分析并结合文献 ,鉴定其中 9个峰为C15或 C17的饱和 、单烯 、
二烯 、及三烯漆酚类物质。首次对漆叶中漆酚类化合物进行了高效液相色谱 -质谱分离和定性分析 , 为漆叶的临
床应用提供一定的理论依据。
关键词　漆叶;漆酚;反相高效液相色谱;液 -质联用
中图分类号:S567　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2011)01-0057-04
RP-HPLC-MSAnalysisofUrushiolintheLeavesof
ToxicodendronverniciferaStokes
ChaoFei, ShaoYang, WeiShuonan＊
(TheColegeofLifeScienceofNorthwestUniversity, Xi an710069, China)
Abstract　InvestigatetheurushiolintheleavesofToxicodendronverniciferaStokes(orLacquertree).To
separatetheleavesextractsofthelaccquertreebytheapplicationofRPHighPerformanceLiquidChro-
matography, combiningwithLiquidChromatography-MassSpectrometrytechnologytoanalysistheuru-
shiolqualitatively.Asaresult, wehaveseparated10 peaksbyLC, andidentified9 peaksthatwerethe
saturated, single-ene, diene-ene, andthree-eneofC15 orC17 diferenturushiolcompoundsaccording
totheMSandexistingliterature.Inconclusion, thistextconductedanewmethodforHPLCandthe
qualitativeanalysisforMSofurushiolcompoundsintheleavesofthelacquertree, alsoprovidesthetheo-
reticalbasisofclinicalapplicationforit.
Keywords　LeavesoftheLacquertree;urushiol;RP-HPLC;LC-MS
　　中国古书 《后汉书 ·方技列传》与 《三国志 》中
均载有延年益寿之古方 “漆叶青黏散 ”[ 1] 。其中漆
叶为漆树科(Anacardiaceae)漆属(Toxicodendron)植
物漆树(ToxicodendronverniciferaStokes)的叶 。 《本
草纲目 》在乔木类漆项下记载其益精神 、聪耳目 ,主
治五尸劳疾 、杀虫 [ 2] 。但时至今日 ,有关漆叶的药
用研究与应用却少有报道。仅李映丽 [ 3]对漆叶的
生药学进行了研究 ,并采用薄层层析法确定其含漆
酚。有关漆酚的研究:Du[ 4]首次用 RP-HPLC法对
生漆中未衍生化的漆酚进行了分离;Draper[ 5] 、
Kim[ 6]及李林 [ 7]等通过液质联用技术分析指出 ,生
漆中含有 C15和 C17的饱和 、单烯 、二烯及三烯等不同
漆酚类化合物 。本实验应用 HPLC分析技术建立了
漆叶中漆酚类成分的分离方法 ,并结合液 -质联用
技术 ,利用其在中药材成分定性方面的优点对漆叶
中的成分进行了定性分析 ,为漆叶的临床应用提供
参考 。
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第 30卷第 1期
2011年 2月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.30 No.1Feb.2011
1　仪器 、试剂与材料
Agilent1100系列高效液相色谱 -电喷雾 -离
子阱质谱联用仪:包括 ESI离子源 、SL型离子阱质
谱和 Chemistation5.2工作站等;Waters2965型高效
液相色谱系统:包括 2695型高压恒流泵 、2996 PDA
检测器和 Empower系统等;DiamonsilC18(150 mm×
4.6 mm, 5 μm)色谱柱;SENCOR系列旋转蒸发仪;
SHB-Ⅲ循环水多用真空泵;KH-200KDE型高功
率数控超声波清洗器;TB-114型电子分析天平;
Milipore超纯水仪。
实验材料漆叶于 2009年 7月采自陕西平利县 。
甲醇 、乙腈为色谱纯(天津化学试剂厂),水为 Mili-
pore超纯水 ,其它试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　样品溶液制备
漆叶 10 g无水乙醇 30 mL浸泡 3次 ,合并滤液
回收乙醇 ,所得物用氯仿 -水(2∶1)萃取 3次 ,弃去
水相 ,收集氯仿层并挥去溶剂即得浸膏。精密称取
该浸膏 0.01 g, 甲醇溶解过滤 ,定容至 50 mL,过
0.22 μm滤膜 ,备用 。
2.2　HPLC分析
2.2.1　流动相及比例的确立
通过对甲醇 -水和乙腈 -水两种体系进行考察
发现 ,使用甲醇 -水洗脱时 ,分离效果不理想;而使
用乙腈 -水洗脱时灵敏度较高 ,且主要色谱峰达到
较好分离。进一步对乙腈 -水的不同比例 85∶15、
88∶12、91∶9、94∶6进行优化选择 ,结果发现 ,当流动
相的比例为 91∶9时 ,各色谱峰分离度好 、峰形窄 、基
线平稳 。
2.2.2　检测波长的确定
本实验采用二极管阵列检测器(PDA)对供试
品进行了全波段扫描 ,扫描波长为 190 ～ 600 nm。
结果表明 ,在 380 nm处检测到的峰数目较多 ,且多
数色谱峰的响应值较大 ,故以 380 nm作为漆树叶子
提取物的 HPLC分析波长 。
2.2.3　流速及柱温的选择
通过对 0.3、0.6、0.8 mL· min-1等不同流速及
25、30、35 ℃等不同柱温进行比较发现:流速 0.6 mL
·min-1 、柱温 35 ℃的色谱条件分离效果最佳。
2.2.4　色谱条件的确立
经上述参数优化后 ,确立色谱条件:流动相为乙
腈 -水(91∶9 v/v);流速 0.6 mL· min-1;检测波长
380 nm;柱温 35 ℃;进样量 20 μL。漆树叶子提取
物的 HPLC分析见图 1。
图 1　样品 HPLC分析谱图
2.2.5　方法学考察
2.2.5.1　精密度试验
取同一份供试品溶液 ,按 2.2.4节方法重复进
样 5次 ,测得 10个主要色谱峰峰面积积分值的 RSD
均小于 3%,表明本法精密度良好。
2.2.5.2　重复性试验
取同一漆树叶样品 6份 ,按照 2.2.1节方法制
成供试品溶液 、2.2.4节方法进行测定 ,结果 10个
主要色谱峰峰面积的 RSD均小于 2%。
2.2.5.3　稳定性试验
取同一份供试品溶液 ,于 0、4、8、16、24、48 h分
别进样 ,测定峰面积 ,计算 10个主要色谱峰的 RSD
均小于 3%,表明供试品溶液在 48 h内较稳定 。
2.3　HPLC-MS分析
2.3.1　分析条件
色谱条件同 2.2.4节 ,之后 2∶1分流 , 1/3流出
液进入质谱分析。其条件为:电喷雾离子化源负离
子模式扫描;雾化气为高纯氮气 、压力为 35.0 psi;
干燥气温度为 350 ℃、流量为 8.0 L·min-1;扫描质
量范围为 100 ～ 1000 m/z。
2.3.2　测定结果
经 SL多级离子阱质谱测定 ,漆酚类化合物在一
级质谱中大多以准离子分子形式存在 ,很少有碎片
离子 ,并且二级质谱中碎片信息也较少 ,主要峰的质
谱图见图 2。通过分析各液相色谱峰与总离子流图
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 30卷
中所对应离子峰的质谱信息 ,并结合已有相关文献
报道 ,可对液相所得各峰进行归属(见表 1),定性鉴
别出 9个漆酚类化合物 ,另 1个为未知物。
图 2　4个主要色谱峰的质谱图
A:峰 -1;B:峰 -4;C:峰 -5;D:峰 -8(a:一级质谱;b:二级质谱)
表 1　样品质谱分析结果
峰号 保留时间 化合物名称 一级质谱 二级质谱
1 8.1 min C15三烯漆酚 313.1[ M-H] -, 626.8[ 2M-H] - 313.0[ M-H] -, 313.0[ M-H] -
2 9.8 min C15二烯漆酚 315.1[ M-H] - 315.1[ M-H] -
3 11.5 min C17三烯漆酚 341.1[ M-H] - 341.1[ M-H] -
4 13.9 min C15单烯漆酚 317.1[ M-H] - 317.0[ M-H] -
5 17.3 min C17二烯漆酚 343.1[ M-H] - 343.1[ M-H] -
6 19.9 min C17三烯漆酚 340.9[ M-H] - 340.9[ M-H] -
7 24.4 min C17三烯漆酚 468.9[ 2M-2H-C15H31 ] - 340.9[ M-H] -
8 31.3 min C15三烯漆酚 625.2[ 2M-H] - 313.0[ M-H] -
9 35.3 min C15饱和漆酚 319.1[ M-H] - 319.0[ M-H] -
10 37.0 min 未知物 809.4[ M-H] - 763.9[ M-COOH] -
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第 1期　　　　　　　　　　　　　晁　菲 , 等:RP-HPLC-MS分析漆叶中漆酚类化合物　　　　　　　　　　　　
3　讨　论
关于生漆和漆树树皮中漆酚的 HPLC分析研究
已有较多报道 [ 4 -8] 。本文结合国内外研究结果 ,在
对流动相体系 、波长 、流速及柱温等条件进行优化选
择后 ,建立了漆叶中漆酚类化合物 HPLC分离的最
佳条件:乙腈 -水(91∶9 v/v)为流动相 、流速 0.6 mL
· min-1、波长 380 nm、柱温 35 ℃。该分析方法快
速简便 、灵敏度高 、重现性好 ,相比文献[ 3]中所用薄
层层析法 ,其结果更为精确 。
液质联用分析显示 ,化合物 1、2、4、8和 9为 C15
类漆酚化合物 ,其中 1与 8为三烯漆酚;化合物 3、
5、6和 7属于 C17类漆酚化合物 ,其中 3、6和 7分子
量相同 ,均为 C17三烯漆酚;但各个化合物在液相分
析中所对应色谱峰的保留时间不同 ,且总离子流图
中信号也有差异;由此推断 1与 8可能为同分异构
体 ,同时 3、6和 7之间也存在同分异构现象 ,其具体
结构还有待确定 。对于 m/z为 809.4的化合物 10,
该分子量在以往相关文献中未见报道 ,有待进一步
鉴定。此外 ,漆叶中漆酚类化合物不仅存在单体 ,而
且还有二聚体形式(如化合物 1、8),这可能与漆酚
在空气或有氧环境中易被氧化聚合有关 [ 9] 。
中药干漆具有祛瘀 、破积 、通经 、止痛 、杀虫等功
效 [ 10] ,它经生漆炮制而成 ,生漆的主要成分为漆酚 。
据文献报道 [ 11] ,生漆漆酚类化合物中主要为三烯漆
酚 ,将漆酚尤其是三烯漆酚的含量检测作为干漆药
材质量控制的标准具有重大意义 [ 6] 。本研究结果
显示 ,漆叶中三烯漆酚的相对峰面积占总峰面积的
70%以上 ,表明漆叶与生漆中漆酚类化合物的组成
与含量相似 ,即与干漆的入药成分相近。同时 ,漆叶
入药有主治五尸劳疾 、杀虫之功效 ,与干漆也具相似
之处 。据此推测 ,漆酚类化合物可能为漆叶具有药
效的主要成分之一 。
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