全 文 ：型 , 考虑临床上脑卒中多数以不完全性缺血为主 , 同时观察到
脑栓塞患者血管再通后 ,症状反而加重 ,即缺血可导致脑损伤 ,
再灌注还会进一步加重损伤 , 鉴于海马对缺血高度敏感且在抑
郁发生中起着重要的作用 [ 7-9] , 所以小鼠卒中模型我们采用我
室常用的反复脑缺血再灌注模型(已证实可造成海马神经元不
可逆的损伤)。此种模型比较接近脑梗塞再通时脑组织病理生
理演变过程 , 所以它更符合临床。
行为绝望实验是利用动物不能逃出恶劣环境 , 导致动物行
为绝望的一种模型。与其它抑郁模型比较 , 其优点是特异性较
高 , 因而目前被广泛用于抗抑郁药的筛选 [ 10] 。本实验通过 TFA
对脑卒中后小鼠强迫游泳实验的影响发现术后第 5天卒中组小
鼠强迫游泳静止不动时间显著长于假手术组 , 且悬尾实验验证
了这一现象。这表明在受到同等程度的应激后 , 卒中组小鼠更
易于放弃 , 陷入绝望抑郁状态。 提示小鼠卒中后抑郁模型已经
建立。
本研究发现术后第 5天 TFA明显缩短强迫游泳和悬尾实
验中小鼠的不动时间 ,在术后第 3天 、第 7天对脑卒中后小鼠强
迫游泳实验未见明显影响 ,以上结果可能是由于术后第 3天药
效未完全显现 , 术后第 7天小鼠可能对这种应激产生一定的适
应性 , 但具体的原因有待我们进一步研究。 研究结果显示 TFA
对脑卒中后小鼠自主活动无显著影响 , 提示其抗抑郁作用可能
与中枢兴奋性作用无关 。以上实验结果表明 TFA对脑卒中后
小鼠行为绝望实验具有一定的改善作用 , 我们将进一步研究其
抗脑卒中后抑郁作用及其可能的机制。
参考文献
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35
茅莓总皂苷的主要药效学研究
王继生 ,李惠芝＊ ,邱宗荫 , 夏永鹏 , 任凌燕 ,周成林
(重庆医科大学 药学系 , 重庆 　400016)
　　摘　要　目的:研究茅莓总皂苷(TGRP)的主要药效学和急性毒性。方法:观察 TGRP对断尾小鼠对出血时间的影响 , 对肝素
化小鼠出血时间和出血量的影响;对小鼠常压耐缺氧生存时间的影响;对断头小鼠喘气时间的影响;结扎双侧总动脉建立小鼠脑缺
血模型 , 观察 TGRP对小鼠 6h、12h死亡率和存活时间;采用颈动 、静脉旁路方法观察 TGRP对大鼠实验性血栓形成的影响。结果:
TGRP非常显著的延长断尾小鼠出血时间;对肝素化小鼠 TGRP使小鼠出血量明显增加;延长小鼠常压缺氧生存时间;延长断头小
鼠喘气时间;降低结扎双侧总动脉小鼠死亡率 , 延长存活时间;同时 , 对大鼠血栓形成有明显抑制作用。结论:TGRP对脑缺血缺氧
有明显的保护作用。
　　关键词　茅莓总皂苷;脑缺血;急性毒性
　　茅莓为蔷薇科植物茅莓 RubusparvifloliusL.的茎叶 , 民间
用于治疗吐血 、跌打刀伤 、产后瘀滞腹痛 、痢疾 、痔疮 、疥疮等 , 民
间还用其根治疗月经过多 [ 1] 。郑永玲等 [ 2]发现茅莓提取物对
脑缺血有很好的保护作用 , 王继生等 [ 3, 4]对茅莓水提物抗脑缺
血的有效部位进行筛选 ,发现茅莓水提物抗脑缺血的有效部位
为茅莓总皂苷(theglucosidesofRubusparvifloliusLTGRP), 本
文对 TGRP的主要药理作用进行研究。
1 　材料
1.1 　药物　茅莓总皂苷(TGRP)由重庆医科大学药物分析实
验室提供 , 纯度大于 90%。 氨基己酸片 , 湖南制药厂 , 批号:
040211-1 , 用蒸馏水稀释至所需浓度。复方丹参片 , 广州白云山
制药厂生产 ,批号 20040819。
1.2　动物　昆明种小鼠 , 一级 , 由重庆市中药研究院实验动物
研究室提供 ,批准文号:医动字第 310101001号;Wistar大鼠 , 清
洁级 ,体重 280 ～ 320 g, 购于的第三军医大坪医院实验动物中
心 ,合格证号:SCXK(渝)2001003。
2　方法与结果
2 .1　对断尾小鼠出血时间的影响　小鼠 50只雌雄各半 , 随机
分为 5组 , 每天灌服给药或等体积蒸馏水一次 , 连续 3天。于末
次给药后 1h,剪尾 1cm长 ,等伤口处渗出血液时开始记时 , 每隔
34 中药药理与临床 2007;23(1)DOI :10.13412/j.cnki .zyy l.2007.01.018
30s用滤纸吸血一次 , 至血凝为止 , 记录从出血到凝血的时间 ,
结果见表 1。
　　表 1　TGRP对断尾小鼠出血时间的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) 出血时间(min)
对照组 4.7±1.34
TGRP 10 6.6±3.40＊＊
TGRP 20 7.2±2.53＊＊
TGRP 40 7.8±1.59＊＊
氨基己酸片 1200 3.4±0.74＊＊
　　与对照组比较＊P<0.05;＊＊P<0.01
　　表 1结果可见 , TGRP延长断尾小鼠出血时间 , 提示 TGRP
无止血作用。
2.2　对有出血倾向小鼠出血时间和出血量的影响　分组及给
药同 2.1。于末次给药后 45min, 除正常对照组外 , 每鼠尾静脉
注射 5个单位的肝素钠 , 15min后各组小鼠均剪尾 1cm长 , 每
30s用滤纸吸血一次 ,记录小鼠出血到血凝的时间称滤纸重量 ,
减去吸血前滤纸重量 ,即为出血量 , 结果见表 2。
　　表 2　TGRP对有出血倾向小鼠出血时间和出血量的影响( x±s, n
=10)
组别 剂量(g/kg) 出血时间(min) 出血量(mg)
正常对照 4.65±1.06＊＊ 22.9±8.8＊＊
模型对照 8.00±1.56 46.7±17.4
TGRP 10 7.55±2.65 67.1±23.4＊
TGRP 20 7.86±1.85 69.2±10.1＊
TGRP 40 7.93±2.17 72.8±7.5＊氨基己酸
片 1200 3.4±1.31
＊＊ 15.9±8.2＊＊
　　与模型组相比＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　表 2可见 , TGRP使小鼠的出血量明显增加 ,提示该提取物
有一定活血作用。
2.3 　TGRP对常压缺氧小鼠存活时间的影响　小鼠 50只 ,雌
雄各半 , 随机分为 5组 , 每天灌胃 1次连续 3d,末次给药后 1h,
将小鼠置于 250ml广口瓶内 , 内盛 20g钠石灰 , 凡士林密封瓶
口。观察并记录小鼠在瓶内从密闭到呼吸停止的时间 , 结果见
表 3
　　表 3　TGRP对常压缺氧小鼠存活时间的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) 存活时间(min)
对照 36.08±2.75
TGRP 10 38.17±3.64
TGRP 20 39.68±3.92＊
TGRP 40 41.65±4.63＊＊
复方丹参片 600 42.17±5.16＊　
　　与对照组相比＊P<0.05, ＊＊P<0.01(下同)
　　由表 3可知 , TGRP能延长常压缺氧小鼠存活时间 , 提示其
有抗缺氧作用。
2.4 　TGRP对断头小鼠喘气时间的影响　分组及给药方式同
上。末次给药 1h后 ,于小鼠两耳下部迅速断头 , 记录各小鼠断
头后张口喘气的持续时间 ,结果见表 4
　　表 4　TGRP对断头小鼠喘气时间的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) 断头后小鼠喘气时间(s)
对照组　　 20.17±1.54
TGRP　　 10 21.69±1.25＊
TGRP　　 20 22.36±1.95＊
TGRP　　 40 24.06±2.09＊＊
复方丹参片 600 22.86±1.73＊
　　由表 4可知 , TGRP能显著延长断头小鼠喘气时间 , 提示其
有抗脑缺血缺氧的作用。
2.5 　TGRP对 CCA结扎小鼠死亡率和存活时间影响　分组及
给药方式同上。乙醚浅麻 , 4-0丝线结扎双侧颈总动脉(common
carotidartery, CCA), 记录小鼠存活时间 , 超过 12h者按 12h
(720min),分别统计各 6h、12h的死亡率 , 结果见表 5。
　　表 5　TGRP对 CCA结扎小鼠死亡率和存活时间影响( x±s, n=
10)
组别 剂量(mg/kg)
6h死亡率
(%)
12h死亡率
(%)
生存时间　　
(min)　　
对照组　　 80 100 131.8±90.6
TGRP　　 10 70 80 280.1±176.5＊＊
TGRP　　 20 40 70 330.5±250.7＊＊
TGRP　　 40 40 60 418.7±282.4＊＊
复方丹参片 600 40 60 473.5±308.5＊＊
.　　由表 5可知 , 茅莓总皂苷能显著延长结扎双侧颈总动脉小
鼠 6h、12h存活率 ,延长存活时间 , 提示有抗脑缺血缺氧的作用。
2.6 　对实验性血栓形成的影响　大鼠 40只随机分 5组 , 灌胃
给药 ,每天 1次 ,连续 3d。于末次给药 lh后 , 麻醉 , 背位固定 ,
同时分离左颈外静脉和右颈总动脉 , 在内径为 2 mm的聚乙烯
管中放一根长 7cm的 4号手术线 , 以肝素生理盐水 50u/ml充满
三段相连接的聚乙烯管中 ,然后将该聚乙烯管的一端插入左颈
外静脉 ,再将此管的另一端准确注入肝素 50 u/kg抗凝 ,并将该
端插入右颈总动脉中 ,立即放开动脉夹。准确记录血流 15 min,
终止血流 ,取出丝线称重 , 减去丝线自身重量 , 即得血栓湿重。
并计算血栓生成抑制率 [ 1] ,结果见表 6。
　　表 6　TGRP对大鼠实验性血栓形成的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) 血栓湿重(mg) 抑制率(%)
对照组　　 18.62±1.69
TGRP　　 10 16.21±3.04＊ 12.94
TGRP　　 20 14.86±1.98＊＊ 20.19
TGRP　　 40 12.06±2.84＊＊ 35.23
复方丹参片 600 11.91±2.68＊＊ 36.03
　　由表 6可知 , TGRP能显著减轻实验性血栓的重量 , 提示有
抗血栓作用.
2.7　急性毒性　取体重 20±2g小鼠 40只 , 雌雄各半 , 用茅莓
总皂苷按 2.4g/kg(相当生药 120 g/kg)、1.2 g/kg、0.6g/kg、 0.3
g/kg给药 ,每天 1次 ,然后连续观察 7天。结果除两个大剂量组
动物稍有厌食 、偶见稀便以外 , 其他动物饮食及活动情况如常 ,
未见明显中毒症状 ,亦无一死亡 , 受动物灌胃容量的限制 ,未测
得 LD50。
3　讨论
　　脑对氧代谢特别活跃 ,耗氧量大 , TGRP对小鼠断头脑缺血
和双侧颈总动脉结扎所致的脑缺血有明显的保护作用。 TGRP
显著延长小鼠常压缺氧生存时间和断头小鼠的喘气时间 ,提示
该药具有降低耗氧量的作用。动脉血栓形成是造成脑缺血的重
要原因 ,血栓形成是由血管内皮损伤后血小板粘附聚集及相关
释放反应综合因素产生的 , TGRP能明显抑制大鼠实验性血栓
形成。具有降低活体动物动脉血中血小板粘附聚集能力 ,通常
认为抗动脉血栓形成作用的药物可防止脑缺血的发生。同时 ,
TGRP非常显著的延长断尾小鼠出血时间;对肝素化小鼠 TGRP
35中药药理与临床 2007;23(1)
使小鼠出血量明显增加;这些结果侧面也证明了 TGRP具有抗
血栓作用。 TGRP由茅莓提取制备 , 茅莓在全国各地分布 , 药源
广 , 值得开发。
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松潘乌头总碱的镇痛作用
刘铭佩
(兰州大学第二医院药剂科 ,兰州 　730030)
　　摘　要 　目的:研究松潘乌头总碱(TAS)的镇痛作用机制。方法:采用小鼠热板法和大鼠甩尾法测定动物的痛阈 ,同时检测
乙酸致痛小鼠脑组织 NO、MDA含量及 SOD活性。结果:icvTAS0.025mg/kg能明显提高小鼠 、大鼠的痛阈;TAS能使乙酸致痛小鼠
脑组织 NO、MDA含量明显降低 , SOD活性明显增强;CaCl2能拮抗 TAS的镇痛作用 , Ver则使之增强。结论:TAS的镇痛作用部位可
能在中枢神经系统 , 其作用机制可能与影响 Ca2+内流和减少 NO、MDA含量 , 提高 SOD活性有关。
　　关键词　松潘乌头总碱;镇痛作用;Ca2+内流;NO;MDA;SOD
　　松潘乌头(AconitumsungpanenseHand-Mazz)分布于甘肃南
部 、四川北部 、青海省 , 民间用于治疗跌打损伤 、风湿 、类风湿性
关节炎等引起的疼痛 。其主要化学成分为多种生物碱 , 且以二
萜生物碱为主 [ 1]其总生物碱具有良好的镇痛作用 , 且无耐受性
和身体依耐性 [ 2] 。本文对总生物碱的镇痛作用机制进行了探
讨。
1　材料与方法
1.1　试验药物　松潘乌头采自甘肃定西 ,其总生物碱(totalal-
kaloidsofaconitumsungpanenseHand-Mazz, TAS)由兰州大学药
学院药物分析教研室提供 ,含量 1.14%。
1.2　动物　昆明种小鼠 ,体重 20.0 ±2.0g(合格证号:医动学
第 14-005);Wistar大鼠 , 体重 180.0±20.0g(合格证号:医动字
第 14-006),由兰州大学实验动物中心供应 。
1.3 　试剂　维拉帕米(verapamil, ver)为连云港制药厂生产 , 批
号:20020615;氯化钙(CaCl2)为天津市塘沽邓中化工厂生产 ,批
号 20011210。一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
(MDA)试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。
2 　方法与结果
2.1 　 icvTAS对小鼠痛阈的影响 [ 3] 　给药前先测定小鼠的痛
阈 , 热板温度为 55℃±0.5℃, 室温为 17℃±1℃, 以小鼠舔后足
为疼痛反应 , 以痛反应的潜伏期为痛阈指标 , 挑选痛阈在 10 ～
24s者供实验用 ,给药后痛阈超过 60s者以 60s计。 取痛阈值合
格的♀小鼠 20只 , 随机分为 2组 , 分别 icv生理盐水 10μl和
TAS0.025mg/kg,给药后 15min测定小鼠痛阈。结果给药前对
照组 、TAS组小鼠痛阈(s)分别为:17.56±3.74、17.58 ±3.86;
给药后分别为:17.54±3.63、33.49±8.71(P<0.01),表明 icv-
TAS使小鼠痛阈显著提高。
2.2 　icvTAS对大鼠痛阈的影响 [ 4] 　给药前先测定大鼠的痛
阈 ,以 55℃±1℃恒温水浴为致痛源 ,大鼠固定后将其尾尖部以
上约 5cm放入热水中 , 记录大鼠尾部入水到缩离水面的时间;
间隔 3min, 连测 2次。 挑选缩尾反应在 2 ～ 6s以内的大鼠 20
只 , ♀、♂各半 , 随机分为 2组 , 分别 icv生理盐水 20μl和 TAS
0.025mg/kg,给药后 15min测定痛阈。结果给药前对照组 、TAS
组大鼠痛阈(s)分别为 3.15±1.72、3.54 ±1.77;给药后分别为
3.53±1.74、8.33±1.91, (P<0.01), 说明 icvTAS使大鼠痛阈
显著提高。
2.3　TAS对乙酸致痛小鼠脑组织 NO含量的影响 　小鼠ip0.
70%乙酸 10ml/kg, 选择 10min内出现扭体反应的小鼠 30只 ,
♀、♂各半 , 随机分为 3组 , 一组为乙酸致痛模型组 sc等容量生
理盐水;2、 3组为给药组 , scTAS0.5mg/kg、0.25mg/kg,给药后
15min,将小鼠快速断头处死 , 取出脑组织 , 放在预冷(4℃)的生
理盐水中将血液冲洗干净 ,滤纸吸干后 , 称重 , 并用预冷(4℃)
的生理盐水制成 10%的脑匀浆 ,按试剂盒方法测定 NO含量 , 蛋
白定量测定采用双缩脲法。另取 10只小鼠♀、♂各半 , ip、sc等
容量生理盐水作为正常对照组 , 同法测定其脑组织 NO含量。
由表 1结果可知 , 乙酸致痛小鼠模型组脑组织 NO含量明显升
高 , TAS使升高的 NO含量显著降低。
2.4 　TAS对乙酸致痛小鼠脑组织 SOD活性和 MDA含量的影
响 　小鼠分组及给药同法进行 , 按试剂盒方法测定 SOD活性
和 MDA含量 ,从表 1结果可以看出 , 乙酸致痛小鼠脑组织 SOD
活性明显降低 , MDA含量明显增加 , 而 TAS使上述两指标的异
常改变显著 ,恢复接近正常水平。
36 中药药理与临床 2007;23(1)