全 文 ：　257　
析实验室 , 1997 , 19 (5):14-16.
[ 5] 鲍士旦. 土壤农化分析 [ J] . 第 3版. 北京:中国农业出版社 ,
2000:355-356.
(收稿日期:2006—02—27　　修回日期:2006—05—10)
橘红珠质量标准的研究
彭维 , 田珩 , 王永刚 , 古淑仪 , 雷晔 , 李沛波 , 苏薇薇 (中山大学广州现代中药质量研究开发中心 , 广州　510275)
摘要:目的　建立橘红珠的质量标准。方法　采用聚酰胺薄膜层析法鉴别橘红珠中的柚皮苷 、 野漆树苷;采用硅胶
G薄层层析法鉴别其中的橙皮内酯水合物 、 异橙皮内酯;采用高效液相色谱法测定其中的柚皮苷含量。结果　橘红
珠中柚皮苷的含量 7. 62%～ 20. 03%。结论　本研究为橘红珠质量标准的制定提供了科学依据。
关键词:橘红珠;质量标准;柚皮苷;高效液相色谱法
中图分类号:R283. 6　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672 - 2981 (2006) 04 - 0257 - 03
Quality standard of juhongzhu
Peng Wei , T ian Heng , Wang Yong-gang , Gu Shu-y i , Lei Ye , L i Pei-bo , Su Wei-wei(Guangz hou Quality Research
and Development Center o f Traditional Chinese Medicine , Sun Yat-sen University , Guangz hou　510275)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish the quality standard fo r juhong zhu. METHODS　Naringin , rhoifolin and
meranzinhydrate , and isomeranzin we re identified by TLC. The content o f na ringin w as determined by HPLC. RE-
SULTS　The content range o f nar ingin w as 7. 62%～ 20. 03%. CONCLUSIONS　The established me thod can be used
fo r the qua lity contro l o f juhong zhu.
KEY WORDS:juhongzhu;quality standa rd;naringin;H PLC
　　橘红珠为芸香科植物化州柚 Citrus grandis (L. ) Os-
beck var. tomento sa H or t. 的未成熟幼小果实 , 收载于 《中
药大辞典》(下册)[ 1] , 具有止咳 、 化痰 、 平喘等功效。橘红
珠的质量标准在 《中国药典》、 部颁标准和地方标准中均未
收载 , 为此笔者建立了橘红珠药材的鉴别和含量测定方法。
1　仪器 、 试剂与材料
瑞士 CAMAG薄层自动点样仪 、 薄层成像系统 、 薄层板
加热器。 美国 DIONEX 高效液相色谱仪 (P680 二元泵 ,
170U紫外检测器 , 自动进样器)。柚皮苷对照品 (供含量测
定用, 批号 110722-200309 , 中国药品生物制品检定所提供);
野漆树苷对照品 (美国 F luka公司提供);橙皮内酯水合物 、
异橙皮内酯 (自制 , 经 IR、 MS 、1HNMR、13 CNMR 结构确
证)。去离子水 、 甲醇 (色谱纯), 所用其他试剂均为分析纯。
样品:化橘珠药材来源见表 1 , 样品直径均<5 cm , 经
中山大学生命科学学院李沛波博士鉴定为芸香科植物化州柚
Citrus grandis (L.) Osbeck var. tomento sa Ho rt. 的未成熟
幼小果实。
2　薄层色谱鉴别
橘红珠的化学成分为黄酮类 (如柚皮苷 、 野漆树
苷)[ 2-3] , 香豆素类 (如橙皮内酯水合物 、 异橙皮内酯)[ 4]等。
2. 1　柚皮苷 、 野漆树苷的鉴别
分别取柚皮苷 、 野漆树苷对照品 , 加甲醇制成 1 mg
mL - 1溶液 , 作为柚皮苷 、 野漆树苷对照品溶液 。取化橘珠
药材粉末 1 g , 加甲醇 10 mL , 超声 (40 ℃) 处理 20 min ,
放冷 , 滤过, 作为供试品溶液。吸取柚皮苷 、 野漆树苷对照品
溶液 3μL、 供试品溶液 1μL , 分别点于同一聚酰胺薄膜上, 以
丙酮-醋酸乙酯-水-冰醋酸 (4∶8∶0. 8∶0. 2) 展开约 8 cm , 取
出 , 晾干 , 喷以三氯化铝试液 , 60 ℃加热至斑点显色清晰 ,
置紫外光灯 (365 nm) 下检视。供试品色谱中 , 在与对照品
色谱相应的位置上 , 显相同的黄绿色荧光斑点 (见图 1)。
图 1　橘红珠中柚皮苷和野漆树苷的薄层鉴别
1. a 柚皮苷 , b野漆树苷;2～ 13. 橘红珠
2. 2　橙皮酯水合物 、 异橙皮内酯的鉴别
取橙皮内酯水合物 、 异橙皮内酯 , 加甲醇制成 0. 5 mg
mL - 1溶液 , 作为橙皮内酯水合物 、 异橙皮内酯对照品溶液。
另取橘红珠药材粉末 1 g , 加甲醇10 mL , 超声 (40 ℃) 处理
20 min , 放冷 , 滤过 , 作为供试品溶液。分别吸取上述 3 种
溶液各10 μL , 点于同一硅胶 G薄层板上, 以石油醚 (60 ℃～
　　作者简介:彭维 , 女 , 副研究员 , 主要从事药品质量控制技术研究　　Tel:(020) 84110808
中南药学 2006年 8月第 4卷第 4期　Cen t ral South Pharmacy. Augus t 2006 , Vol. 4 No. 4
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90 ℃)-醋酸乙酯 (3∶7) 展开约 8 cm , 取出 , 晾干 , 喷以
10%硫酸乙醇溶液 , 60 ℃加热至斑点显色清晰 , 置紫外光
灯 (365 nm) 下检视。供试品色谱中 , 在与对照药材色谱相
应的位置上 , 显相同的亮蓝色荧光斑点 (见图 2)。
图 2　橘红珠中异橙皮内酯和橙皮内酯水合物的薄层鉴别
1. a异橙皮内酯 , b橙皮内酯水合物;2～ 13. 橘红珠
3　高效液相色谱法测定橘红珠中柚皮苷含量
柚皮苷为橘红珠的主要有效成分 , 因此选择柚皮苷作为
橘红珠药材质量控制的定量指标。
3. 1　对照品 、 供试品溶液的制备
3. 1. 1　对照品溶液的制备　取干燥至恒重的柚皮苷对照品
10 mg , 精密称定 , 置 50 m L容量瓶中 , 加甲醇溶解并定容
至刻度 , 摇匀;精密量取 5 mL , 置 10 mL 容量瓶中 , 加甲
醇至刻度 , 摇匀 , 即得 (含柚皮苷 100 μg mL - 1)。
3. 1. 2　供试品溶液的制备　取橘红珠药材粗粉约 0. 5 g , 精
密称定 , 置具塞三角瓶中 , 加石油醚 (60 ℃～ 90 ℃) 25
mL , 超声处理 (360 W , 35 kHz) 15 min , 滤过 , 弃去石油
醚 , 重复上述操作 2 次。 药渣挥去石油醚 , 加甲醇 30 m L ,
超声处理 15 min , 滤过 , 滤液置 100 mL 容量瓶中 , 重复上
述操作 2 次 , 放冷 , 滤过 , 用少量甲醇分数次洗涤容器 , 洗
液滤入同一容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻度 , 摇匀。精密量取
5 m L , 置 25 mL 容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 用
微孔滤膜 (0. 45 μm) 滤过 , 取续滤液 , 即得。
3. 2　色谱条件
色谱柱:Dikma Diamasil C18柱 (250 mm×4. 6 mm , 5μm)。
以甲醇-醋酸-水 (35∶4∶61) 为流动相。检测波长为283 nm。
3. 3　系统适应性试验
分别吸取柚皮苷对照品溶液和橘红珠供试品溶液各 10
μL , 按 “3. 2” 所述色谱条件进样分析 , 从色谱图 (见图 3)
可以看出 , 柚皮苷与其他杂质峰达到基线分离 , 理论塔板数
按柚皮苷计算≥2 000 , 柚皮苷保留时间约为 13 min。
图 3　柚皮苷色谱图
A. 柚皮苷对照品;B. 橘红珠药材;1. 柚皮苷
3. 4　线性及线性范围
精密称取 110 ℃干燥至恒重的柚皮苷对照品 10. 06 mg ,
置 100 mL容量瓶中, 加甲醇使溶解 , 并稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得浓度为 0. 100 6 mg mL - 1。按上述色谱条件 , 吸取柚皮
苷对照品, 以 2、 5 、 10、 15 、 20 μL 连续进样 , 测定。以峰
面积积分值 A对照品的进样量 C (μg) 进行回归分析 , 得回
归方程:A=27. 876 C- 0. 023 3 , r=1. 000 0。结果表明柚皮
苷在 0. 201 2～ 2. 012 0 μg 线性关系良好。
3. 5　精密度试验
精密吸取柚皮苷对照品溶液 , 按 “ 3. 2” 所述色谱条件
连续重复进样 6 次 , 每次进样量均为 10 μL , 结果柚皮苷峰
面积的 RSD为 1. 03%, 表明精密度好。
3. 6　稳定性试验
分别取对照品溶液和供试品溶液各 1 份 , 室温下分别
放置 0、 4 、 8、 12 、 24、 48 h 后 , 按 “ 3. 2” 项所述色谱条
件 , 测定峰面积 , 对照品和供试品 RSD 分别为 1. 35%和
1. 26%, 表明对照品和供试品溶液在 48 h 内稳定。
3. 7　重复性试验
精密称取橘红珠药材 (批号 20041020) 样品 6 份 , 按
“ 3. 1. 2” 所述方法制成供试品溶液 , 精密吸取供试品溶液
10 μL , 按 “ 3. 2” 所述色谱条件进样分析 , 依据峰面积值计
算样品中柚皮苷的含量为 13. 30%, RSD为 0. 98%, 表明重
复性好。
3. 8　加样回收率试验
精密称取已知柚皮苷含量的橘红珠样品 (批号
20041020) 适量 , 再分别精密加入一定量的对照品 , 使供试
品溶液中的柚皮苷浓度分别在柚皮苷标准曲线的高 、 中 、 低
区域各 3 份 , 共 9 份 , 按 “ 3. 1. 2” 项所述方法制备供试品
溶液 , 按 “3. 2” 所述色谱条件进样 10 μL , 分别测定 , 计
算回收率 , 结果 9 份样品的平均加样回收率为 98. 86%,
RSD为 2. 05% (见表 1)。
表 1　化橘红幼果加样回收率试验
样品编号 原有量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率 (%)
RSD
(%)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
20. 17
20. 43
20. 30
30. 70
30. 83
30. 61
50. 29
51. 25
51. 22
17. 05
17. 67
17. 44
26. 10
26. 10
25. 98
42. 36
42. 75
42. 65
36. 55
37. 43
37. 19
56. 72
57. 05
56. 83
92. 83
94. 33
93. 17
96. 07
96. 21
96. 85
99. 69
100. 46
100. 92
100. 42
100. 77
98. 36
98. 86 2. 05
3. 9　样品测定
精密吸取供试品溶液各 10 μL , 依法对 12 批橘红珠药
材进样分析测定 , 计算样品中柚皮苷含量 , 结果见表 2。
表 2　橘红珠中柚皮苷的含量
样品编号 品种 产地或购买地 含量 (%)
1 化州柚带花幼果 化州赖园 20. 03
2 橘红珠 (20041201) 广东化州 12. 43
3 橘红珠 (20041118) 广东怀集 14. 43
4 橘红珠 (20041020) 广州市药材公司 13. 30
5 橘红珠 (20041011) 广州市药材公司 18. 62
6 橘红珠 (20041008) 广东化州 7. 62
7 橘红珠 (20040930) 广东化州 12. 71
8 橘红珠 (20040920) 广东化州 11. 68
9 橘红珠 (20040902) 广东化州 10. 45
10 橘红珠 (20040901) 广东化州 9. 65
11 橘红珠 (20031002) 广州清平药材市场 13. 62
12 橘红珠 (20031001) 广州清平药材市场 11. 86
　　根据 12 批橘红珠中柚皮苷的含量测定结果 , 暂定本品
以干燥品计算 , 含柚皮苷 (C27H32O14) ≥7. 0%。
4　结果与讨论
橘红珠是化州柚的未成熟幼果 , 民间传统常以春末夏初
自然脱落的幼果入药[ 1 , 5] , 其中柚皮苷的含量明显高于化橘
Cen t ral South Pharmacy. August 2006 , Vol. 4 No. 4　中南药学 2006年 8月第 4卷第 4期
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红[ 6] , 而 《中国药典》、 部颁标准和地方标准未收载橘红珠。
本文建立了橘红珠的质量标准 , 为橘红珠的合理药用提供了
质量评价方法。
参考文献
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(收稿日期:2006—03—03　　修回日期:2006—05—10)
替米沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏α-SMA表达影响的
实验研究
易春霞 , 廖海强 , 周于禄 , 裴奇 , 刘世坤* (中南大学湘雅三医院药剂科 , 长沙　410013)
摘要:目的　探讨糖尿病肾病肾脏α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 的表达及血管紧张素-Ⅱ受体 1 拮抗剂替米沙坦对
其表达的影响。方法　将 28只 SD大鼠单次腹腔注射 S TZ (60 mg kg - 1) 诱发实验性糖尿病肾病 , 随机分为糖尿
病肾病组 (D) 和替米沙坦组 (T), 14 只 组 - 1 , 另将 14 只鼠龄及体重相等的 SD 大鼠作为正常对照组。 药物干
预 12 周后 , 称量体重 , 收集 24 h 尿液及血标本 , 取大鼠肾脏组织行免疫组织化学检查α-SMA 。结果　与正常组相
比 , 糖尿病肾病大鼠肾小球内α-SM A 蛋白表达 、 24 h 尿蛋白排泄量以及肾功能各项指标大幅度增高 (P<0. 01) 且
成相关关系 , 替米沙坦能显著性抑制α-SMA蛋白表达 , 减少尿蛋白排泄量以及降低肾功能各项指标 (P<0. 01), 并
能降低 DN 大鼠血糖浓度。结论　糖尿病肾病大鼠肾脏损伤可能与α-SMA 表达增高有关 , 替米沙坦下调α-SMA 表
达 , 减少尿蛋白排泄以及降低肾功能指标 , 可能是其肾脏保护作用机制之一。
关键词:α-SMA;糖尿病肾病;替米沙坦;大鼠
中图分类号:R965　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672 - 2981 (2006) 04 - 0259 - 04
Renal expression ofα-SMA in diabetic nephropathy and
the protective effects of Telmisartan
Yi chun-xia , Liao hai-qiang , Zhou yu-lu Pei qi , Liu shi-kun * (Department o f pharmaceutical reparation , The
third X iangYa Hosp ital of Central South University , Changsha　410013)
ABSTRACT:OBJECTIVETo obser ve the renal expression ofα-smoo th muscle actin (α-SMA) in diabetic nephropathy
(DN) rats and the effects o f Telmisartan as ang io tersin Ⅱ type 1 (AT1) receptor antagonist. METHODS　Twenty-
eight diabetic nephropathy Sprague-Daw ley (SD) rats induced with int rape ritionea l injection of streptozo to cin (STZ)
we re r andomly divided into two g roups:DN rats w ithout the rapy (g roup D , n=14) and DN ra ts treated w ith telmisar-
tan(g roup T , n=14). Four teen SD w ere used as the contro l(g roup N). The urine in 24h and blood samples w ere
collected after the trea tment with Telmisa rtan fo r 12 weeks. The rats were killed and theα-SM A w as determined w ith
immunohistochermist ry. RESULTS　Expression ofα-SMA in the nephr idial tissue , the concentration of U rine pro tein
(UPro) in 24h , and the renal function indicatrix (BUN、 Ccr、 UA) we re significantlu highe r than those in g roup N
(P<0. 01). The expre ssion of α-SMA and UPro 、 BUN、 Ccr、 UA 、 BG decreased significantly after the tr eatment
with telmisa rtan(P<0. 01) . CONELUSION　The expression ofα-SM A and UPro we re increased significantly in the
DN ra ts , Telmisar tan have significant renal pro tective effects in DN rats , and Inhibition ofα-SM A activa tion may be
one of the potential mechanisms.
KEY WORDS:α-smoo th muscle actin;diabetic nephropathy;telmisartan
　　作者简介:易春霞 , 女 , 主管药师 , 主要从事临床药理学研究　　E-mail:yulu0027 @126. com
通讯作者　刘世坤 , 男 , 硕士生导生 , 教授 , 主要从事临床药理学研究　　Tel (Fax):(0731) - 8618496　　E-mai l:L8618496
@126. com
中南药学 2006年 8月第 4卷第 4期　Cen t ral South Pharmacy. Augus t 2006 , Vol. 4 No. 4