全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2016，31(3)∶298 ～ 300
基金项目:广西自然科学基金创新研究团队项目(2011GXNSFF018006);广西“2011 协同创新中心”—壮瑶药协同创新中心(桂教科研〔2013〕
20 号);翻白叶树质量评价及标准研究项目(MZY2012011)
作者简介:黎理(1985—)，女，广西玉林，从事中药鉴定及质量控制的研究工作。
* 通信作者(Correspondent author)，Email:Caiyi118@ 163． com
HPLC测定翻白叶树中的原儿茶酸
黎 理，唐玉荣，颜萍花，蔡 毅*
(广西中医药大学，广西 南宁 530001)
摘要:目的 采用高效液相色谱法测定翻白叶树中原儿茶酸的含量。方法 采用 Phenomenex ODS2 色谱柱(250 mm × 4． 6
mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0． 1%冰乙酸溶液(5∶95)，流速 1． 0 mL·min －1，检测波长 260 nm，柱温 30 ℃。结果 原儿茶酸
0． 0155 ～ 0． 3100 μg与峰面积呈良好的线性关系(r = 0． 9994);平均加样回收率为 98． 71%，ＲSD = 2． 98%(n = 6)。结论 所用
方法简单便捷、灵敏度高、重复性好。
关键词:翻白叶树;梧桐科;原儿茶酸;高效液相色谱法;含量测定;质量控制
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2016)03 － 0298 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2016． 03． 026
Determination of protocatechuic acid in Pterospermum heterophyllum by HPLC
LI Li，TANG Yurong，YAN Pinghua，CAI Yi*
(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530001 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for determining protocatechuic acid in Pterospermum heterophyllum Hance．
METHODS The method was used with the chromatographic column of Phenomenex ODS2(250 mm × 4． 6 mm)，and a mixture of
acetonitrile － 0． 1% glacial acetic acid(5∶95)was used as the mobile phase at a flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The UV detection
wavelength was 260 nm and the column temperature was 30 ℃ ． ＲESULTS The calibration curves of protocatechuic acid was in good
linearity over the range of 0． 0155 － 0． 3100 μg (r = 0． 9994)and the average recovery of protocatechuic acid was 98． 71% with the
ＲSD of 2． 98%(n = 6)． CONCLUSION The method is simple，sensitive and accurate with a high reproducibility．
Key words:Pterospermum heterophyllum Hance;Sterculiaceae;Protocatechuic acid;HPLC;Content determination;Quality control
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2016)03 － 0298 － 03
翻白叶树为梧桐科植物翻白叶树 Pterospermum
heterophyllum Hance的全株，俗名枫荷桂、半边枫荷、
阴阳叶、二不怕等［1］，味甘、淡，性温，具有祛风除
湿、舒筋活血、消肿止痛的功效，可用于治疗风湿或
类风湿性关节炎、风湿痹痛、骨疼、腰腿痛、手足麻
痹、半身不遂、产后风瘫、脚气病及跌打损伤等［2］。
翻白叶树中含有黄烷醇、黄酮、三萜类、甾体类及萘
醌类等多种成分［3 － 4］，药用价值较高，在岭南地区应
用广泛。课题组前期研究发现:翻白叶树中含有活
血化淤的活性成分———原儿茶酸［5 － 6］。因此，现采
用 HPLC法测定了翻白叶树中原儿茶酸的含量，可
为药材的质量控制提供依据。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent)。原儿茶
酸(中国药品生物制品检验所，批号:110809 －
200604);翻白叶树药材采自广西各地，经广西中医
药大学滕建北副教授鉴定为梧桐科植物翻白叶树
Pterospermum heterophyllum Hance 的全株;乙腈为色
谱纯;水为超纯水;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件 采用 Phenomenex ODS2 色谱柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0． 1%
冰乙酸(5∶95)，柱温 30 ℃，流速 1． 0 mL·min －1，检
测波长 260 nm，进样量 10 μL。在此色谱条件下，原
儿茶酸对照品和供试品溶液的色谱图见图 1。
1. 2. 2 提取溶剂和提取方法的考察 分别以甲醇、
无水乙醇、50%甲醇、50%乙醇作为溶剂对翻白叶树
药材进行提取，提取液经 HPLC 测定。计算得上述
溶剂的提取液中原儿茶酸的含量分别为 0． 0142、0、
0. 0472、0. 0487 mg·g －1。结果表明:无水乙醇无法
提取原儿茶酸，甲醇提取液中原儿茶酸的含量较低，
50%乙醇的提取率最高，其次是 50%甲醇，但 50%
乙醇提取出的溶液黏度较大，较难过滤，故选用
50%甲醇作为提取溶剂。分别称取翻白叶树药材
(FBYS －1)1 g，置于具塞锥形瓶中，加入 50%甲醇
25 mL，采用回流提取法、超声提取法各提取 1 h，提
取液经 HPLC测定。结果显示:回流提取法与超声
提取法所得原儿茶酸的含量分别为 0． 0673、0． 0375
mg·g －1，表明回流提取法对原儿茶酸的提取率
较高。
图 1 原儿茶酸对照品(A)和供试品(B)溶液的色谱图
Figure 1 Chromatograms of protocatechuic acid control solution
(A)and sample solution(B)
1. 2. 3 提取工艺的正交试验 结合单因素考察结
果，设定甲醇浓度(A)、回流时间(B)、甲醇用量(C)
为 3 个因素，每个因素设 3 个水平，选用 L9(3
3)表
安排正交试验。因素水平表见表 1。取翻白叶树药
材(FBYS － 1)干燥粗粉 9 份，各 1 g，精密称定，置
100 mL具塞锥形瓶中，按正交试验表进行实验。根
据表 2 结果分析:A 因素对原儿茶酸的提取有显著
性影响，各因素对提取率影响的顺序为 A ＞ B ＞ C;A
因素中以 k2 最大、B 因素中以 k3 最大、C 因素中以
k3 最大，故选择最佳工艺为 A2B3C3。经综合比较后
确定最佳提取方法为加入 50%甲醇 30 mL，加热回
流 2 h。
表 1 正交试验的因素水平表
Table 1 Factors and levels of the orthogonal tests
Levels A /% B /h C /mL
1 30 1 20
2 50 1． 5 25
3 70 2 30
1. 2. 4 溶液的配制 精密称取原儿茶酸对照品适
量，置量瓶中加甲醇制成 0． 031 mg·mL －1对照品溶
液。取翻白叶树药材约 1 g，精密称定，置具塞锥形
瓶中，精密加入 50%甲醇 30 mL，称定重量，加热回
流 2 h，放至室温，再称定重量，用 50%甲醇补足减
失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10 mL，蒸
干，用 50% 甲醇转移至 2 mL 量瓶中并定容，于
1． 3 × 104 r·min －1离心 10 min，取上清液，即得供试
品溶液。
表 2 正交试验的结果(n =3)
Table 2 Ｒesults of the orthogonal tests (n =3)
No． A B C 平均含量 /mg·g － 1
1 1 1 1 0． 0537
2 1 2 2 0． 0601
3 1 3 3 0． 0769
4 2 1 2 0． 0622
5 2 2 3 0． 0711
6 2 3 1 0． 0679
7 3 1 3 0． 0513
8 3 2 1 0． 0506
9 3 3 2 0． 0521
k1 0． 1907 0． 1672 0． 1722
k2 0． 2012 0． 1818 0． 1744
k3 0． 1540 0． 1969 0． 1993
Ｒ 0． 0472 0． 0296 0． 0272
1. 2. 5 标准曲线的制备 分别精密吸取 0． 031
mg·mL －1原儿茶酸对照品溶液 0． 5、1、2、4、8、10
mL，置 10 mL量瓶中，加甲醇定容，得线性溶液。分
别取上述线性溶液各 10 μL 进样，记录色谱图。以
峰面积为纵坐标、对照品进样量(μg)为横坐标绘制
标准曲线，得回归方程为:Y = 3． 4989 × 103X －
19. 762(r = 0． 9994)，原儿茶酸 0． 0155 ～ 0． 3100 μg
与峰面积呈良好的线性关系。
1. 2. 6 精密度、重复性与稳定性试验 取 0． 031
mg·mL －1原儿茶酸对照品溶液 8 mL，定容至 10 mL
量瓶中，连续重复进样 6 次，计算得原儿茶酸峰面积
的 ＲSD = 0． 96%，表明方法的精密度良好。称取翻
白叶树药材干燥粗粉 1 g，共 6 份，精密称定，按
“1. 2. 4”项方法制备供试品溶液，分别进样测定，计
算得峰面积的 ＲSD = 1． 15%，表明方法的重复性良
好。取翻白叶树供试品溶液，于制备后 0、2、4、8、
12、24 h 时分别进样，计算得原儿茶酸峰面积的
ＲSD = 2． 50%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
1. 2. 7 加样回收率试验 取已知原儿茶酸含量
(0． 053 mg·g －1)的翻白叶树药材干燥粗粉 6 份，各
0． 5 g，精密称定;分别精密加入原儿茶酸对照品溶
液(0． 0264 mg·mL －1)1 mL，按“1. 2. 4”项方法制备
供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积。计算得平
均加样回收率为 98． 71%，ＲSD = 2． 98% (n = 6)
(表 3)。
表 3 加样回收试验的结果(mg，n =6)
Table 3 Ｒesults of the recovery tests(mg，n =6)
Original Added Detected Ｒecovery /% 珔X /% ＲSD /%
0． 0265 0． 0264 0． 0516 96． 98 98． 71 2． 98
0． 0266 0． 0264 0． 0523 97． 31
0． 0265 0． 0264 0． 0519 96． 28
0． 0265 0． 0264 0． 0544 103． 01
0． 0265 0． 0264 0． 0521 96． 78
0． 0266 0． 0264 0． 0535 101． 90
992第 3 期 黎 理，等。HPLC测定翻白叶树中的原儿茶酸
1. 2. 8 样品的测定 分别称取不同批次的翻白叶
树干燥粗粉约 1 g，精密称定，按“1． 2． 4”项方法制
备供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算样
品中原儿茶酸的含量(表 4)。
表 4 样品中原儿茶酸含量的测定结果(n =3)
Table 4 Ｒesults of protocatechuic acid content in the samples(n =3)
编号 采集时间 产地 /采集地点
含量 /mg·g － 1
1 2 3
珔X /mg·g － 1 ＲSD /%
FBYS － 1 2012 － 06 － 28 桂林市恭城县(野生) 0． 0501 0． 0502 0． 0517 0． 0506 1． 74
FBYS － 2 2012 － 07 － 06 南宁市老虎岭水库(栽培) 0． 0514 0． 0531 0． 0530 0． 0525 1． 82
FBYS － 3 2012 － 07 － 28 大新县(野生) 0． 0534 0． 0532 0． 0548 0． 0538 1． 67
FBYS － 4 2012 － 10 － 20 南宁市老虎岭水库(栽培) 0． 0377 0． 0365 0． 0359 0． 0367 2． 50
FBYS － 5 2012 － 12 － 28 南宁市老虎岭水库(栽培) 0． 0189 0． 0184 0． 0192 0． 0188 2． 10
FBYS － 6 2013 － 01 － 06 来宾市金秀县大樟乡花炉村(野生) 0． 0189 0． 0188 0． 0198 0． 0192 2． 87
FBYS － 7 2013 － 03 － 11 钦州市钦北区板城镇(野生) 0． 0281 0． 0270 0． 0274 0． 0275 1． 96
FBYS － 8 2013 － 05 － 04 南宁市老虎岭水库(栽培) 0． 0262 0． 0255 0． 0269 0． 0262 2． 57
2 讨论
文中测得 8 批翻白叶树药材中原儿茶酸的含量
为 0． 0188 ～ 0． 0538 mg·g －1，不同产地、不同采收期
对翻白叶树中原儿茶酸含量的影响较大。夏季采收
的翻白叶树中原儿茶酸的含量较高。文中以测定原
儿茶酸的含量作为指标间接控制翻白叶树的质量。
原儿茶酸是活血化淤类药材的重要活性成分，是否
也是翻白叶树的重要活性成分之一还有待研究。
参考文献:
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收稿日期:
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2014 － 11 － 18
祝 贺
李茂星作者在我刊发表的论文《HPLC测定马先蒿属植物中的桃叶珊瑚
苷》所属课题“藏药现代化与独一味新药创制、资源保护及产业化示范”获
得 2015 年国家科技进步二等奖，特此祝贺!
003 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷