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通讯作者:哈木拉提· 吾甫尔 ,教授 , 主任医师 ,博士研究生
导师 , Halmurat@263.net
＊项目来源:国家杰出青年基金项目(编号 30525023);中医
民族医药青年科技人才专项课题(编号 2009ZMY13)
收稿日期:2011-03-08
(编辑　侯勇谋)
文章编号:1001-6910(2011)05-0024-04 ·实验研究·
甘肃多品种甘草对金黄色葡萄球菌抑制作用的比较研究 ＊
邓　毅 ,孙向阳 ,段云燕
(甘肃中医学院 ,甘肃 兰州 730000)
摘要　目的:比较甘肃地产不同品种甘草水煎液对金黄色葡
萄球菌的抑制作用。方法:体外抑菌采用 K-B纸片琼脂扩
散法测定抑菌圈及不同条件下的 pH值范围;体内抑菌以吞
噬指数 、吞噬活性 、巨噬细胞吞噬率及吞噬细菌数为观察指
标比较各甘草组的抑菌作用。结果:各品种甘草对金黄色葡
萄球菌均有抑制作用 , 以中性及弱碱性抑菌活性较高 , 并能
提高小鼠的吞噬指数 、吞噬活性及吞噬率。结论:甘肃多品
种甘草水煎液均具有较强抑制金黄色葡萄球菌的作用 , 其中
野生光果甘草活性最强。
关键词:甘肃;不同品种;甘草 /药效学;金黄色葡萄球菌;抑
制;比较
中图分类号:R282　　文献标志码:B
　　甘草具有补脾益气 、清热解毒 、止咳祛痰 、调和
药性等功效 ,药理研究表明甘草对大肠杆菌 、金黄色
葡萄球菌 、白色葡萄球菌 、绿脓杆菌 、乙型链球菌有
明显抑制作用 [ 1] 。 《中国药典 》记载甘草品种有乌
拉尔甘草 (GlycyrhizauralensisFisch.)、胀果甘草
(GlycyrrhizainflataBat.)、光果甘草(Glycyrrhizagla-
braL.),它们主要分布于内蒙古 、新疆 、甘肃等地。
此外甘肃还产野生黄甘草(GlycyrrhizakorshinskiG.
Grig)。本实验通过甘肃地产不同品种野生乌拉尔
甘草 、野生光果甘草 、野生胀果甘草 、野生黄甘草和
栽培乌拉尔甘草对金黄色葡萄球菌的抑制作用 ,比
较其抑菌的差异 ,为评价甘肃各品种甘草药效提供
实验依据。
1　材料与方法
1.1　动　物
2月龄健康昆明种(SPF)小鼠 230只 ,体质量
18 ～ 22 g,雌雄各半 ,兰州兽医研究所提供 ,动物质
量许可证号:SCZK(甘)2010-0001。
1.2　菌　种
金黄色葡萄球菌标准株 ,由甘肃省食品药品检
验所惠赠 ,菌号:CMCC(B)26003。
1.3　药物制备
野生乌拉尔甘草 、野生光果甘草 、野生胀果甘
草 、野生黄甘草 、栽培乌拉尔甘草 ,购于甘肃省酒泉
市 ,由甘肃中医学院中药鉴定教研室鉴定均为正品 。
体外抑菌药品制备:取破碎至 1 ～ 3 mm长度的以上
各品种甘草各 100g,加水 1 000mL,浸泡 30 min,武
火加热 ,文火煎煮 60 min,纱布滤过 ,得滤液约 700 ～
800mL,水浴浓缩至 50 mL(含生药量 2 g/mL),冰
箱保存备用 。体内抑菌药品制备:同上法取甘草煎
煮 ,水浴浓缩至 500mL(含生药量 0.2g/mL),冰箱
保存供灌胃用。
1.4　试剂与仪器
盐酸林可霉素(0.6 g/2mL),批号 100212,宜昌
人福药业有限公司产品;营养琼脂 ,批号 20071112,国
·24· 　　中医研究　 2011年 5月　第 24卷　第 5期　TCMRes.May2011 Vol.24No.5　　
药集团化学试剂有限公司产品;香柏油 ,上海懿洋仪
器有限公司产品;印度墨水 , Solarbio产品。
ZDX-35BI型座式自动电热压力蒸汽灭菌器 ,
上海申安医疗器械厂产品;HH.B11.600电子恒温
培养箱 ,上海跃进医疗器械厂产品;BS110S型电子
分析天平(精密度 0.01 mg),北京赛多利斯仪器系
统有限公司产品;CH-212显微镜 , OLYMPUS产
品;UV120-02型紫外分光光度计(光度准确度 ±
0.5%T),日本岛津产品。
1.5　体外抑菌实验
将药物分为生理盐水组 、盐酸林可霉素组 、野生
乌拉尔甘草组 、野生光果甘草组 、野生胀果甘草组 、
野生黄甘草组 、栽培乌拉尔甘草组 。
以 K-B纸片琼脂扩散法测定抑菌圈 。将林可
霉素稀释为 64, 128, 256倍 ,各品种甘草水煎液分别
稀释 0, 2, 4倍 ,制备各浓度生理盐水 、盐酸林可霉素
及不同品种甘草含药滤纸片 ,烘干 ,贴于接种金黄色
葡萄球菌的营养琼脂培养皿 , 37 ℃培养 24 h[ 2] 。取
出测定抑菌圈直径 。
测定不同条件 pH值甘草活性。将不同品种甘
草水煎液用盐酸及氢氧化钠分别调至 pH值为 4 , 5,
6, 7, 8 ,制备含药滤纸片 ,烘干 ,贴在已接种金黄色葡
萄球菌的营养琼脂培养皿 , 37 ℃培养 24 h[ 3] 。取出
测定抑菌圈直径。
1.6　体内抑菌实验
取体质量 18 ～ 22 g健康昆明种小鼠 112只 ,雌
雄各半 ,自由饮食饮水 3d。称体重 ,苦味酸标记 ,随
机分为生理盐水组 、模型对照组 、野生乌拉尔甘草
组 、野生光果甘草组 、野生胀果甘草组 、野生黄甘草
组 、栽培乌拉尔甘草组 、盐酸林可霉素组 8组 ,每组
14只。阴性对照组 、模型对照组给予生理盐水
14.8 μL/g灌胃 ,野生乌拉尔甘草组 、野生光果甘草
组 、野生胀果甘草组 、野生黄甘草组 、栽培乌拉尔甘
草组各组分别给予不同品种甘草水煎液 14.8 μL/g
灌胃 , 阳性对照组给予 40 g/L盐酸林可霉素
14.8μL/g灌胃。每日 2次 ,连续 3d。第 4日清晨除
阴性对照组外 ,其余各组乙醚麻醉 ,用磨去针尖的皮
试注射器吸取 0.05mL金黄色葡萄球菌菌悬液鼻腔
注射 ,清晨 、下午各接种 1次 [ 4-5] ,造模后各组再分别
连续给药 4d。于第 8日首次给药后 30 min,小鼠尾
静脉注射以 1%明胶稀释 4倍的印度墨水 10μL/g,
并于 10 s、120 s眼眶采血各 20 μL,分别溶于 4 mL
的 0.1% Na2CO3溶液中 ,摇匀待检。最后将小鼠颈
椎脱臼处死 ,分别取肝 、脾称重[ 6] ,用 UV120-02型
紫外分光光度仪 ,波长 675 nm比色 ,测定溶有血液
的 Na2CO3溶液光密度(OD)值 ,计算吞噬指数及吞
噬活性 。公式如下:
k=(logOD1 -logOD2)/t2 -t1 , α=2 K×体质
量 /(肝质量 +脾质量)
另取体质量 18 ～ 22 g健康昆明种小鼠 112只 ,
分组 、给药 、接种金黄色葡萄球菌 、造模方法同上 。
于第 8日晨脱颈处死小鼠 ,摘取气管 、肺 ,用注射器
抽取生理盐水 3mL,分 3次冲洗肺 、支气管 ,收集冲
洗液于离心管中离心 ,以 3 000 r/min离心沉淀 [ 7] 。
将沉淀物以瑞氏染色 ,以油镜(×40)观察每 100个
巨噬细胞中吞噬金黄色葡萄球菌的巨噬细胞数及
吞噬细菌数 , 计算吞噬率及吞噬金黄色葡萄球
菌数 。
1.7　统计学方法
采用 SPSS17.0统计分析软件处理 。计量资料
数据以均数( x)±标准差(s)表示 ,组间比较采用配
对样本 t检验。以 P<0.05为差别有统计学意义。
2　结　果
2.1　不同品种甘草不同稀释倍数的抑菌圈对比
见表 1。结果表明各品种甘草在原浓度条件
下均能扩大抑菌圈 ,但随着浓度的稀释抑菌圈逐
渐减小 ,组间比较野生光果甘草抑菌圈最大(P<
0.05)。
表 1　各组不同稀释倍数的抑菌圈对比　 mm, x±s
组　别 动物数 　　　　　0倍 　　　　　 2倍 　　　　　4倍
生理盐水组 9 6.00±0.00 6.00±0.00 6.00±0.00
盐酸林可霉素组 9 29.97±0.95＊ 18.59±0.33＊ 14.31±0.59＊
野生乌拉尔甘草组 9 12.70±0.38＊# 12.00±0.34＊# 7.00±0.28＊#
野生光果甘草组 9 22.70±0.26＊ 17.00±0.36＊ 13.70±0.29＊
野生胀果甘草组 9 13.30±0.28＊# 9.00±0.29＊# 6.00±0.00#
野生黄甘草组 9 16.20±0.29＊# 9.30±0.24＊# 6.00±0.00#
栽培乌拉尔甘草组 9 13.70±0.33＊# 8.00±0.25＊# 7.70±0.18＊#
　注:与生理盐水组对比 , ＊ P<0.05;与野生光果甘草组对比 , #P<0.05。
2.2　不同品种甘草抑菌活性 pH范围对比
见表 2。结果表明 ,同条件下野生乌拉尔甘草 、
野生光果甘草 、野生胀果甘草 、野生黄甘草各组抑菌
活性强度呈现中性或碱性趋势 。其中野生胀果甘草
·25·　　中医研究　 2011年 5月　第 24卷　第 5期　TCMRes.May2011 Vol.24No.5　　
的抑菌活性较强(P<0.05),栽培乌拉尔甘草的抑 菌活性呈现强酸性。
表 2　各组抑菌活性 pH范围对比　 mm, x±s
组　别 动物数 pH值　　　4 　　　5 　　　6 　　　7 　　　8
野生乌拉尔甘草组 9 11.03±0.34＊ 11.50±0.25 12.22±0.50 18.50±0.29# 19.40±0.39#
野生光果甘草组 9 10.80±0.24＊ 11.77±0.31 12.44±0.36 18.50±0.41# 19.41±0.37#
野生胀果甘草组 9 11.00±0.23＊ 14.77±0.31 17.50±0.37 24.50±0.26 24.50±0.32
野生黄甘草组 9 10.74±0.39＊ 14.74±0.38 17.77±0.29 18.42±0.35# 19.55±0.31#
栽培乌拉尔甘草组 9 25.00±0.35 11.50±0.32 10.50±0.27 9.50±0.23# 8.50±0.29#
　注:中性条件下与野生胀果甘草组对比 , ＊ P<0.05;酸性条件下与栽培乌拉尔甘草组对比 , #P<0.05。
2.3　不同品种甘草对小鼠吞噬指数及吞噬活性的
影响
见表 3。结果表明各品种甘草均能提高小鼠吞噬
指数及吞噬活性 ,与模型组比较差别有统计学意义
(P<0.05),但组间比较差别无统计学意义(P>0.05)。
表 3　各组小鼠吞噬指数(k)、吞噬活性(a)对比　
x±s
组　别 动物数 吞噬指数 k(10-2s-1) 吞噬活性 a
生理盐水组 9 0.03±0.02 0.99 ±0.24
模型对照组 9 0.12±0.12 1.40 ±0.47
野生乌拉尔甘草组 12 0.32±0.21＊ 1.99 ±0.49＊
野生光果甘草组 13 0.36±0.20＊ 2.02 ±0.58＊
野生胀果甘草组 9 0.27±0.09＊ 1.99 ±0.29＊
野生黄甘草组 13 0.30±0.17＊ 2.00 ±0.29＊
栽培乌拉尔甘草组 12 0.25±0.14＊ 1.97 ±0.37＊
盐酸林可霉素组 9 0.37±0.26＊ 2.06 ±0.79＊
　注:与模型对照组对比 , ＊ P<0.05。由于小鼠个体差异 、实验时间过长使标本采集不
全 ,各组动物数不一 ,少于实验分组数。
2.4　不同品种甘草对小鼠肺巨噬细胞吞噬率及吞
噬金黄色葡萄球菌数的影响
见表 4。结果表明各品种甘草均能提高小鼠巨
噬细胞吞噬率及吞噬金黄色葡萄球菌数 ,与模型组
比较差别有统计学意义 (P<0.05),组间比较野生
光果甘草作用较强(P<0.05)。
表 4　各组小鼠肺巨噬细胞吞噬率及
吞噬金黄色葡萄球菌数对比　 x±s
组　别 动物数 　　巨噬细胞吞噬率 /% 吞噬金黄色葡萄球菌数
生理盐水组 12 7.40±2.27 21.00±6.04
模型对照组 12 12.60±6.10 29.20±10.21
野生乌拉尔甘草组 12 17.90±3.76＊# 66.10±12.96＊#
野生光果甘草组 10 30.90±3.18＊ 94.00±15.25＊
野生胀果甘草组 13 20.40±3.69＊# 74.60±14.50＊#
野生黄甘草组 11 17.70±4.40＊# 67.60±18.67＊#
栽培乌拉尔甘草组 10 18.80±6.49＊# 62.00±21.61＊#
盐酸林可霉素组 12 36.00±5.72 116.30±19.24
　注:与模型对照组对比 , ＊ P<0.05;与野生光果甘草组对比 , #P<0.05。由于小鼠个体
差异 ,实验时间过长使标本采集不全 ,各组动物数不一 ,少于实验分组数。
3　讨　论
甘肃是甘草的主要产区 ,亦为 “归芪党黄草 ”五
大道地药材之一 ,质地优良 ,品种齐全。乌拉尔甘草
分布于酒泉 、张掖 、武威 、庆阳等地区 ,胀果甘草分布
于河西地区 ,光果甘草主要分布于安西 、敦煌部分地
区 ,黄甘草多分布在金塔 、酒泉 、玉门等地[ 8] 。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌 ,可通过
内源性或外源性感染机体 ,在机体内增值 、扩散和产
生凝固酶 、葡萄球菌溶素 、杀白细胞素 、肠毒素 、表皮
剥脱毒素及毒性休克综合征毒素 -1等有害物质 ,
引起宿主疾病[ 9] 。研究表明甘草水提液 [ 10] 、甘草醇
提液[ 11] 、甘草黄酮类化合物[ 12] 、甘草酸 [ 13] 、甘草次
酸 [ 14]体外实验对金黄色葡萄球菌均有较强的抑制
作用。甘草所含的三萜类成分有增强机体免疫功能
的作用 ,既可以降低感染后的炎症反应 ,又可增强被
抑制的抗感染免疫功能 ,与抗生素比较 ,对病菌具有
双重抑制作用。
抑菌圈大小及不同条件 pH值活性是衡量药物
抑菌作用的直观指标 。各品种甘草在原浓度条件下
均能扩大抑菌圈 ,但随着浓度的稀释抑菌圈逐渐减
小 ,组间比较野生光果甘草抑菌圈最大(P<0.05);
同条件下各野生甘草组抑菌活性强度呈现中性或碱
性趋势 ,其中野生胀果甘草的抑菌活性较强(P<
0.05)。栽培乌拉尔甘草的抑菌活性呈现强酸性 ,
这种现象可能与栽培品在酸性条件下大量淀粉水解
为单糖或低聚糖 ,产生局部高渗透压有关 , 其作用
机制尚需进一步研究 。
吞噬指数 、吞噬活性 、吞噬率是与免疫有关的指
标 。抑菌过程既有药物对细菌的直接杀灭作用 ,也
有机体细胞免疫系统对细菌的吞噬作用。甘草能增
强机体的细胞免疫功能 ,提高巨噬细胞吞噬作用 ,将
直接抑菌与机体免疫结合起来达到双重抑菌效果 。
综合比较各品种甘草体内抑菌野生光果甘草作用相
对较强 ,野生乌拉尔甘草与栽培乌拉尔甘草二者区
别不大 ,提示栽培乌拉尔甘草在体内抑菌可替代野
生乌拉尔甘草。
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作者简介
邓毅(1964-),男(汉族),江苏金坛人 , 教授 , 1986年毕
业于甘肃中医学院 , 现任药学系副主任 , 中药学学科学术带
头人 , 中药及复方应用的研究方向硕士研究生导师 , 主要从
事中药学教学 、中药性能与配伍应用及中药不良反应的研
究。
＊项目来源:甘肃省教育厅资助项目———甘肃多品种甘草
的药效及毒性对比研究(编号 0806-03)
收稿日期:2010-11-15;修回日期:2011-03-27
(编辑　侯勇谋)
文章编号:1001-6910(2011)05-0027-03 ·实验研究·
消痔栓抗炎 、消肿 、镇痛 、止血的药效作用研究 ＊
赵高斯1 ,张小元 1 ,徐基伟 1 ,刘永杰 2
(1.甘肃中医学院附属医院 ,甘肃 兰州 730020;2.天水市中医院 ,甘肃 天水 730000)
摘要　目的:研究消痔栓抗炎 、消肿 、镇痛 、止血的药效作用。
方法:采用小鼠耳肿胀模型 、冰醋酸致痛扭体 、断尾测定出凝
血时间实验 , 观察消痔栓的抗炎消肿 、镇痛 、止血作用。结
果:消痔栓能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀 , 减少冰醋酸
致小鼠扭体次数 ,缩短小鼠断尾出凝血时间。结论:消痔栓
对动物模型具有明显的抗炎 、消肿 、镇痛 、止血作用。
关键词:消痔栓 /药效学;痔疮 /药物作用;疾病模型;动物 ,小鼠
中图分类号:R286　　文献标志码:B
　　痔疮是一种常见病 、多发病 ,病程较长 ,易反复
发作 。我院采用消痔栓对于痔疮的保守治疗及术后
辅助治疗 ,效果显著 ,深受广大患者的欢迎。为了研
究其主要药效 ,设立该实验。
1　材料与方法
1.1　动　物
健康的近交系昆明种小白鼠 180只 , SPF级 ,雌
雄各半 ,体质量(20±2)g, 70 ～ 75日龄 ,由甘肃中医
学院实验中心提供 ,动物质量许可证号:SCXK(甘)
2004-0006-0000409。
1.2　药　物
消痔栓(由大黄 、槐角 、黄连等组成)及基质(合
成脂肪酸甘油酯)均由甘肃中医学院附属医院药剂
室提供 ,院内制剂批号 080623;消痔栓每粒 2.50 g,
含生药 0.47 g;阳性对照药马应龙麝香痔疮栓由马
应龙药业集团股份有限公司生产 ,批号 080909,每
粒 1.50 g,含生药 0.33 g。给药临用前将药物放于
试管中在热板测痛仪中温水浴熔化。标准剂量相当
于成人日用量的 10倍 。
1.3　试剂与仪器
二甲苯液分析纯 ,莱阳市双双化工有限公司产
品 ,批号 081018;冰醋酸分析纯 ,天津市红岩化学试
剂厂产品 ,批号 080820;ES-1000E型电子天平 ,湖
南长沙湘平科技发展有限公司产品;RCY-2型热
板测痛仪 , 上海益联科教设备有限公司产品;
BS110S型半自动分析天平 ,北京赛多利斯仪器系统
有限公司产品。
1.4　分　组
在 SPF级实验室 (温度 20 ～ 25 ℃,相对湿度
40% ～ 70%),按体质量编号 ,采用随机数字表法随
机分组 ,每组 10只 ,雌雄各半。
1.5　统计学方法
采用 SPSS14.0统计分析软件包进行统计 。所
·27·　　中医研究　 2011年 5月　第 24卷　第 5期　TCMRes.May2011 Vol.24No.5