全 文 ：茅莓总皂苷体外抗肿瘤作用研究
郑振 　张玲菊　黄常新　黄巧玲　尉晓冬　叶建根
基金项目:杭州市科技局基金资助项目(2004433Q21)
杭州市卫生局基金资助项目(2004A006)
作者单位:310009杭州市第三人民医院(郑振 )
310006浙江大学医学院附属第一医院(张玲菊　　
　　　　　　　　黄常新黄巧玲 尉晓东叶建根)
　　茅莓(Rubus parviflolius L.),别名天青地白草 、红梅消 、
三月泡 ,为蔷薇科悬钩子植物 ,具有活血化瘀 ,清热解毒等
作用。本研究选择了 HR8348直肠腺癌细胞 、A375黑色素瘤
细胞 、Hut-78人皮肤 T 细胞淋巴瘤细胞和 A431人表皮癌
细胞为癌细胞株 ,用茅莓总皂苷对它们进行体外抗肿瘤试
验 ,同时检测了茅莓总皂苷对 HR8348 直肠腺癌周期的影
响 ,结果显示对前三种肿瘤有良好的抗肿瘤活性 ,通过将细
胞周期阻滞在 S期在而发挥抗肿瘤作用 。
1　材料与方法
1.1　茅莓总皂苷 　茅莓总皂苷由浙江省中医药研究院提
取 。实验所用高中低三种浓度分别为 1mg%、0.1mg%和
0.01mg%。
1.2　细胞株　HR8348直肠腺癌细胞 、A375黑色素细胞瘤细
胞 、Hut-78人皮肤 T细胞淋巴瘤细胞和 A431人表皮癌细
胞(均购自中国科学院上海细胞生物研究所)。
1.3　主要药品与试剂　茅莓总皂苷 ,环磷酰胺;多聚甲醛
AR;RPMI 1640粉末 ,使用时按要求配制成培养液 , 并加入
10%灭活小牛血清和 100μg链霉素;胰蛋白酶 ,使用时用 pH
7.2磷酸盐缓冲液(PBS)配制成 0.25%的溶液;MTT(噻唑
兰),DMSO(二甲基亚砜);胎牛血清(FBS);乙二胺四乙酸
(EDTA ,美国Sigma公司);PBS(每 1000ml含 8gNaCl ,0.2gKCl ,
1.44gNa2HPO4 ,0.24gKH2PO4);8分光光度检测试剂盒 。
1.4　主要仪器 　超净工作台 , IX -70 型倒置显微镜 ,
HF151UV CO2培养箱 ,BASO2002-2型离心机 ,Wellscan MK3
型酶标仪 。流式细胞仪 FACS Calibur 。
1.5　体外抑瘤实验(MTT 法)　将 A375人恶性黑色素瘤细
胞 、HR8348结肠癌细胞 、A431表皮癌细胞和Hut-78人皮肤
T细胞淋巴瘤细胞分别与 0.25%胰酶 、0.02%EDTA 混合消
化后计数调节细胞为 1×105/ml ,于 96孔板加入 18μl ,并同
时加入不同浓度的药液(高 1mg%、中 0.1mg%和低0.01
mg%)20μl/孔 。以加入环磷酰胺及不加药作对照 。CO2 培
养箱培养 48h后 ,加入噻唑兰(MTT)PBS溶液 5mg/ml ,再培
养4h ,直接加入 0.1ml 二甲基亚砜振荡 10min ,于酶标仪
570nm测A 值 。
1.6　茅莓总皂苷对 HR8348直肠腺癌细胞细胞周期的影响
　HR8348直肠腺癌细胞经茅莓总皂苷处理后用胰酶消化 ,
PBS洗涤 ,70%乙醇固定 ,置于 4℃冰箱内过夜。次日用 PBS
洗 2次 ,调整细胞浓度至 1×106/ml , 用 PI 染液避光染色
30min ,流式细胞仪 FACS Calibur检测 。每样本检测 10000个
细胞 ,按 FACSORT软件进行曲线拟合分析 ,计算 DNA含量 ,
得出细胞周期(G1 、S 、G2+M)的百分比 。
1.7　统计学分析　各实验结果表示为(x±s),数据间差异
性统计选用双侧 t 检验 。
2　结果
2.1　MTT 比色法测定茅莓总皂苷对 HR8348结肠癌细胞增
殖的影响　结果表明 ,高 、中浓度茅莓总皂苷药对结肠癌细
胞HR8348增殖有明显的抑制作用。见表 1。
2.2　MTT比色法测定茅莓总皂苷对皮肤 T细胞淋巴瘤细胞
增殖的影响　结果表明 ,高 、中浓度茅莓总皂苷药对皮肤 T
细胞淋巴瘤细胞 Hut-78增殖有明显的抑制作用 。见表 2。
2.3　MTT 比色法测定茅莓总皂苷对 A375人恶性黑色素瘤
细胞增殖的影响　结果表明 ,高 、中浓度茅莓总皂苷对 A375
人恶性黑色素瘤细胞增殖有明显的抑制作用 。见表 3。
2.4　MTT 比色法测定茅莓总皂苷对人表皮癌 A431细胞增
殖的影响　结果表明 ,高 、中浓度茅莓总皂苷药对人表皮癌
A431细胞增殖无明显的抑制作用。见表 4。
2.5　茅莓总皂苷对 HR8348直肠腺癌细胞周期的影响 　如
表5所示:茅莓总皂苷高 、中浓度(1mg%、0.1mg%)作用于
HR8348直肠腺癌细胞 72h 后 , S 期细胞分别占(53.05 ±
1.75)和(47.87±1.51)与对照组比较有显著性差异(P <
0.01 , P <0.001),细胞明显地被阻滞在 S期 ,而且这种 S期
的阻滞呈剂量依赖关系 。
表1　茅莓总皂苷对HR8348结肠癌细胞增殖的影响
组别 药物 剂量 A 值(mean±SD)
1 CTX 1.5mg% 0.563±0.131＊
2 茅莓总皂苷 1mg% 0.681±0.142＊
3 茅莓总皂苷 0.1mg% 0.757±0.145＊
4 茅莓总皂苷 0.01mg% 0.853±0.176　
5 阴性对照组 0.890±0.173　
　　注:与对照组5 比较＊P<0.05
表2　茅莓总皂苷对皮肤T 细胞淋巴瘤细胞增殖的影响
组别 药物 剂量 A 值(mean±SD)
1 CTX 1.5mg% 0.545±0.101＊
2 茅莓总皂苷 1mg% 0.690±0.122＊
3 茅莓总皂苷 0.1mg% 0.778±0.095＊
4 茅莓总皂苷 0.01mg% 0.870±0.116　
5 阴性对照组 0.906±0.093　
　　注:与对照组5 比较＊P<0.05
表 3　茅莓总皂苷对黑色素细胞瘤A375细胞增殖的影响
组别 药物 剂量 A 值(mean±SD)
1 CTX 1.5mg% 0.551±0.091＊
2 茅莓总皂苷 1mg% 0.690±0.125＊
3 茅莓总皂苷 0.1mg% 0.772±0.087＊
4 茅莓总皂苷 0.01mg% 0.885±0.123　
5 对照组 0.911±0.089　
　　注:与对照组5 比较＊P<0.05
表 4　茅莓总皂苷对人表皮癌A431细胞增殖的影响
组别 药物 剂量 A 值(mean±SD)
1 CTX 1.5mg% 0.548±0.101＊
2 茅莓总皂苷 1mg% 0.869±0.109　
3 茅莓总皂苷 0.1mg% 0.884±0.118　
4 茅莓总皂苷 0.01mg% 0.876±0.097　
5 对照组 0.911±0.093　
　　注:与对照组5 比较＊P<0.05
·611·浙江临床医学 2007年 5月第 9卷第 5期
27例渔民肺挫裂伤诊治分析
吕明沈　卢　敏　林孝银
作者单位:325800浙江省苍南县第三人民医院急诊科
　　本院急诊科自 2000年 8月至 2006年 6月共收治 27例
渔民被绳索弹击 、绞榨致肺挫裂伤的患者 ,现将救治体会报
告如下 。
1　临床资料
1.1　一般资料　本组 27例 ,均为男性 ,年龄为 27 ～ 48岁 ,
平均年龄 38岁 。入院时间为受伤后 3h到 32h不等 。
1.2　致伤原因　10例为海上作业时被绳索弹伤(37.0%),
17例为海上作业时被绳索绞伤(63.0%)。
1.3　临床表现　主要症状为胸痛 、呼吸困难 、咳嗽 、咳粉红
色泡沫痰 、咯血 。体征有胸壁青紫 、皮下气肿 、连枷胸 、两肺
可闻及干 、湿 音 、端坐呼吸 、休克等 。
1.4　合并损伤　本组 27例均合并肋骨骨折 ,22例合并血气
胸 。
1.5　诊断方法　询问病史 ,根据患者症状 、体征 、查血气分
析 、胸片 、胸部 CT等加以确诊 。
1.6　治疗措施　本组 27例有 22例行胸腔闭式引流术 , 12
例予呼吸机辅助呼吸治疗 ,常规予保持呼吸道通畅 、吸氧 、
抗炎 、预防感染 、胸带固定 、输液等治疗 。结果有 24例治愈
出院 , 3例转上级医院进一步诊治 。
2　讨论
肺挫裂伤指在外力作用下 ,胸腔容积瞬间缩小与肺内
产生极高的压力 ,导致肺组织广泛挫裂伤 ,为气压造成的间
接损伤[ 1] 。本组 27例均为在海上作业时不慎意外受到绳索
的弹伤及绞伤造成胸廓的变形 、致胸腔容积瞬间缩小与肺
组织(肺泡 、细支气管 、血管 、肺间质等)广泛挫裂伤 ,最终出
现肺出血 、水肿 ,突变致肺气血交换功能障碍 ,导致呼吸功
能衰竭 。本组未出现合并胸腔内大血管断裂出血导致的失
血性休克 、颅脑、心脏 、腹腔及四肢的损伤 。由于本组均为
在海上作业时受伤 ,所以来院时离受伤的时间较长 ,呼吸功
能不全表现的尤为突出 ,而严重呼吸功能不全是造成肺挫
裂伤死亡的主要原因之一 。目前肺挫裂伤的病死率为 15%
～ 40%[ 2] 。所以及时的呼吸机辅助呼吸是救治严重呼吸功
能不全确切可靠的有效手段 。本组出现严重呼吸功能不全
12例 ,其中 ARDS 3例 ,均予呼吸机辅助呼吸治疗 ,除 3例转
上级医院治疗外 , 其余 9例均在一周内脱机 , 最终治愈出
院 。所以作者认为:(1)清除呼吸道分泌物 ,保持呼吸道通
畅 ,立即予鼻导管或面罩给氧 ,胸片或胸部 CT提示有血气
胸的患者 ,应尽早安放胸腔闭式引流装置 。(1)严密监测患
者的心率 、血压 、血氧饱和度 ,对于经吸氧 、大剂量激素冲击
治疗 、抗炎 ,排痰等处理后 ,患者血氧饱和度仍低于 90%,血
气分析示 PO2<60mmHg ,应尽早行气管插管 、呼吸机辅助呼
吸治疗 。早期 、短期及大剂量应用肾皮质激素 ,选择足量有
效抗生素来预防感染 ,促进排痰 ,积极防治肺水肿 ,合并肋
骨骨折的予胸带固定 ,镇痛等这些处理均是非常必要的[ 3] 。
参考文献
1王瑞祥 ,常光春.重度肺挫裂伤伴呼吸功能不全 38例.北京:人
民军医杂志 , 2003 .643.
2方先业 ,石建华.实用急诊医学.北京:人民军医出版社, 2002.202.
3苏鸿熙 ,刘世坦.现代多发伤治疗学.北京:人民军医出版社 ,
1993.644.
表 5　茅莓总皂苷对HR8348直肠腺癌细胞周期的影响(%)
　　　分组 G0-G1 期 S期 G2-M 期
对照组 40.75±2.78 39.01±2.15 21.12±1.59
茅莓总皂苷 1mg% 28.32±3.02＊ 53.05±1.75■ 18.65±1.38
茅莓总皂苷 0.1mg% 35.04±2.17# 47.87±1.51＊ 17.16±1.41
　　注:与对照组比较#P<0.05 , ＊P<0.01, ■P<0.001
3　讨论
近年来的研究表明植物中的三萜皂苷具有较强的抗肿
瘤作用[ 1 ～ 3] ,多数已作为抗癌中药试用于临床[ 4] 。茅莓作为
悬钩子属植物仅在民间作为抗肿瘤中草药应用 ,尤其是消化
道肿瘤 。近几年的研究发现茅莓提取物中含有多种三萜类化合
物[5 ,6] ,而国内至今未见有关抗肿瘤作用的实验研究。
本研究结果表明 ,通过MTT比色法检测茅莓总皂苷的体
外抗肿瘤作用 , 其高 、中浓度组对 HR8348直肠腺癌细胞 、
A375黑色素细胞瘤细胞和 Hut-78人皮肤 T细胞淋巴瘤三
种细胞有明显抑制作用 。与对照组相比有显著性差异(P <
0.05);为了研究茅莓总皂苷抗肿瘤作用机制 ,作者应用了流
式细胞技术 ,分析了茅莓总皂苷对 HR8348直肠癌细胞周期
的影响 。结果显示将细胞均阻滞在 S期 ,使细胞不能进入M
期进行有丝分裂 ,从而抑制直肠腺癌细胞的生长 。
参考文献
1Fujioka T ,Kashiwada Y , Okabe H, et al.Antitumor agents 171.Cytotoxicities
of lobatosides B , C, Dand E cyclic bisdesmosides isolated fromActinostemma
lobatum Maxim.Bioorg Med Chem Lett , 1996, 6(23):2807～ 2810.
2 Barthomeuf C , Debiton E , Mshvildadze V , et a1.In vitro activity of
Hederacolchisid At compared with other saponins from Hedera colchica
against proliferation of human carcinoma and melanoma cells.Plnta Med ,
2002 , 68(8):672～ 675.
3廖循 ,李伯刚 ,高小平 ,等.西南银莲花的活性三萜皂苷.中草药 ,
2001, 32(6):493～ 496.
4王敏 ,贾正平 ,马骏 ,等.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用.中
国中药杂志 , 2005 , 30(8):603～ 606.
5都述虎 ,冯芳 ,刘文英 ,等.茅莓化学成分的分离鉴定.中国天然药
物.2005, 3(1):17～ 20.
6谭明雄 ,王恒山 , 黎霜, 等.中药茅莓化学成分研究.广西植物 ,
2003 , 23(3):282～ 284.
·612· 浙江临床医学 2007年 5月第 9卷第 5期