全 文 :北方药学 2016年第 13卷第 7期
中药茅莓根、茎、叶中表儿茶素的含量测定
黄 镛1 林钰文 2 杨柳青 1(1.广东省中医院药学部 广州 510120;2.广州市医药职业学校 广州 510430)
摘要:目的:比较中药茅莓不同部位中表儿茶素的含量,为临床用药提供参考。方法:采用 HPLC法测定茅莓根、茎、叶中表儿茶素
的含量,从化学成分上考察茅莓不同药用部位有效成分的分布。结果:不同产地茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有一定差异,以广西
产地的含量稍高;茅莓根、茎、叶等部位均含有表儿茶素,三者含量有明显差异,含量的大小顺序依次为:叶>根>茎。结论:茅莓根、
茎、叶中表儿茶素含量有显著差异,临床上作为药用应有所区别。
关键词:茅莓 药用部位 表儿茶素 含量测定 HPLC
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1672-8351(2016)07-0003-02
The Determination of the Content of L-epicatechin of Roots,Stems and Leaves from Rubus parvifolius L.
Huang Yong1 Lin Yuwen2 Yang Liuqing1 (1.Pharmaceutical Department of Guangdong Provincial Hospital of TCM,Guangdong,
Guangzhou,510120;China. 2.Guangzhou Pharmaceutical School Guangzhou,510430.)
Abstract:Objective:To compare the content of L -epicatechin from different parts of Rubus parvifolius L,to provide reference for
clinical application. Methods:Using the method of HPLC to determine the content of L-epicatechin from roots,stems and leaves of
Rubus parvifolius L.,to evaluate similarities and differences of Clinical efficacy on the chemical composition. Results:There was some
different of the content of L-epicatechin for different place of Rubus parvifolius L.,and the content of Rubus parvifolius L .from Guangxi
was lightly higher,we found the compound of L -epicatechin from roots,stems and leaves of Rubus parvifolius L.,and there are
significant differences in the content of the three,the size of the order was:leaf> root> stem. Conclusion:There was some different of
the content of L-epicatechin for roots,stems and leaves of Rubus parvifolius L.,it should be different as a medicinal clinic.
Key words:Rubus parvifolius L. Medicinal parts L-epicatechin Determination HPLC
茅莓为蔷薇科悬钩子属植物,是广东地区民间常用药,别名
蛇泡簕、红梅消、三月泡、薅秧藨、天青地白草等,根、茎、叶及全
草均可药用,具有清热凉血、散结止痛、利尿消肿等功效,广泛用
于感冒发热、跌打损伤、急性咽喉炎、肾盂肾炎、痛经等疾病的治
疗[1~2]。临床上常以茅莓根入药,《广东省中药材标准(第二册)》
也仅收录了茅莓根,从功效上分析,其根、茎、叶功效基本一致。
研究表明,茅莓中含有化学成分包括:微量元素类、糖类、色素
类、三萜及其苷类、黄酮/酚类、甾体及其苷类,以及茅莓叶中大
量的挥发油类成分等[3]。有文献报道,黄酮类成分是茅莓根中主
要有效成分之一,表儿茶素在黄酮类成分中含量较大,具有保
肝、抗癌的药理作用[4],可作为茅莓根的主要药效评价成分。茅
莓茎和叶中是否含有表儿茶素,本文将对其根、茎、叶不同部位
中的表儿茶素进行测定,为临床用药提供参考。
1 仪器与试药
Agilent-1100高效液相色谱仪,包括 DAD检测器、自动进
样器、在线脱气、四元泵(美国安捷伦科技有限公司);SARTO-
RIUS BP211D型电子天平(十万分之一)。表儿茶素对照品(批
号:11878—201202)购于中国药品生物制品检定所(纯度≥
98.0%);茅莓采集于广东、广西等地,经广州中医药大学中药鉴
定教研室鉴定为蔷薇科悬钩子属植物茅莓 Rubus parvifolius L.的
干燥全草。乙腈为色谱纯,甲醇等试剂均为分析纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:Agilent Extend C18(250mm×4.6mm,
5μm);流动相:乙腈-水(12∶88);流速:1.0mL·min-1;柱温:25℃;
检测波长:280nm;进样量为 20μL。
2.2 对照品溶液的制备:精密称取表儿茶素对照品适量,置于
25mL量瓶中,加 50%甲醇稀释至刻度,摇匀,制得 0.6mg/mL对
照品溶液,过 0.45μm微孔滤膜,即得。
2.3 供试品溶液制备:取茅莓根、茎、叶样品粉末 1g,5份,精密
称定,置 100mL具塞锥形瓶,精密加入 50%甲醇 25mL,称定重
量,超声提取 90min(功率 240W,频率 45kHz),放冷,再称定重
量,用 50%甲醇补足减失重量,摇匀,离心取上清液,过 0.45μm
微孔滤膜,即得。
2.4 标准曲线的制备:精密量取表儿茶素对照品溶液适量分别
稀释成浓度为 0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、
0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL的标准溶液,按照上述的色谱条
件进样 20μL,测定表儿茶素的峰面积,以峰面积 Y为纵坐标,
进样浓度(mg/mL)为横坐标绘制标准曲线,得到回归方程分别
为:Y=12874X-12.475(R2=0.9998)。
2.5精密度试验:精密吸取表儿茶素对照品溶液 20μL,按上述色
谱条件重复进样 5次,照上述色谱条件测定表儿茶素的峰面积。结
果表儿茶素峰面积的 RSD=1.08%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验:取同一份供试品溶液,按“2.3”项下方法制备供试
品溶液,照上述色谱条件,在 0、12、24、36、48h进样测定。结果表儿
茶素峰面积的RSD=1.16%(n=5),表明供试品溶液在 48h内稳定。
2.7重复性试验:取同一批供试品样品 5份,按“2.3”项下方法制
备供试品溶液,照上述色谱条件分别进样 20μL。结果表儿茶素
峰面积的 RSD=0.97%(n=5),表明方法重复性良好。
2.8加样回收率试验:精密称取供试品样品 0.05g,加入适量表儿
茶素的对照品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,照上述色谱
条件测定,计算加样回收率。结果表儿茶素的平均回收率为
98.7%,RSD=2.56%(n=5)。
2.9含量测定:按照上述含量测定方法,测定茅莓根、茎、叶中表
儿茶素的含量。结果见表 1、图 1。
表 1 茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量测定结果(n=5)
名称 产地 表儿茶素/% RSD/%
茅莓根
茅莓茎
茅莓叶
茅莓根
茅莓茎
茅莓叶
广东
广西
0.28
0.14
0.54
0.35
0.22
0.67
0.82
1.07
0.51
0.77
0.98
0.42
炎、镇痛及止血作用考察[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(12):8-11.
[7]Seelinger G,Merfort I,Schempp C M. Anti-oxidant,anti-in-
flammatory and anti-allergic activities of luteolin [J]. Planta medi-
ca,2008,74(14):1667.
△基金项目:广东省科技厅产学研结合项目(2010B090400529)。
*通讯作者
3
北方药学 2016年第 13卷第 7期
表 1结果表明,不同产地茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有
一定差异,以广西产地的含量稍高;茅莓根、茎、叶等部位均含有
表儿茶素,3个药用部位的含量有明显差异,含量的大小顺序依
次为:叶>根>茎。
A. 对照品;B.茅莓根;1. 表儿茶素
图 1 茅莓根中表儿茶素含量测定 HPLC图
3 讨 论
由于用药习惯差异,茅莓在不同地方药用部位有所区别,
2006年版《中药大辞典》、2008年版《广西壮药标准》、2003年版
《贵州省中药材标准》、2009年版《辽宁省中药材标准》收录了茅
莓干燥地上部分;2010年版《中国药典》附录、2002年版《山东省
中药材标准》、1995年版《山东省中药材标准》、2010年版《广东
省中药材标准》收录了茅莓根;临床上,茅莓的根、茎、叶功效相
似,医家对茅莓根应用较为普遍,但茅莓不同部位化学成分、药
理和临床应用是否有区别,有待研究。
目前有关茅莓化学成分的研究较少,近年来,国内学者对茅
莓根、茎、叶的化学成分进行了初步分析,分离鉴定出黄酮、二
萜、三萜及三萜皂苷类成分,有学者研究表明,茅莓中黄酮具有
抗氧化活性[5],被认为是主要有效成分之一。本文以表儿茶素为
评价指标,考察茅莓不同部位成分含量,为临床用药提供参考。
实验结果表明,茅莓根、茎、叶中表儿茶素含量有明显的差异,同
时学者研究表明,茅莓根和叶中挥发油成分和抑菌作用也有一
定差异[6~7],因此,茅莓根、茎、叶作为药用于临床应有所侧重。
参考文献
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[7]谭明雄,王恒山,陈宪明.茅莓叶和根挥发油的主要化学成分
[J].科技进展,2003,17(6),46-47.
抗复感颗粒是由广西中医药大学第一附属医院自行研制开
发的治疗小儿反复呼吸道感染的纯中药医院制剂,临床用于治
疗反复呼吸道感染患儿[1]。本方由黄芪、陈皮、何首乌等 8 味药
材组成,其中黄芪为君药,陈皮、何首乌为臣药。对上述三种中
药材进行定性研究,对何首乌中有效成分进行含量测定研究。
1 材 料
Waters 2698型高效液相色谱仪(美国);Waters光电二级管
阵列检测器(美国),Empower色谱工作站,GH252电子分析天
平(日本 A&D),黄芪、陈皮、何首乌等 8味药材(购于广西万宝
堂医药有限公司)。黄芪、陈皮、何首乌对照药材、黄芪甲苷、橙
皮苷、大黄素标准品购自中国药品生物制品检定所,批号分别为
121462 -200709、120969 -200808、121454 -200703、110781 -
200613、110721-201014、110756-200110。
2 方法与结果
2.1黄芪的定性方法[2,3]
2.1.1 供试品的制备:取抗复感颗粒 10g,加乙醇 30mL,加热回
流提取 1h,过滤,滤液蒸干,残渣加水 20mL溶解,注入已处理好
的中性氧化铝柱(干法制备,中性氧化铝 10g),用 40%乙醇
30mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水 10mL溶解,用水饱和
正丁醇提取两次,每次 20mL,合并正丁醇(上层),用 1%NaOH
提取两次,每次 10mL,弃去碱液(下层),用正丁醇饱和的水洗至
中性,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇 1mL使溶解,作为供试品溶液。
2.1.2 取缺黄芪药材制成的样品,同法制成阴性对照溶液。
2.1.3取黄芪对照药材 0.1g,同法制得对照药材溶液。
2.1.4精密称取黄芪甲苷,用甲醇制成每毫升含 1mg的溶液,制
得对照品溶液。
2.1.5各吸取上述溶液 2μL,点样于硅胶 G 薄层板上,以三氯甲
烷∶甲醇∶水(13∶7∶2)的下层为展开剂,展开,晾干,喷以 10%硫酸
乙醇溶液,在 105℃加热 10min。供试品溶液和对照药材溶液同
一位置显同样斑点,阴性对照无相同斑点。结果见图 1。
2.2陈皮的定性方法[2,4]。
2.2.1取抗复感颗粒 10g,加甲醇 30mL,加热回流提取 20min,过
抗复感颗粒的质量标准考察△
龚敏阳 伍小燕* 莫小林 黄权芳 陈晓明 陈 朝(广西中医药大学第一附属医院 南宁 530023)
摘要:目的:考察抗复感颗粒的质量标准。方法:通过薄层色谱法定性鉴别方中黄芪和陈皮,选用高效液相色谱法对大黄素和大黄素
甲醚进行定量。结果:定性方法可靠,定量方法准确、精密度和加收率较佳。结论:抗复感颗粒的定性、定量方法能有效控制制剂质量。
关键词:抗复感颗粒 黄芪 陈皮 何首乌 大黄素 大黄素甲醚
中图分类号:R286.0 文献标识码:A 文章编号:1672-8351(2016)07-0004-03
1. 抗复感颗粒 20120510
2. 抗复感颗粒 20120606
3. 抗复感颗粒 20120708
4.对照药材
5. 黄芪甲苷
6.阴性对照
图 1 黄芪薄层图谱
4