全 文 ：菌 物 学 报 24 ( 2 ) : 2 6 7佗 7 6 , 2 00 5
凡加` o sy s te m a
!7一
松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究
伦志明 李玉花 邢树堂 傅禄敏*
(东北林业大学花卉生物工程研究所 哈尔滨 15 0 0 40)
摘 要 : 本研究通过土壤筛选找到适合松口蘑菌丝体生长的土壤 , 并在其土壤中添加适当浓度
的橄榄油 ( .0 5 % 一 .2 0 % ) , 有效地促进了菌丝体在土壤中的生长 , 菌丝生长状况酷似野外的松
口蘑菌塘 , 且随着添加浓度的增加 , 菌丝体生物量呈明显的正相关 。 当土壤中橄榄油浓度为
.0 5% 和 1 . 0 % 时 , 松口蘑共生植物赤松苗的生长不但没有受到抑制 , 而且还能与菌丝体在这种
“ 菌塘 ” 中形成菌根 。 本研究成功地建立了中国松口蘑人工菌塘诱导体系 , 同时也为其人工子
实体的诱导研究提供了必要的前提条件 。
关键词 : 土壤筛选 , 橄榄油 , 菌丝体生物量
中图分类号 : 0 9 39 . 5 文献标识码 : A 文章编号 : 16 72 一6 4 72 ( 2 00 5 ) 02 一 02 6 7一 02 76
1 引言
松 口蘑 irT c ho lo m “ m a st u at ke ( 5 . Iot et mI a i) S in g er 是世界上最名贵的菌根型食用菌之一 。
关于松口蘑的人工栽培研究己经进行了近一个世纪之久 , 但是迄今为止 , 除了形成几个子实体
原基 ( o g aw a & H am a da , 19 7 5) 外 , 尚没有栽培成功的例子 。 近年来 , 关于无菌条件下松口
蘑人工菌根苗诱导成功的报导有很多 (孔 m a d a e r a l . , 19 9 9 a ; G u e ir n 一 L a即e et e t a l一 Zo o o a ;
、乞a ir o et al . , 2 0 0) , 他们也进行了人工菌根苗野外栽培研究 , 然而 , 尽管大多数菌根真菌在
侵染宿主植物根部后都能够进行扩展生长 ( R e a d , 19 9 1 ; uG e inr 一 L a四 e t e e t a l一 2 0 o 0b ; w o e t a l一
2 00 1 )
, 可松口蘑菌丝体即便是其在宿主植物根内形成哈蒂氏网后仍很难在菌根周围形成大量
菌丝体 , 移栽后的菌根苗会出现菌丝生长退化现象 , 并且有的菌根也仅能存活 4 个月左右
( aY m ad
a et al
. ,
20 0 1 )
。 这种有限生长的外延菌丝根本无法形成天然条件下松口蘑子实体形成
的关键场所一菌塘 , 因而也就无法继续进行子实体的诱导实验 。
菌塘是由密生的白色或灰白色菌丝体与植物根系及土壤颗粒相互交错纽结而成的团状结
构 ( o g a w a , 19 7 5 a ; H o s几记 。 t a z . , 19 9 7 ; 介 m a da 。 t a l . , 19 9 9 b ) 。 这里既是松口蘑菌丝体与宿
主植物共生并进行营养交换的场所 , 也是其进行核配与分化并形成子实体原基的地方 , 因此菌
塘是松 口蘑完成其整个生活史不可缺少的场所 ( 弓明钦等 , 2 0 02 ) 。 o g aw a ( 19 7 5 a ) 在观察野
外松口蘑菌塘的扩展生长时发现 , 为了维持菌落的进一步生长发育 , 与宿主植物相连的菌丝体
需要有一个临界生物量 。 由此可见 , 人工菌根苗形成后菌丝体在基质中能否顺利生长扩展形成
可以满足子实体发生的菌塘 , 对于松口蘑人工栽培的成功与否是十分关键的问题 。
u en s amt
& s u n( 19 9 5) 认为 , 脂类能够促进疏水性外生菌根菌丝体的生长 。 G ue ir n 一 L a gu et e
等 ( 2 0 03 ) 也发现界面活性剂和橄榄油对于松口蘑菌丝体的生长具有促进作用 , 这一发现对于
收原稿日期 : 2 0 0 4一 0 9一2 2 , 收修改稿日期 : 2 0 0 4一 12 一0 1
DOI : 10. 13346 /j . mycosystema . 2005. 02. 017
菌 物 学 报 24卷
松口蘑人工菌塘的诱导有着很大的启发性 。 本实验的目的就是以自然土壤为介质 , 通过添加自
然物质一植物油 , 诱导并促进菌丝生长 , 从而建立一种诱导松口蘑人工菌塘形成的有效方法 。
本研究为松口蘑人工菌根合成体系建立后菌丝无法扩展生长的问题提供了解决办法 , 同时也为
松 口蘑人工子实体诱导研究进一步提供了一个必要条件 。
2 材料与方法
.2 1 供试菌株来源与培养
本实验中采用了 WZ , W3 , lF , F Z , F 4 , A 和 T 94 5 等 7个菌株 , 其中 W Z 和 W3 分离自
2 0 00 年 8 月采集于吉林省汪清县赤松林下的松口蘑子实体 (北纬 4 3 “ 2 3 ` 3 1 “ , 东经 13 0 0 1` 5 7 “ ,
海拔 6 50 m ) , lF , F Z 和 F 4 分离自同时间采集于吉林省富裕镇赤松林下的松口蘑子实体 (北纬
4 2
0
2 7
,
4 5
尸` , 东经 12 9 0 3 4 ` 14 “ , 海拔 s o om ) , A 由延边大学园艺系教授傅伟杰先生提供 , T 9 4 5
由日本东京大学铃木和夫教授提供 。
母株用 O ht a ( 19 9 0) 琼脂 (l . 4% ) 培养基在人工气候箱 ( 23 过℃ ) 中进行暗培养 , 每两个
月继代培养一次 。
.2 2 供试植物赤松苗的培养
赤松种子由东北林业大学林学院沈海龙教授提供 (采集于吉林龙井 , 199 9) , 装于信封内
贮存在 4o C 冰箱中备用 。
种子发芽及幼苗培养方法见 Va iar o 等 ( 2 00 0 ) , 不同之处在于 : 发芽用培养基的葡萄糖含
量为 5 9/ 1 ; 幼苗培养基为 RM ( 、 、 a r io e r a z . , 2 0 0 2 ) , 葡萄糖为 10 9/ 1。
.2 3 培养土的筛选
用于接种 T 9 45 菌株的土壤有 4 种 : 栽培土 (市售 , p H= .7 0 5) ; 帽儿山土 (购 自帽儿山 ,
p H = .6 43 ) ; 草炭土 (市售 , p H = 6 . 14) ; 林场土 ( 收集于东北林业大学林场院内 , p H=7 . 36 ) 。 除
草炭土外 , 所有土壤都用孔径为 2~ 的筛子筛过
。
量取培养土 20 m l 倒入直径 gc m 的玻璃培养皿中 , 加蒸馏水 4 ml , 搅拌均匀后 , 121 ℃ 高压灭菌 4 0
分钟 。 每个培养皿中接入 1个直径为 8~ 的圆形菌块
, 供试菌株为 T 945 , 用保鲜膜封好 (3 圈 ) , 每种
培养土 5 个重复 , 培养 2 周后记录菌落生长情况 。
.2 4 各种不同植物油对菌丝体生长的影响
供试植物油为橄榄油 (西班牙 , C isr m on a) , 红花油 (北京 , 绿洲 ) , 芝麻油 (上海 , 淘大 )
和核桃油 (云南 , 巨达 ) 。
量取筛选出的最适合松口蘑菌丝生长的培养土一帽儿山土若干 , 加入蒸馏水 (使土壤含水
量达到 20 % ) 及事先用无水乙醇 (l . 4% , 无水乙醇 v/ 干土 v) 混溶过的 4 种植物油 (使土壤中
油含量达到 2 % 油 v/ 干土 v) , 搅拌均匀后 , 称取 g6 混合土装入直径 c6 m 的玻璃培养皿中 , 另
将装有对照培养土 (水 20 % , 无水乙醇 1 . 4% ) 的培养皿一并进行高压灭菌 4 0 分钟 ( 12 1“ C ) 。
每个培养皿中接入 1个直径为 8~ 的圆形菌块 (供试菌株为 W Z
,
W 3 和 A ) , 用保鲜膜封好
(3 圈 ) , 每种处理 5个重复 , 培养 2 个月后记录菌落生长情况 。
.2 5 橄榄油的添加浓度对菌丝体生长的影响
橄榄油 /土壤混合培养基质设置 0% , .0 5% , 1 . 0% , .2 0% , .5 0 % (油 v/ 干土 v) 5 个浓度
梯度 , 基质配制实验操作方法同上 。 每种处理 4 个重复 , 每个培养皿中接入 2 个 sm m 菌块 ,
供试菌株为 F Z , W Z和 A , 培养 2 个月后测定麦角固醇含量 。
再重新配制橄榄油浓度为 l % 的油 /土混合基质 , 选取菌株 w Z , w 3 , lF , F Z 、 F 4 和 A 重
2期 伦志明等 :松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究 29 6
复上述实验 。
2. 6添加橄榄油的土壤培养基质对赤松苗生长的影响
橄榄油 /土壤混合培养基质设置 O% , .0 5% , 1 . 0% , .2 0% , (油 v/ 干土 v) 4个浓度梯度 ,
配制方法同 2 . 4 。 将 4 周大的无菌赤松苗移入经高压灭菌的装有 40 m l各混合基质的玻璃管 ( 中
3
.
s r n r o x 1L 7~ ) 中
, 每种处理 4 个重复 , 用塑料薄膜和棉线绳将管 口封好后 , 放入组培室培
养架上 , 4 周后记录赤松苗生长情况并称量其地上部与地下部干重 。
.2 7 人工菌塘的诱导形成
.2 .7 1 菌丝浆的制备 : 向 2 个装有 10 m l O h at 液体培养基的 Zo m l锥形瓶中各接入 24 个直径为
s r n们n 的圆形菌块 A , 2 o3 C 人工气候箱中暗培养 。 2 个月后取出锥形瓶 , 用药匙将瓶中的菌落移
入消毒后的榨汁机 (上海海菱 , H L 一 20 0 0) 中 , 并加入 10 m l 新鲜的 o hat 液体培养基 , 最大转
速 ( 10 0 0 r/ m in) 下打碎 3 次 , 每次 3 秒钟 。 将制得的菌丝浆倒入一个空的无菌 Zo m l 锥形瓶
中 , 封好后继续培养 , 3 天后取出菌丝浆 , 用不加糖的 R M 液体培养基通过自制尼龙筛过滤器
(孔径 2 4 、 3 0娜 ) 冲洗菌丝 3 次 , 然后将菌丝加入到 l o m l新鲜不含糖的 R M 液体培养基中 ,
备用 。
.2 .7 2 人工菌塘的诱导及菌根苗的合成 : 取长方形无菌塑料培养平板 ( 145 m m x l o ~
x
ls ~ )若干 , 向其中加入上述油浓度为 1% 的橄榄油 /土壤混合基质 60 m l (约占平板容量的 1 /2) , 移
液器吸取 巧 m l 菌丝浆滴入培养土中 , 保鲜膜封好后 , 平放于人工气候箱中暗培养 。 三个月后 ,
打开平板盖 , 将培育 4 周的赤松苗移入 , 重新用保鲜膜封好 , 再用锡泊纸将生长有菌丝体的土
壤部分包严 , 以防光线影响菌根合成 , 使培养平板呈 7 50 角斜放于组培室培养架上 。 2 个月后用
Ol ymP us 光学显微镜观察照相 。
本实验中 , 所有土壤实验前在烘箱 ( 6 0o C ) 中干燥处理 24 小时供使用 ; 本实验中涉及到
松 口蘑菌丝体 的培养条件为黑暗的人工气候箱 ( 23 士oZ C ) ; 文中提到的组培室环境条件为
2 00 0 l u x 日光灯 , 24 士3 o C , 12 h/ d 。
.2 8 麦角固醇含量的测定
按 2 . 5 方法培养菌丝体两个月后 , 以菌落为中心收集所有菌丝体在内的土壤 g2 , 冷冻干燥
后进行麦角固醇的抽提及 H P L C 分析 。
麦角固醇是真菌细胞膜的组分之一 , 广泛存在于真菌而罕见于高等植物中 (we et e , 19 7 4) ,
其含量与真菌 生物量之 间有着直接 的关 系 ( N ils s o n & 均 u mr an , 19 90 ) 。 且它在紫外线
人 anr x 2 82unr 处有吸收值 ( N e w e l l , 19 92 ) , 可以用无水乙醇 ( 4 0 C ) 提取并用 H P LC 进行定量分
析 (M a irt n et al . , 1 9 90 ) 。 因此本实验中通过分析测定麦角固醇的含量来比较检验松 口蘑菌丝
体生物量的多少 。
.2 9 赤松苗干重的测定
按 2 . 6 实验方法生长的赤松苗 4 周后从培养土中取出 , 每棵苗都在近土处剪成地上部和地
下部两段 , 60 ℃ 烘箱中干燥处理 12 小时 , 分别称量两部分的重量 。
.2 1 0 统计分析
通过 W idn o w s 平台上运行统计分析软件 S P S S 1 .0 0 , 利用单因素方差分析中的 L S D -
D u n
e t’ s c 方法 ( p < .0 05 ) 对麦角固醇含量 (油浓度为 0 . 0一 2 . 0 % ) 和赤松苗干重进行多重比较
检验 ; 利用两独立样本 t检验方法 ( p < .0 05 ) 对麦角固醇含量 (油浓度为 1 . 0 % ) 进行比较分析 。
27 0菌 物 学 报 24卷
3 结果与分析
3
.
1 培养土的筛选结果
菌株 9 T5 4在帽儿山土中生长最好 , 5 个重复表现均匀一致 , 都是生长状况良好 ; 在栽培
土中 , 4 个生长一般 , l 个不生长 ; 草炭土中 3 个生长一般 , 2 个不生长 : 林场土中 5个重复没
有 1个出现生长 (见表 1 ) 。
表 I T 9 4 5 在不同土壤中的生长情况
几 b le 1 T h e gr o w t h o f is o la t e T 9 4 5 in d ife er nt 5 0 115
土 壤 5 0 115 p H 值 p H Va lu e l # 2 # 3 # 4 # 5 #
栽培土 Cu l t iv at in g 5 0 1一 7刀 5 + + + +
帽儿山土 M a o e r s h an 5 0 11 6 . 4 3 + + + + + + + + + +
草炭土 T u fr s o il 6 . 14 + + +
林场土 C a n l p u s 5 0 11 7 3 6
不生长 : “ 十 ” 生长一般 ; “ + + ” 生长 良好
n o g r o w th ;
“ + ” g r o w th : “ + + ” e x e e l l e n t g r o w t h
植物油的筛选结果
W Z
,
W3 和 A 三个菌株在各种油 /土混合基质中的生长情况基本一致 , 即在添加橄榄油的
,
;
-,自-`1à
混合基质中均生长 良好 , 在其它三种油 /土混合基质中没有生长 , 在不加任何植物油的对照培养
土中生长一般 (见表 2 ) 。
表 2 W2 , w 3 , A 在不同油 /土混合基质中的生长情况
T a b le 2 T h e gr
o
wt h
o f i s o lat e s W Z
,
W 3
,
A in d ife
r e n t o i盯s o i l su b s t r a t e s
植物油 Ve g e atb le 0 115 1 # 2 # 3 # 4 # 5 #
橄榄油 O l iv e 0 11 料 + + + + +
红花油 S a if o w e r 0 11
芝麻油 S e s am e 0 11
核桃油 W自In u t 0 11
对照 C o n t r o l + + + + +
“ 一 ” 不生长 : “ + ” 生长一般 : “ + + ” 生长 良好
“ 一 ” n o g r o w th ; “ + ” g r o w th ; “ + + ” e x e e l l e n t g r o w t h
.3 3 菌丝体在橄榄油 /土壤混合基质中的生长情况
菌块接种于土壤中 3 天后即可观察到菌丝的生长 。 1个月后 , 每个培养皿中都以 2个菌块
为中心形成了两个圆形菌落 , 对照与油 /土培养条件下都是如此 , 所不同的是 , 对照培养土中的
菌丝生长稀疏 , 而添加橄榄油的培养土中菌丝生长致密 。 2 个月后收集菌丝体时发现 , 油 /土培
养基质中的菌丝与土壤紧密结合在一起 , 两个菌块都形成了两个圆形团状物 。 另外 , 麦角固醇
含量测定结果也显示 ( 图 l) , 油 /土混合培养基质中的菌丝体生物量明显高于对照 , 且随着橄
榄油浓度的增加 , 麦角固醇含量呈正相关 。 但当浓度为 5% 时 , 菌丝体生长受阻 (数据未显示 ) 。
油浓度为 1% 的橄榄油 /土壤混合基质中 , 所有六个菌株的菌丝体生长状况都与上述情形相
类似 。 图 2 显示 , 其麦角固醇含量都明显高于对照 。
2 期 伦志明等 : 松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究 2 7 1
了
橄榄油浓度 ( v八 ) 0 1 i v e 0 1 1
图 1橄榄油浓度为 .0 0 %一 2. 0 % ( v /v ) 条件下油 /土混合基质中菌丝体接种 2个月后的生长量情况
数据来源于 4个重复的平均值 。 同一个菌株不同浓度的柱形图上方的相同字母都表示没有显著性差异 (单因素方差分析
L S D
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图 2 菌丝体接种于橄榄油浓度为 1. 0 % ( v / v ) 的油 /土混合基质中 2 个月后的生长量情况
数据来源于 4 个重复的平均值 。 每一菌株两个柱形图上方的不同字母表示存在显著性差异 (两独立样本 t检验方法 , p < 0刀5)
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1 4 赤松苗在橄榄油 /土壤混合基质中的生长情况
赤松苗在土壤中培养 2 周后 , 橄榄油浓度为 .0 0一 1 . 0 % 的试管中幼苗均长势良好 , 而浓度为
2 % 的则部分苗的叶尖有些变黄 。 到第 4 周结束时 , O% 浓度的 4 棵苗长势良好 ; .0 5% 的 4 棵苗
中 2 株叶尖部分发黄 , 其余长势 良好 ; 1 . 0% 浓度的苗生长情况同 .0 5% 的相类似 ; 而 2 .0 %浓度
菌 物 学 报 2 4卷
的 4棵苗则叶尖全部发黄 , 且部分苗的茎也变黄 。 另如图 3 所示 , 当添加橄榄油的浓度为 .2 0
% 时 , 赤松苗地上部和地下部的干重值比其它几种情况下的都低 , 且差异显著 。 另外两个浓度
条件下 , 苗的地上部和地下部干重值与对照相比不存在显著性差异 。
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图 3 橄榄油浓度为 .0 0 %一 .2 0 % ( v/ v) 条件下油 /土混合基质中赤松苗培养 4 周后
其地上部与地下部的干重情况
数据来源于 4 个重复的平均值 。 相同部位不同浓度的柱形图上方的相同字母表示没有显著性差异 (单因素方差分析
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1 5 松口蘑与赤松苗在橄榄油 /土壤混合培养基质中形成菌根
在油 /土混合基质中生长三个月的菌丝体蔓延覆盖了整个土壤表面 , 并与土壤紧密扭结在一
起形成了团块状结构 。 接入的赤松苗两个月后依然长势良好 , 显微镜下观察发现 , 苗的某些侧
根上没有根毛 , 颜色呈暗棕色 , 且有疏松的菌丝连接于其上 。
4 讨论
关于腐生真菌与菌根真菌能够利用植物油和脂肪酸的研究报导有很多 , 如 s o n g 等 ( 19 89 ) 、
许谦和冯明光 (2 0 01 ) 及 H at o ir 等 (2 0 0 3 ) , 其中 H a t o ir 等的实验中涉及了 巧 个属 32 个种的
外生菌根真菌一包括松口蘑 , 他们的数据显示了松口蘑菌丝体能够利用棕搁酸和油酸来维持自
身的生长 。 本实验中经过对菌丝体麦角固醇含量的测定后发现 , 在土壤中添加适当浓度的橄榄
油能够促进中国产松口蘑菌丝体的生长 。 随着橄榄油浓度的增加 , 菌丝生长量呈明显的正相关 ,
但当达到 5% 时 , 则会阻碍菌丝体生长 。 uG e irn 一L a g u et e 等 ( 2 0 03 ) 的研究结果显示 , 橄榄油
和 wT e en 80 都能够促进土壤中松口蘑菌丝体的生长 。 我们的数据与其发现相类似 , 但是 , 他们
的实验表明 , 在没有任何碳源存在的琼脂培养基中加入这两种物质却不能维持菌丝体生长 。 这
说明此两种化学试剂在土壤中并不是作为松口蘑的碳源在起作用 。
wT e
n 8 O
一聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酷是一种非离子界面活性剂 , 土壤中因为它的存在而
使表面张力得到降低 , 菌丝就会更容易与土壤颗粒接触 , 土壤中的无机盐等养分也会因表面张
力的降低而从土壤相更多的转移到溶液相 , 因此增大菌丝对土壤中水分和养分的吸收能力 (赵
国玺和朱步瑶 , 2 0 0 3) 。 橄榄油主要是由包含油酸 、 棕搁酸和亚油酸等不饱和及饱和脂肪酸的
甘油酷所组成 , 它在结构上与 wT e n 80 有相似的部分 , 即都有一个亲水性头部和长长的疏水性
2 期 伦志明等 : 松口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究
尾部 , 且如表 3 所示它的脂肪酸组成中油酸占绝大多数 ( 84 .4 % ) 。 另外 , 食品工业和医药工业
中广泛应用的多醇类非离子表面活性剂中就包括甘油醋一通常为甘油一酷 、 二酷和三酷的混合
物 , 其中的脂肪酸多为月桂酸 、 硬脂酸 、 油酸等 (赵国玺和朱步瑶 , 2 0 0 3 ) 。 由此可见 , 橄榄
油在土壤中也许与 T认尹e en 80 一样 , 有可能是作为一种界面活性剂在起作用 。 所以它也有可能同
T w e en 8O一样 , 能够增加许多真菌细胞膜的透性 , 从而诱导各种酶 ( 内切葡聚糖酶 , 外切葡聚
糖酶 , 纤维二糖酶 ) 更多的生成 (P a r d o , 19 9 6) 。 M班行。 等 ( 2 00 2) 也曾经报道 , 将松口蘑菌
丝体分别培养在含有 T w e en so 、 wT e n4 0 或无添加表面活性剂 (空白组 ) 的树皮悬浮液中 (不
含其它碳源 ) , 其结果表明表面活性剂的添加促进了松口蘑纤维二糖酶的产生 , 与空白组相比
明显地增加了麦角固醇的含量 。 因此土壤中添加橄榄油不仅因为通过降低表面张力而增加了松
口蘑菌丝体对土壤中水分和无机盐的吸收 , 而且还会因为上述这些酶的过多分泌而利用土壤中
原本不能分解吸收的有机物质 。 再者 , 前面所提到的关于真菌能够利用脂肪酸和植物油的实验
中 , 研究人员都在培养基中添加了各种界面活性剂 , 如 S o gn 等 ( 19 8 9) 一T w e en 20 、 40 、 60 、
80
、
8 5 : 许谦和冯明光 ( 2 0 0 1 ) 一蔗糖脂肪酸酷 一 15 ; H a t o ir 等 ( 2 0 0 3 ) 一A d ek an o l P 一8 5 , 也
许他们的实验结果中界面活性剂起了至关重要的作用 。
表 3 几种植物油的主要脂肪酸组成 ( 10 09 总脂肪酸中各脂肪酸组分的 g 数 )
_
_
.
T 扭坦旦 3王旦丝y 丝过旦9创凶如丝旦旦醚鱼旦鱼丝 y旦g旦鱼巨丝旦i丝 一—植物油ve g e at b le 0 115 棕搁酸P , l m i t ic 硬脂酸S et iar C 油 酸o le i C 亚油酸L in 0 le iC 亚麻酸 其 它o th e r
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芝麻油
红花油
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15 5
17 9
日 摘 自沈同和王镜岩 ( 19 9 0) : “ 摘自白寿宁 (2 0 0 0)
本研究中 , 出于松口蘑食用安全性的考虑 , 选用了四种食用植物油添加于土壤中 , 混合配
制成培养基质 , 进行松口蘑菌丝体接种实验 , 但只有橄榄油能够促进菌丝体的生长 , 麦角固醇
含量测定结果显示 , 与对照土壤相比 , 生长量存在显著差异 。 而其它三种植物油与对照相比则
抑制了松口蘑菌丝体的生长 。 表 3 中可以看出 , 红花油和核桃油中脂肪酸组成类似 , 亚油酸的
含量占大部分 , 分别为 74 . 5% 和 62 . 2% , 油酸含量仅为 15 . 5% 和 17 . 9% 。 芝麻油中油酸含量略
多些 , 为 45 . 4% , 亚油酸含量则为 4 .0 4% 。 这几种植物油有一个共同的特点 , 即亚油酸的含量
都很高 。 亚油酸一9 , 12一十八碳二烯酸 , 含有两个不饱和双键 , 这种 1, 4 一戊二烯结构使它们对
氧化的敏感性远远超过 ( 约 20 倍 ) ’ 油酸一9一十八碳烯酸中的丙烯体系 ( eF un e m a , 19 85 ) , 可
能经过高压高温处理后 , 其化学性质发生了变化 , 生成了对真菌有毒的物质因而抑制了松口蘑
菌丝体的生长 。 由于亚油酸含两个不饱和双键 , 所以它的空间构形与油酸不同 (沈同和王镜岩 ,
19 0)
, 且疏水性也大些 , 因此亚油酸含量高的酷可能不会象油酸含量多的酷一样起到表面活
性剂的作用 。
在土壤中添加适当浓度的橄榄油 , 能够促进松 口蘑菌丝体的生长 , 当油浓度达到 0 . 5 % 和
1
.
0 % 时赤松幼苗的生长并不受到影响 , 而且菌丝体在混合基质中的生长状况类似于野外的菌
塘 , 且此 “ 菌塘 ” 并不妨碍人工菌根苗的合成 。 人工菌塘的诱导解决了人工菌根苗合成后侵染
的菌丝无法继续扩展生长的问题 , 有利于进行下一步人工子实体诱导工作的开展 , 同时也为松
2 74 菌 物 学 报 24卷
口蘑人工栽培的研究提供了新的思路 。
图 4一 1 菌株 T 9 45 接种于橄榄油浓度为 .2 0%的油 /土混合基质中 2个月后的生长情况 (左为含油土壤 , 右
为对照土壤 )
图 4 一 2 菌株 W Z 接种于橄榄油浓度为 1 . 0 %的油 /土混合基质中 2 个月后的生长情况
(左为含油土壤 , 右为对照土壤 )
图 4一 3 松 口蘑菌丝浆接种于橄榄油浓度为 1 . 0 % 的油 /土混合基质中 3 个月后的生长情况 ;
图 4 一 4 四周大的赤松苗接种于 “ 菌塘 ” 中 2 两个月后依然长势 良好
图 4 一5 接种两个月后的赤松根系 , 侧根停止伸长 , 缺乏根毛 , 顶端出现膨胀 ; 明显的外延菌丝围绕
侧根周边 。 lr : 侧根 ; he : 外延菌丝 : m r : 主根 ; sa : 菌丝与土壤形成团块 ; 标尺 : .0 sm m
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s r n t n
致谢 : 向在松口蘑子实体采集及菌种分离过程中给予我们大力支持与帮助的延边农学院傅伟杰
教授和天佛指山松茸自然保护区管理局的工作人员们表示感谢
2期 伦志明等 :松 口蘑人工菌塘诱导形成的初步研究 275
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