全 文 ：收稿日期:2015-04-10
基金项目:国家自然科学基金(81001700);四川省科技厅应用基础计划(2012JY0081)
作者简介:何颖(1984-)，女，硕士，实验师，主要从事中药品质及药效学评价工作;Tel:18608219922，Fax:0830-3162291，E-mail:yinqi_746@
163. com。
* 通讯作者:张春，Tel:18190034587，Fax:0830-3162291，E-mail:zc83good@ 126. com。
马甲子叶抗炎有效部位的筛选及其机理初探
何 颖1，辜义陆2，欧丽兰1，张 春1*
(1. 泸州医学院药学院，四川 泸州 646000;2. 自贡市第一人民医院口腔科，四川 自贡 643000)
摘要 目的:观察马甲子叶不同提取部位的抗炎作用，并筛选其有效部位。方法:系统溶剂法将马甲子叶提取
为氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水 4 个部位后，用耳肿胀法、足跖肿胀法、实验性腹膜炎法筛选马甲子叶的抗炎有效部
位，并考察其作用机理。结果:马甲子叶正丁醇、水及乙酸乙酯部位为抗炎的有效部位。其中以正丁醇部位作用最
佳，其对角叉菜胶液致胸膜炎大鼠胸腔渗出液及肺组织中 MDA、PGE2、TNF-α及 IL-1β的含量升高有显著的抑制作
用(P ＜ 0. 01)。结论:正丁醇和水部位是马甲子叶的有效抗炎部位，以正丁醇部位作用最佳，具有抑制炎症介质释
放及抗脂质过氧化的作用。
关键词 马甲子叶;抗炎;有效部位
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)12-2586-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 12. 032
马甲子 Paliurus ramosissimus (Lour. )Poir. 为
鼠李科植物，又名铁篱笆、铜钱树，主产于四川、广西
等地。《四川中药志》中记载其根、茎、叶、花、果均
供药用，有解毒消肿、化瘀止血、活血止痛等功效。
民间常用其根水煎治疗风湿性关节炎。药理研究发
现其具有治疗感冒发烧、痈肿溃脓、支气管炎和祛风
湿等作用〔1〕。马甲子对氨水引咳小鼠具有显著的
镇咳祛痰作用，其有效成分为黄酮苷〔2〕。马甲子根
中含黄酮和五环三萜类化合物，根及茎还含一种环
肽生物碱马甲子碱(paliurine)B〔1〕。对于马甲子叶，
其化学成分和药理研究尚未见报道。基于对马甲子
根和茎的化学成分和药理作用研究，推测马甲子叶
也具有相似的化学成分和药理作用。课题组前期对
马甲子叶进行了抗炎预试验，发现其具有一定的抗
炎作用。本实验以马甲子叶为材料，对其醇提物的
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水四个溶剂提取部位进行
了体内抗炎活性及作用机理初步研究，为开发和利
用马甲子叶的药用价值提供实验基础。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级 ICＲ 小鼠，雌雄各半，体质
量 18 ～ 22 g;SPF级 SD大鼠，雌雄各半，体质量 180
～ 220 g，均由泸州医学院实验动物中心提供，实验
动物生产许可证号:SCXK(川)2013-17。
1. 2 药物与试剂 野生马甲子叶采自四川自贡荣
县，经泸州医学院生药学教研室税丕先教授鉴定为
鼠李科植物马甲子 Paliurus ramosissimus(Lour. )
Poir. 的叶，阴干后制成粗粉备用。醋酸地塞米松
(浙江仙琚制药股份有限公司，批号:131212);伊文
思蓝(美国 Sigma 公司进口分装，批号:140109);吲
哚美辛(上海伊卡生物技术有限公司，批号:
140301);肝素钠注射液(上海金穗生物科技有限公
司，批号:140124);前列腺素 E2 试剂盒(PGE2，北京
诚林生物科技有限公司，批号:201403);肿瘤坏死
因子-α试剂盒(TNF-α，上海圻明生物科技有限公
司，批号:201401);白细胞介素-1β(IL-1β，上海圻明
生物科技有限公司，批号:201401);丙二醛(MDA)
试剂 盒 (南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所，批 号:
20140315);其余化学试剂均为分析纯，由成都市科
龙化工试剂厂生产。
1. 3 主要仪器 UV1700PC 紫外可见分光光度计
(上海凤凰光学科仪器有限公司);FA1004 电子天
平(上海民侨精密科学仪器有限公司);52A 医用低
速离心机(河北安心县白洋离心机厂);DNM-9602
型全自动酶标工作站(北京普朗集团);ＲE-52B 旋
转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
2 方法
2. 1 供试品溶液的制备 称取马甲子叶粗粉 1 kg
用 80%乙醇回流提取 3 次，减压回收乙醇，再减压
干燥得总干膏约 174. 6 g。总干膏用柱层析硅胶
(200 ～ 300 目)吸附后依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁
醇和水加热回流提取完全，回收各部位溶剂并干燥，
分别得到干膏 29. 6、16. 5、31. 5、40. 2 g 后，均用生
理盐水分别配成高(5 mg /mL)、中(2. 5 mg /mL)、低
(1. 25 mg /mL)浓度溶液，作为供试品溶液，备用。
2. 2 马甲子叶的抗炎作用部位筛选
2. 2. 1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀:小鼠 140 只，体质
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量 18 ～ 22 g，雌雄各半，随机分为 14 组，每组 10 只，
分别为氯仿部位 150、100、50 mg /kg 组;乙酸乙酯部
位 150、100、50 mg /kg 组;正丁醇部位 150、100、50
mg /kg组;水部位 150、100、50 mg /kg 组及地塞米松
(10 mg /kg)组、模型组(等体积生理盐水)。灌胃 1
次 /d，连续 7 d。末次给药 30 min后，于小鼠右耳两
侧均匀涂布二甲苯 20 μL /只，左耳不涂作为对照。
致炎 15 min 后脱颈椎处死小鼠，剪下左右两耳廓，
用直径 6. 0 mm 打孔器取双耳对称耳片，于电子天
平上分别称量质量，以左右耳片质量差为肿胀程度，
并计算肿胀抑制率。
抑制率 =模型组平均肿胀度 －给药组平均肿胀度
模型组平均肿胀度
× 100%
2. 2. 2 角叉菜胶致大鼠足跖肿胀:SD 大鼠 140
只，雌雄各半，体质量 180 ～ 220 g，分组及给药同
“2. 2. 1”项下，马甲子叶各部位高、中、低剂量分别
为 100、50、25 mg /kg，地塞米松剂量为 7 mg /kg。末
次给药后 1 h，用自制足跖测定仪测量每只大鼠左后
足跖容积。然后将其左后肢足跖注射 1%角叉菜胶
液 0. 1 mL，分别于 1、2、3、4 h 后测量其左后足跖容
积。以造模前后大鼠左后足跖容积之差(以 mL计)
作为炎症肿胀程度。
2. 2. 3 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加:小
鼠 140 只，雌雄各半，分组及给药同“2. 2. 1”项下。
末次给药 1 h后，在各小鼠尾静脉注射 1%伊文思蓝
生理盐水溶液 10 mL /kg，随即腹腔注射 0. 6%醋酸
(10 mL /kg)，20 min后脱颈椎处死小鼠，剪开腹腔，
用 6 mL生理盐水分 3 次冲洗腹腔，收集冲洗液，离
心，取上清液。UV1700PC 分光光度计 590 nm 处测
定光密度 D(λ)值，以 D(λ)值表示伊文思蓝含量，
判断小鼠腹腔毛细血管通透性，并计算抑制率。
抑制率 =
D(λ)模型组 － D(λ)给药组
D(λ)模型组
× 100%
2. 3 抗炎机理实验 SD 大鼠 40 只，随机分为 4
组，分别为空白对照组(等体积生理盐水)、模型组
(等体积生理盐水)、醋酸地塞米松(7 mg /kg)阳性
对照组、正丁醇部位(100 mg /kg)组。按 10 mL /kg
灌胃，1 次 /d，连续给药 7 d。于末次给药 30 min后，
乙醚麻醉大鼠，对空白对照组大鼠右侧胸腔注射
0. 2 mL无菌生理盐水，其余各组注射 0. 2 mL的 1%
无菌角叉菜胶液致胸膜炎。4 h 后麻醉处死大鼠，
剪开胸部皮肤，暴露膈肌，于胸腔内注入 2 mL 生理
盐水胸腔洗液(含 5 U /mL 肝素，10 μg /mL 吲哚美
辛)，轻柔震荡，混匀胸腔液。取胸腔渗出液，3 000
r /min离心 15 min后，取上清液，按试剂盒说明书检
测 MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β 含量。同时分离大鼠
肺组织，用生理盐水制成 10%组织匀浆，按试剂盒
说明书检测 MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β含量。
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 13. 0 软件进行统计
学分析。统计数据以 珋x ± s表示，采用单因素方差分
析，以 P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 马甲子叶各部位对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的
影响 结果如表 1 所示，与模型组比较，除马甲子叶
氯仿部位各剂量组外，各给药组小鼠耳廓肿胀度均
显著降低(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。其中以正丁醇部
位作用最强。
表 1 马甲子叶各部位对二甲苯致小鼠耳廓
肿胀的影响(珔x ± s，n =10)
组别
剂量 /
(mg /kg) 耳廓肿胀度
/mg 抑制率 /%
模型组 － 12. 69 ± 2. 88 －
醋酸地塞米松组 10 3. 38 ± 1. 56＊＊ 73. 36
马甲子叶氯仿部位组 150 11. 37 ± 3. 41 10. 40
100 11. 21 ± 2. 59 11. 66
50 12. 14 ± 3. 08 4. 33
马甲子叶乙酸乙酯部位组 150 6. 26 ± 1. 30* 50. 67
100 7. 64 ± 1. 77* 39. 80
50 9. 39 ± 2. 12* 26. 00
马甲子叶正丁醇部位组 150 4. 18 ± 2. 01＊＊ 67. 06
100 4. 56 ± 1. 93＊＊ 64. 07
50 5. 92 ± 1. 69* 53. 35
马甲子叶水部位组 150 4. 84 ± 1. 61＊＊ 61. 86
100 5. 70 ± 2. 04* 55. 08
50 7. 32 ± 2. 61* 42. 32
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2 马甲子叶各部位对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀
的影响 结果如表 2 所示，与模型组比较，造模后 2
h正丁醇部位高剂量组足跖肿胀度显著降低(P ＜
0. 05)，造模后 3、4 h 正丁醇及水部位高、中剂量组
及乙酸乙酯组各剂量组足跖肿胀度显著降低(P ＜
0. 05 或 P ＜ 0. 01)
3. 3 马甲子叶各部位对醋酸致小鼠腹腔毛细血管
通透性增加的影响 结果如表 3 所示，与模型组比
较，马甲子叶水部位各剂量组及氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇部位高、中剂量组小鼠腹腔毛细血管通透性显
著降低(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。
3. 4 马甲子叶正丁醇部位对角叉菜胶液致胸膜炎
大鼠胸腔渗出液中 MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β 含量
的影响 结果如表 4 所示，与模型组比较，马甲子叶
正丁醇部位组大鼠胸腔炎性渗出液中 MDA、PGE2、
TNF-α、IL-1β的含量均显著降低(P ＜ 0. 01)。
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表 2 马甲子叶各部位对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响(mL，珔x ± s，n =10)
组别
剂量 /
(mg /kg) 1 h 2 h 3 h 4 h
模型组 － 0. 649 ± 0. 142 0. 733 ± 0. 118 0. 865 ± 0. 126 0. 741 ± 0. 113
醋酸地塞米松组 7 0. 481 ± 0. 108* 0. 501 ± 0. 112* 0. 434 ± 0. 104* 0. 256 ± 0. 107＊＊
马甲子叶氯仿部位组 100 0. 632 ± 0. 120 0. 713 ± 0. 109 0. 775 ± 0. 116 0. 703 ± 0. 103
50 0. 624 ± 0. 101 0. 712 ± 0. 113 0. 754 ± 0. 107 0. 694 ± 0. 102
25 0. 623 ± 0. 116 0. 701 ± 0. 105 0. 759 ± 0. 104 0. 718 ± 0. 111
马甲子叶乙酸乙酯部位组 100 0. 591 ± 0. 113 0. 601 ± 0. 102 0. 589 ± 0. 104* 0. 446 ± 0. 102*
50 0. 618 ± 0. 112 0. 687 ± 0. 106 0. 719 ± 0. 112* 0. 521 ± 0. 103＊＊
25 0. 620 ± 0. 105 0. 711 ± 0. 101 0. 723 ± 0. 101* 0. 599 ± 0. 111*
马甲子叶正丁醇部位组 100 0. 549 ± 0. 103 0. 484 ± 0. 114* 0. 508 ± 0. 116* 0. 370 ± 0. 102*
50 0. 634 ± 0. 110 0. 596 ± 0. 109 0. 550 ± 0. 113* 0. 426 ± 0. 121*
25 0. 641 ± 0. 105 0. 717 ± 0. 113 0. 811 ± 0. 105 0. 730 ± 0. 113
马甲子叶水部位组 100 0. 511 ± 0. 104 0. 575 ± 0. 102* 0. 526 ± 0. 101* 0. 438 ± 0. 105*
50 0. 598 ± 0. 114 0. 637 ± 0. 102 0. 621 ± 0. 102* 0. 503 ± 0. 108*
25 0. 612 ± 0. 104 0. 651 ± 0. 103 0. 719 ± 0. 101* 0. 641 ± 0. 102
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
表 3 马甲子叶各部位对醋酸致小鼠腹腔毛细血管
通透性增加的影响(珔x ± s，n =10)
组别
剂量 /
(mg /kg) D(λ) 抑制率 /%
模型组 － 0. 4080 ± 0. 0884 －
醋酸地塞米松组 10 0. 0824 ± 0. 0120＊＊ 79. 80
马甲子叶氯仿部位组 150 0. 2015 ± 0. 0753* 50. 61
100 0. 2570 ± 0. 0766* 37. 01
50 0. 3840 ± 0. 0716 5. 88
马甲子叶乙酸乙酯部位组 150 0. 1100 ± 0. 0429＊＊ 73. 04
100 0. 2742 ± 0. 0153* 32. 80
50 0. 3699 ± 0. 0537 9. 34
马甲子叶正丁醇部位组 150 0. 1850 ± 0. 0435* 54. 66
100 0. 2555 ± 0. 0652* 37. 38
50 0. 3459 ± 0. 0293 15. 23
马甲子叶水部位组 150 0. 2119 ± 0. 0421* 48. 06
100 0. 2223 ± 0. 0316* 45. 51
50 0. 3059 ± 0. 0144* 25. 02
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 5 马甲子叶正丁醇部位对角叉菜胶液致胸膜炎
大鼠肺组织中 MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β 含量的影
响 结果如表 5 所示，与模型组比较，马甲子叶正丁
醇部位组肺组织 MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β 均显著
降低(P ＜ 0. 01)。
4 讨论
炎症是机体组织对局部损伤的反应。在炎症早
期，受伤组织及血液可产生并释放具有致炎作用的
细胞因子、炎性介质、趋化因子等多种化学活性物
质，这些炎症介质刺激血管，使血管扩张，血管内皮
间隙扩大，血管壁通透性增加，血浆内的液体、蛋白
质和白细胞等渗出到组织间隙，随着渗出的增加，造
成组织肿胀〔3〕。PGE2、TNF-α、IL-1β 均为重要的炎
症介质，其在机体组织内含量的增加，代表了炎症反
应的发生。而 MDA 是自由基引发的脂质过氧化反
应的一种产物，可激活环氧化酶(COX)，一方面促
进花生四烯酸产生前列腺素(PG)，导致细胞代谢紊
乱形成炎症，另一方面可影响白三烯代谢形成炎
症〔4-6〕。马甲子叶正丁醇部位(150 mg /kg)能显著
抑制角叉菜胶诱导的胸腔液和肺组织中 MDA、
PGE2、TNF-α、IL-1β的异常升高，说明其抗炎机制与
抑制炎症介质 PGE2、TNF-α 和 IL-1β 的生成及降低
MDA 水平，抑制炎症部位脂质过氧化反应，减少氧
自由基的生成有关。
表 4 马甲子叶正丁醇部位对角叉菜胶液致胸膜炎大鼠胸腔渗出液中
MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β含量的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /(mg /kg) MDA/(nmol /mL) PGE2 /(ng /L) TNF-α /(ng /L) IL-1β /(ng /L)
空白对照组 － 0. 62 ± 0. 18＊＊ 116. 33 ± 8. 62＊＊ 46. 01 ± 7. 96＊＊ 13. 36 ± 1. 74＊＊
模型组 － 6. 34 ± 0. 55 586. 11 ± 19. 34 183. 95 ± 13. 11 48. 30 ± 2. 25
醋酸地塞米松组 7 1. 93 ± 0. 21＊＊ 297. 08 ± 24. 73＊＊ 81. 13 ± 9. 64＊＊ 19. 22 ± 1. 52＊＊
马甲子叶正丁醇部位组 100 2. 04 ± 0. 33＊＊ 386. 57 ± 19. 12＊＊ 105. 23 ± 15. 64＊＊ 26. 54 ± 1. 50＊＊
注:与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
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表 5 马甲子叶正丁醇部位对角叉菜胶液致胸膜炎大鼠肺组织中
MDA、PGE2、TNF-α、IL-1β含量的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /(mg /kg) MDA/(nmol /mg) PGE2 /(ng /g) TNF-α /(ng /g) IL-1β /(ng /g)
空白对照组 － 1. 15 ± 0. 46＊＊ 145. 37 ± 6. 59＊＊ 39. 83 ± 6. 44＊＊ 15. 31 ± 1. 28＊＊
模型组 － 8. 31 ± 0. 79 611. 24 ± 40. 01 175. 61 ± 13. 12 45. 19 ± 2. 66
醋酸地塞米松组 7 2. 75 ± 0. 38＊＊ 354. 29 ± 28. 61＊＊ 101. 34 ± 9. 88＊＊ 24. 10 ± 1. 35＊＊
马甲子叶正丁醇部位组 100 4. 81 ± 0. 43＊＊ 418. 02 ± 31. 46＊＊ 121. 03 ± 15. 79＊＊ 30. 01 ± 1. 69＊＊
注:与模型组比较，＊＊P ＜ 0. 01
上述实验结果表明，按有效部位干膏给药量计
算，马甲子叶的正丁醇部位抗炎作用最佳，其次是水
部位，再次是乙酸乙酯部位，说明马甲子叶有明显的
抗炎作用。将 3 个部位高剂量组折算成对应的生药
量，则分别为生药 4. 76、3. 73、9. 09 g /kg。由此得
出，正丁醇和水部位抗炎效果相当。故以这两个部
位作为马甲子叶的抗炎有效部位。而民间常用马甲
子根水煎液治疗各种急慢性炎症，其他药用部位被
人为摒除，对药材的浪费极大，不利于药材资源的可
持续利用。本实验结果证明了马甲子叶的抗炎作
用，明确了其抗炎有效部位，为马甲子药材的充分利
用打下基础。
参 考 文 献
［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［M］．
第五册 . 上海:上海科学技术出版社，1999.
［2］韦国锋，覃道光，黄志文 . 马甲子镇咳祛痰作用及其化
学成分的提取分离［J］． 右江民族医学院学报，1998，
(2):176-177.
［3］吕小满，彭芳，杨永寿，等 . 玉簪抗炎作用的实验研究
［J］．大理学院报，2010，9(12):15-17.
［4］马加庆，云宇，郭英，等 . 利胆止痛胶囊抗炎镇痛作用及
机制研究［J］．中国实验方剂学杂志，2014，20(2):148-
151.
［5］ Shibata T，Nagata K，Kobayashi Y. The mechanism underly-
ing the appearance of late apoptotic neutrophils and subse-
quent TNF-α production at a late stage during Staphylococ-
cus aureus bioparticle-induced peritoneal inflammation in
inducible NO synthase-deficient mice［J］． BBA-mole Basis
Dis，2010，1802(1) :1105-1111.
［6］ Wheeler MA，Yoon JH，Olsson LE，et al. Cyclooxygenase-2
protein and prostaglandin E2 production are up-regulated in
a rat bladder inflammation model［J］． Eur J Pharmacol，
2001，417(3):239-248.
·9852·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 12 期 2015 年 12 月