全 文 ：紫茉莉含药血清对乙醇诱导 L-02 肝细胞损伤的防治作用
郭美仙， 施贵荣， 陈俊雅， 沈 磊， 刘晓波*
(大理大学药物研究所，云南 大理 671000)
收稿日期:2014-09-18
作者简介:郭美仙 (1980—) ，女，实验师，主要从事中药药理学研究。Tel: (0872)2257412，E-mail:yndllyo@ 126． com
* 通信作者:刘晓波 (1972—) ，男 (苗族) ，硕士，副教授，主要从事中药药理学研究。Tel: (0872)2257412，E-mail:yndlxb@126． com
摘要:目的 观察紫茉莉含药血清对乙醇诱导 L-02 肝细胞损伤的影响。方法 采用血清药理学方法制备含药血清。
用不同浓度含药血清对 L-02 肝细胞进行预防处理，1 h后，加入乙醇损伤 L-02 肝细胞。8 h后，酶标法检测培养液中
丙氨酸氨基转移酶 (ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)活性和受损细胞中丙二醛 (MDA)水平及超氧化物歧化
酶 (SOD)活性;MTT法检测肝细胞存活率。结果 经含药血清处理后，肝细胞培养液中 ALT、AST 活性明显降低，
肝细胞内 MDA水平明显降低，SOD活性明显升高;受损肝细胞存活率明显增大。结论 紫茉莉含药血清对乙醇诱导
L-02 肝细胞损伤有一定的防治作用，其机制可能与抗氧化作用有关。
关键词:紫茉莉;含药血清;乙醇;L-02 肝细胞;防治作用
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2015)09-2035-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 09. 037
酒精性肝病是由于长期大量饮酒所致的慢性疾病，初
期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性
肝纤维化和酒精性肝硬化，严重时甚至可诱发肝细胞坏死
及肝功能衰竭［1］。酒精性肝损伤的发病比较复杂，氧化应
激是公认的机制之一［2］。因此，抗氧化疗法已成为酒精性
肝病治疗的研究重点。紫茉莉 Mirabilis jalapa L． 为紫茉莉
科紫茉莉属植物，俗名夜晚花、粉豆花等［3-4］。根及全草入
药，可治疗扁桃体炎、前列腺炎、乳腺炎、风湿关节炎、
泌尿系感染等［5］。现代研究表明紫茉莉中具有抗氧化作用
的有效成分———黄酮［6-7］。宋粉云等［8］研究发现紫茉莉中
含有葫芦巴碱，葫芦巴碱具有抗肿瘤活性。陈润生等［9］研
究表明紫茉莉有抗病毒作用。赵锦慧等［10］研究表明紫茉莉
有抗菌作用。国内外尚未见紫茉莉对酒精性肝损伤防治作
用的研究报道，本实验研究了紫茉莉含药血清对乙醇损伤
L-02 肝细胞的影响。
1 材料
1. 1 细胞株 L-02 肝细胞，购自上海博谷生物科技有限
公司。
1. 2 动物 SD 大鼠，清洁级，雌雄各半，体质量 180 ～
200 g。由昆明医学院实验动物中心提供，生产许可证号
SCXK (滇)2011-0004。适应性饲养 3 d。
1. 3 样品 云南大理苍山采样，经本院生药学副教授张德
全鉴定为紫茉莉属植物紫茉莉 Mirabilis jalapa L．。取干燥
紫茉莉全草粗粉 5 kg，用 95%乙醇 (50 ～ 52 ℃)回流抽
提，滤去不溶物，蒸馏回收乙醇，浓缩得浸膏 357 g (1 g
浸膏相当于 14 g 生药) ，4 ℃冰箱保存备用［7］。用时生理
盐水配成 4%混悬液［11］。
1. 4 药品与试剂 ＲPMI-1640 培养液 (Gibco公司) ;胎牛
血清 (杭州四季青生物工程材料有限公司) ;MTT和 DMSO
(Sigma公司) ;0. 25% 胰蛋白酶和 1% 双抗 (Amresc 公
司) ;丙氨酸氨基转移酶测试盒、天门冬氨酸氨基转移酶
测试盒、超氧化物岐化酶测试盒、丙二醛测试盒和总蛋白
测试盒 (南京建成生物工程研究所)。
1. 5 仪器 3-111 型培养箱 (Thermo 公司) ;SW-CJ-1FD
型超净工作台;AE-21 型倒置显微镜 (MOTIC 公司) ;Syn-
ergy HT多功能酶标仪 (BIO-Tek公司)。
2 方法
2. 1 含药血清制备 取大鼠 10 只，随机分为生理盐水组
和紫茉莉浸膏组，每组 5 只。禁食不禁水 12 h 后，各组按
10 mL /kg灌胃 (通过预实验，获得最佳剂量)相应药物，
每天早晚各 1 次，共 3 d。于末次灌胃后 1 h，用乙醚麻醉
动物，在无菌条件下，由腹主动脉采血，血液采出后静置
30 min，离心 (3 000 r /min)15 min，分离血清，将同组大
鼠血清混匀，56 ℃水浴 30 min灭活血清，灭活后于超净工
作台内用微孔滤膜过滤除菌，除菌后的血清即紫茉莉含药
血清 (以下简称“含药血清”) ，－ 80 ℃冰箱保存［12］。
2. 2 细胞培养 将 L-02 肝细胞培养于含 10%胎牛血清和
1%双抗，并不含 Hepes 的 ＲPMI-1640 培养液 (以下简称
“完全培养液”)中。
2. 3 确定建立肝细胞损伤模型的最佳乙醇浓度 将存活率
大于 90%的 L-02 肝细胞用“完全培养液”配制成 1 × 105
个 /mL的细胞悬液，接种于 96 孔板 (90 μL /孔) ，设调零
组 (加入“完全培养液”)、正常组、不同浓度乙醇组，每
组设 6 个复孔。48 h后，已有 80%的细胞贴壁，调零组和
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中 成 药
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正常组加入“完全培养液”，乙醇 1、2、3、4 组分别加入
浓度为 25、50、100、200 mmol /L 的乙醇 (用“完全培养
液”配制) ，各孔 10 μL。继续培养 8 h 后，去培养液，所
有孔加入 5 mg /mL MTT (100 μL /孔) ，37 ℃孵育 4 h，去
上清液，所有孔加入 “三联液”(10% SDS-5% 异丁醇-
0. 12% HCl)200 μL /孔，570 nm 处检测吸光度 (A)。实
验孔实际 A值 =实验孔实测 A 值 －调零孔 A 值。实验重复
3 次，计算不同乙醇浓度下肝细胞存活率，选择细胞存活
率约 50%时的乙醇浓度作为实验浓度［13-14］。
2. 4 含药血清对乙醇损伤 L-02 肝细胞存活率的影响 将
处于对数生长期且存活率大于 90%的 L-02 肝细胞，用“完
全培养液”配制成 1 × 105 个 /mL 的细胞悬液，接种于 96
孔板 (90 μL /孔) ，设调零组 (加入“完全培养液”)、正
常组、阴性组、3 个不同质量浓度血清组，每组设 6 个复
孔。48 h后 80%的细胞已贴壁，调零组和正常组加入“完
全培养液”，阴性组加入“含生理盐水血清”，血清 1、2、
3组分别依次加入体积分数为 25%、50%、100%的“含药
血清”对细胞进行预防处理，各孔 10 μL;1 h后，调零组
和正常组加入 “完全培养液”，阴性组和血清组加入 100
mmol /L乙醇，各孔 10 μL。继续培养 8 h 后，检测 A 值
(方法同 “2. 3”项) ，计算细胞存活率［13-14］。实验重复
3 次。
2. 5 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 细胞生化指标的影响
接种于 48 孔板，体积为 180 μL /孔，加样和造模体积为
20 μL /孔，其余方法同“2. 4”项。继续培养 8 h后，取培
养液检测 ALT (波长 510 nm)、AST (波长 510 nm)活性，
收集肝细胞检测 MDA (波长 530 nm)水平、SOD (波长
450 nm)活性［13-14］。实验重复 3 次。
2. 6 处理数据 数据用均数 ±标准差 (x ± s)表示，用
SPSS 17. 0 统计软件对结果进行单因素方差分析和 t检验组
间比较。
3 结果
3. 1 确定建立肝细胞损伤模型的最佳乙醇浓度 表 1 结果
显示，乙醇终浓度分别为 2. 5、5. 0、10. 0、20. 0 mmol /L
时，肝细胞的存活率分别为 79. 82%、65. 84%、51. 64%、
28. 95%。因此，实验浓度选择 100 mmol /L。
表 1 不同浓度乙醇对 L-02 肝细胞存活率的影响 (x ± s，
n =6)
分组
乙醇终浓度 /
(mmol·L －1)
A值 存活率 /%
正常组 — 0. 437 ± 0. 064 —
乙醇 1 组 2. 5 0. 348 ± 0. 027△ 79. 82 ± 5. 83
乙醇 2 组 5. 0 0. 289 ± 0. 029△△ 65. 84 ± 6. 75
乙醇 3 组 10. 0 0. 222 ± 0. 046△△ 51. 64 ± 9. 09
乙醇 4 组 20. 0 0. 127 ± 0. 025△△ 28. 95 ± 6. 22
注:与正常组比较，△P ＜ 0. 05，△△P ＜ 0. 01
3. 2 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞存活率的影响
表 2 结果显示，与正常组比较，阴性组吸光度值明显减
小，有统计学差异 (P ＜ 0. 01) ，细胞存活率为 47. 96%，
表明造模成功。与阴性组比较， “含药血清”终体积分数
为 10. 0%时，吸光度值明显增大，细胞存活率为 62. 85%，
有统计学差异 (P ＜ 0. 01)。
表 2 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞存活率的影响
(x ± s，n =6)
分组 血清 /% A值 存活率 /%
正常组 — 0. 494 ± 0. 065 —
阴性组 — 0. 237 ± 0. 054△△ 47. 96 ± 10. 97
血清 1 组 2. 5 0. 245 ± 0. 053△△ 49. 50 ± 10. 82
血清 2 组 5. 0 0. 287 ± 0. 060△△ 57. 72 ± 12. 15
血清 3 组 10. 0 0. 314 ± 0. 068△△＊ 62. 85 ± 13. 84*
注:与正常组比较，△△ P ＜ 0. 01;与阴性组比较，* P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0. 01
3. 3 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞培养液中 ALT、
AST活性的影响 表 3 结果显示，与正常组比较，阴性组
ALT、AST活性均明显增大，有统计学差异 (P ＜ 0. 01) ，
表明造模成功。与阴性组比较， “含药血清”终体积分数
为 5. 0%时，ALT、AST 活性均明显减小，有统计学差异
(P ＜ 0. 05) ;“含药血清”终体积分数为 10. 0%时，ALT、
AST活性均明显减小，有统计学差异 (P ＜ 0. 01)。
表 3 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞培养液中 ALT、
AST活性的影响 (x ± s，n =6)
分组 血清 /% ALT /(IU·L －1) AST /(IU·L －1)
正常组 — 5. 10 ± 1. 17 7. 24 ± 1. 22
阴性组 — 15. 96 ± 1. 67△△ 17. 46 ± 2. 36△△
血清 1 组 2. 5 14. 30 ± 1. 52△△ 15. 48 ± 1. 95△△
血清 2 组 5. 0 11. 58 ± 1. 81△△＊ 13. 20 ± 2. 16△△＊
血清 3 组 10. 0 8. 94 ± 1. 68△△＊ 10. 27 ± 1. 95△＊＊
注:与正常组比较，△P ＜ 0. 05，△△P ＜ 0. 01;与阴性组比较，
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3. 4 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞中 MDA 水平、
SOD活性的影响 表 4 结果显示，与正常组比较，阴性组
MDA水平明显升高、SOD 活性明显降低，有统计学差异
(P ＜ 0. 01) ，表明造模成功。与阴性组比较，“含药血清”
终体积分数为 5. 0%时，MDA 水平明显降低、SOD 活性明
显升高，有统计学差异 (P ＜ 0. 05) ;“含药血清”终体积
分数为 10. 0%时，MDA 水平明显降低、SOD 活性明显升
高，有统计学差异 (P ＜ 0. 01)。
表 4 “含药血清”对乙醇损伤 L-02 肝细胞内 MDA 水平、
SOD活性的影响 (x ± s，n =6)
分组 血清 /% MDA /(nmol·mgprot － 1) SOD /(U·mgprot － 1)
正常组 — 29. 75 ± 4. 20 91. 16 ± 10. 11
阴性组 — 47. 87 ± 7. 00△△ 32. 60 ± 7. 45△△
血清 1 组 2. 5 45. 20 ± 5. 69△△ 35. 39 ± 8. 56△△
血清 2 组 5. 0 40. 29 ± 4. 48△△＊ 45. 55 ± 10. 78△△＊
血清 3 组 10. 0 36. 10 ± 4. 27△＊＊ 52. 29 ± 11. 38△△＊＊
注:与正常组比较，△P ＜ 0. 05，△△P ＜ 0. 01;与阴性组比较，
*P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
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4 讨论
乙醇经过肝脏多种途径代谢，氧化为乙醛和多种自由
基，导致肝细胞过氧化、变性坏死、纤维化甚至肝硬化。
自由基攻击细胞膜后发生脂质过氧化作用，产生过氧化物，
如 MDA等，其含有量的多少反映了机体过氧化损伤的程
度。SOD是最主要的抗氧化酶，其活性的高低反应机体抗
氧化能力的强弱，在乙醇代谢过程中肝细胞内的抗氧化酶
消耗增加，SOD 活性升高反映了机体抗氧化能力的增强。
ALT和 AST主要位于肝细胞内，是肝损伤最敏感的指标。
当肝细胞膜通透性增加、肝细胞受损时，ALT、AST 会被
释放入血，血清中 ALT、AST 活性升高。所以，通过检测
肝细胞内 MDA 水平、SOD 活性以及血清中 ALT、AST 活
性，可以判断肝脏氧化损伤的程度和药物治疗肝脏损伤的
效果。
本实验通过检测 ALT、AST 及 SOD 活性和 MDA 水平
的变化，来观察紫茉莉含药血清对乙醇诱导 L-02 肝细胞损
伤的影响。检测结果显示: “含药血清”终体积分数为
5. 0%和 10. 0%，可以降低被损害肝细胞培养液中 ALT、
AST 活性，减少肝细胞内 MDA 水平，升高 SOD 活性，增
大肝细胞存活率。结果表明紫茉莉含药血清可以降低乙醇
对 L-02 肝细胞的损害，增大肝细胞存活率，提示紫茉莉对
酒精性肝损害具有一定的防治作用。
参考文献:
［1］ 姚树坤，高 春． 酒精性肝病与非酒精性脂肪性肝病的鉴别
诊断［J］． 世界华人消化杂志，2010，18(14) :1456-1460．
［2］ 李爱华，赵 刚． 酒精性肝病发病机制的研究进展［J］． 吉
林医学，2010，31(17) :2670-2672．
［3］ 侯宽昭． 中国种子植物科属词典 (修订本) ［M］． 北京:
科学出版社，1982:312．
［4］ 《全国中草药汇编》编写组． 全国中草药汇编:上册
［M］． 北京:人民卫生出版社，1982:841-842．
［5］ 大理白族自治州人民政府． 大理中药资源志［M］． 昆明:
云南民族出版社，1991:166．
［6］ 李凌智，吐尔逊娜依，阿不都拉·阿巴斯． 紫茉莉花和叶
中有效成分分析［J］． 食品科学，2009，30(4) :233-235．
［7］ 李西安，李丕高，曹庆生，等． 陕北紫茉莉的化学成分研
究［J］． 延安大学学报:自然科学版，2003，22(6) :
42-43．
［8］ 宋粉云，张德志，钟运香，等． HPLC 法测定紫茉莉根中
葫芦巴碱的含量［J］． 新药与临床药理，2005，16(3) :
189 － 191．
［9］ 陈润生，董贻诚，梁曦云，等． 紫茉莉抗病毒蛋白 (Mira-
bilis antiviral protein，MAP)的空间结构与底物相互作用模
拟研究［J］． 生物物理学报，1996，12(3) :483-489．
［10］ 赵锦慧，赖 颖，葛红莲． 紫荣莉根提取物的体外抑菌实
验［J］． 时珍国医国药，2012，23(6) :1444-1445．
［11］ 杨毅文． 紫茉莉对酒精性肝损伤大鼠 ALT、AST、T-SOD
影响的研究［D］． 大理:大理学院，2013．
［12］ 刘竹青，尹登科，韩 岚，等． 桃红四物汤含药血清对过
氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用［J］． 中国中
药杂志，2013，38(3) :402-406．
［13］ 胡 静，陈新祥，胡剑峰，等． 姜黄素对乙醇诱导的人L-
02 肝细胞氧化损伤的保护作用研究［J］． 医学理论与实
践，2013，26(1) :3-4，7．
［14］ 李远坤． 生姜乙醇提取物有效部位对酒精诱导肝细胞损伤
的保护作用［D］． 扬州:扬州大学，2011．
熄风通脑胶囊对局灶性脑缺血再灌注大鼠血液流变学的影响
曾聪彦， 胡 莹， 高玉桥， 梅全喜， 钟希文， 戴卫波， 林 慧， 张文霞
(广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山 528400)
收稿日期:2014-05-20
基金项目:广东省中山市科技计划资助项目 (20122A010)
作者简介:曾聪彦 (1975—) ，男，教授，主任中药师，硕士生导师，主要从事医院中药新制剂开发研究。Tel: (0760)89980213，E-
mail:zszcy@ 126． com
摘要:目的 探讨熄风通脑胶囊对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血液流变学指标的影响及其意义。方法 采用改良线
栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，研究熄风通脑胶囊对大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞变
形性及红细胞聚集性等血液流变学指标的影响。结果 与模型组比较，熄风通脑胶囊低、中、高剂量组均能明显降低
血浆黏度和不同切变率下的全血黏度 (P ＜ 0. 05) ;降低红细胞压积和细胞聚集性，并能显著提高红细胞的变形性
(P ＜ 0. 05)。结论 熄风通脑胶囊可通过改善血液流变学而达到抗脑缺血再灌注损伤作用。
关键词:熄风通脑胶囊;脑缺血再灌注损伤;血液流变学
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2015)09-2037-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 09. 038
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