全 文 ：茶枝柑皮提取物血清药物化学的初步研究
李娆玲1，黄庆华1* ，游明霞2，甘伟发1，源瀚祺1，张小英1
(1．广东药学院，广东广州 510006;2．广东汤臣倍健生物科技股份有限公司，广东珠海 519040)
摘要 ［目的］对茶枝柑皮提取物进行血清药物化学研究。［方法］采用 HPLC方法测定分析茶枝柑皮提取物给药后的含药血清，鉴定茶
枝柑皮提取物灌胃后大鼠血中移行成分。［结果］在茶枝柑皮提取物含药血清中发现了 17个入血成分，其中 5 个为原型成分，其余几
个可能为代谢产物。［结论］入血原型成分主要为多甲氧基黄酮川陈皮素和桔皮素等成分，深入研究其血清药物化学的表征，将有助于
探索茶枝柑皮提取物的功效物质基础，探明其中的功能因子。
关键词 茶枝柑皮提取物;入血成分;含药血清;功能因子
中图分类号 R284． 3 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)05 －02666 －03
Pilot Study on Serum Pharmacochemistry of Extract of Citrus reticulata‘Chachi’Peel
LI Rao-ling et al (Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou，Guangdong 510006)
Abstract ［Objective］To study the serum pharmacochemistry of extract from Citrus reticulata‘Chachi’Peel． ［Method］Based on the estab-
lishment of HPLC fingerprints of extract of C． reticulata peel，the constituents absorbed into blood were determined by comparing HPLC finger-
prints of the methanol extract of C． reticulata peel，medicated plasma with extract of C． reticulata peel and blank serum． ［Result］Seventeen
compounds absorbed into blood were found in medicated serum，among which five were original constituents of extract from C． reticulata peel
and the other might be metabolites of the original constituents． ［Conclusion］Polymethoxylated flavones，nobiletin and hesperetin which are
absorbed into blood might be bioactive components of extract of C． reticulata peel． Further studies on them will help clarify the bioactive con-
stituents and functional food factors of extract from C． reticulata peel．
Key words Extract of Citrus reticulata‘Chachi’peel;Components absorbed into blood;Medicated serum;Functional food factors
基金项目 珠海市科技工贸和信息化局企业技术创新项目(珠经贸字
(2009)414 号) ;广东省教育厅大学生创新实验项目资金资
助(1057310008)。
作者简介 李娆玲(1986 － ) ，女，广东梅州人，在读硕士，从事中药保
健食品的提取开发与质量控制研究，Email:lymne5@ 126．
com。* 通讯作者，教授，从事中药保健食品的提取开发与
质量控制研究，E-mail:hqh1003@ tom． com。
收稿日期 2011-11-15
茶枝柑皮是茶枝柑(Citrus reticulata‘Chachi’)的成熟果
皮，是广东道地药材广陈皮的原料来源，也是国家卫生部确
定的药食两用的中药品种。茶枝柑皮含有黄酮类成分，含量
比较高的主要是橙皮苷和多甲氧基黄酮类成分［1］。研究表
明，橙皮苷具有抗脂质氧化、清除氧自由基、抗炎、抗病毒、抗
癌、抗菌及延缓衰老等作用［2 －3］。多甲氧基黄酮类成分具有
抗癌、抗氧化、抗诱变、抗炎及心血管保护等作用［4 －6］。此
外，茶枝柑皮提取物对 D －半乳糖致 KM 小鼠衰老模型有明
显抗氧化作用，能使血、肝和脑的 MDA 含量明显降低;使脑
组织、血浆、肝组织中 SOD 活力明显提高;使血液中的 GSH
－ Px活力明显提高［7］。
目前，我国食品功能因子的研发相对快捷有效的途径主
要有:大力从各种天然产物、特别是药食两用的中药资源中
寻找食品功能因子;加强对第 2代功能性食品的功效物质基
础的研究，探明其中的功能因子。由于动物口服后的血清中
“药源性”化学成分较原药(或原食品)简单许多，故将血清
药物化学应用于食品功能因子的筛选［8］，缩小了筛选范围，
提高了研究的针对性，明显减少了研究的工作量并降低了研
究成本。为了阐明茶枝柑皮提取物抗氧化作用的功效物质
基础，探明其中的功能因子，试验建立茶枝柑皮提取物及其
灌胃后大鼠血清的 HPLC图谱，分析茶枝柑皮提取物给药后
的含药血清，鉴定其血中移行成分，以期为进一步筛选确定
茶枝柑皮提取物的功能因子提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。茶枝柑皮果实，于 2009年 12月采自广东
翁源，经广东药学院药用植物与中药鉴定学系李书渊教授鉴
定为茶枝柑(Citrus reticulata‘Chachi’)的干燥成熟果皮。茶
枝柑皮提取物为实验室自制。
1． 1． 2 试验动物。清洁级 SD大鼠，雌性，体重(250 ± 20)g，
由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(粤)
2008-0002。
1． 1． 3 主要仪器。高效液相色谱仪，购自日本岛津公司，包
括 LC-10ATVP双泵，六通定量阀，手动进样器，SPD-M10AVP
型二极管阵列检测器(190 ～ 800 nm) ，SPD-M10AVP 控制器;
TGI-16G台式高速冷冻离心机，购自上海安亭科学仪器厂;
QL-901型涡旋混合器，购自上海隆拓仪器设备有限责任公
司;十万分之一天平，购自日本岛津公司;万分之一天平，购
自北京赛多利斯有限公司;Milli-Q 超纯水纯化系统，购自
Millipore公司;KL512氮吹仪，购自金坛市盛蓝仪器制造有限
公司。
1． 1． 4 主要试剂。橙皮苷，购自中国药品生物制品检定所，
批号为 110721-200613;川陈皮素、桔皮素对照品，均购自上海
华壹生物制品有限公司，纯度≥98%(HPLC) ;乙腈、甲醇为
色谱纯，购自美国 Merk试剂公司;其余试剂均为分析纯，市
售;水为重蒸水。
1． 2 方法
1． 2． 1 液相色谱条件。色谱柱为 Phenomenex Luna (250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ;Phenomenex C18;柱温为 25 ℃;流动相
为 A(浓度 0． 2%乙酸)－ B(乙腈) ，梯度洗脱程序见表 1，检
责任编辑 石金友 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(5):2666 － 2668
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.05.104
测波长为 330 nm;进样量为 20 μl;流速为 1． 0 ml /min。
表 1 梯度洗脱程序
时间∥min A∥% B∥%
0 ～10 92 ～85 8 ～15
10 ～20 85 ～80 15 ～20
20 ～30 80 ～76 20 ～24
30 ～50 76 ～46 24 ～54
50 ～55 46 ～42 54 ～58
55 ～60 42 ～36 58 ～64
60 ～65 36 64
1． 2． 2 溶液的制备。
1． 2． 2． 1 茶枝柑皮提取物灌胃液的制备。将茶枝柑皮于烘
箱 60 ℃过夜烘干，提取工艺为:按料液比 1∶17(g /ml)加入浓
度 42%乙醇，于 62 ℃下水浴回流 3． 1 h，滤液减压旋干得茶
枝柑皮提取物，放置于干燥器中备用。称取一定量的茶枝柑
皮提取物，用浓度 0． 5%的 CMC-Na 水溶液配制成 0． 2 g /ml
混悬液，供灌胃用。
1． 2． 2． 2 茶枝柑皮提取物供试液的制备。精密称取茶枝柑
皮提取物 0． 125 0 g，用无水甲醇超声溶解定容于 25 ml量瓶
中，用 0． 22 μm微孔滤膜滤过，即得。
1． 2． 2． 3 对照品溶液的制备。精密称取橙皮苷、川陈皮素
和桔皮素对照品适量，加无水甲醇溶解，制成含橙皮苷
0． 010 1 mg /ml、川陈皮素 0． 048 2 mg /ml、桔皮素 0． 041 6
mg /ml 的溶液，用 0． 22 μm微孔滤膜滤过。
1． 2． 3 血清样品的采集与处理。
1． 2． 3． 1 给药与采血［9］。将供试大鼠随机分为给药组和空
白组，每组 4只。给药组以药液量 75 mg /kg 灌胃，空白组给
予同体积的浓度0． 5%CMC-Na水溶液，每日2 次，连续3 d。
末次给药前禁食 12 h ，末次给药 1 h 后用乙醚麻醉，眼眶静
脉窦取血 5． 0 ml，分别滴置于离心管中。空白组不给药其余
同上处理。离心管于 4 ℃冰箱静置 30 min，离心 10 min
(3 000 r /min) ，分离血清，置 －20 ℃冰箱中冷冻备用。
1． 2． 3． 2 血清样品的处理。取空白及给药组血清各 1 ml，
加 3 ml无水甲醇，摇匀后，涡旋振荡 5 min，高速离心(10 000
r /min)10 min，吸取上清液，置 10 ml 离心管中，用氮气吹干，
残渣加 0． 2 ml无水甲醇溶解，0． 22 μm微孔滤膜过滤，取 20
μl进样分析。
1． 2． 3． 3 采血时间的筛选。取 SD 大鼠 4 只，禁食 12 h，按
照 75 mg /kg灌胃给予茶枝柑皮提取物水溶液，分别在 30、
60、90和 120 min用乙醚麻醉，经眼眶静脉窦取血 5 ml，分别
滴置于离心管中。离心管于 4 ℃冰箱静置 30 min，离心 10
min(3 000 r /min) ，分离血清，其余操作同血清样品的处理。
结果表明，给药后 60 min的血清样品中，茶枝柑皮提取物的
血中移行成分最多，且浓度最高，因此，选定 60 min为最佳采
血时间。
1． 2． 3． 4 茶枝柑皮提取物样品的处理。为减小药物与血液
样品处理方法不同带来的误差，取上述制备的茶枝柑皮提取
物灌胃液 0． 2 ml于 10 ml 离心管中加入空白大鼠血清 1 ml，
在混匀器上漩涡振荡 5 min，然后照血清样品处理方法进行
预处理。
1． 2． 4 高效液相色谱分析。按“1． 2． 1”的色谱条件，分别进
行茶枝柑皮提取物供试液、橙皮苷、川陈皮素和桔皮素对照
品供试液、茶枝柑皮提取物含药血清和空白血清的高效液相
色谱测定。
2 结果与分析
对比茶枝柑皮提取物与对照品色谱图(图 1、2) ，茶枝柑
皮提取物可分离检测到 14个色谱峰，其中图1中的7、10、13
号峰分别是橙皮苷、川陈皮素和桔皮素。
图 1 茶枝柑皮提取物色谱图
从茶枝柑皮提取物色谱图、茶枝柑皮提取物血清色谱图
与空白血清色谱图(图 1、3、4)的对比分析可见，茶枝柑皮提
取物血清中共分离有 17 个色谱峰，其中:①1、13、14、16、17
号峰所对应的成分依次为茶枝柑皮提取物中的 1、7、10、12、
13号峰，说明有 5 个茶枝柑皮提取物的原型成分吸收入血
(见表 2) ，其中 14号峰和 17 号峰分别为茶枝柑皮提取物原
型成分川陈皮素和桔皮素，1、13、16 号峰为茶枝柑皮提取物
原型未知成分;②7、11、15号峰为血清中固有的组分;③提取
物血清中的 2 ～ 6、8 ～ 10、12 ～ 13、14、16 ～ 17 号峰与空白血
清、茶枝柑皮提取物图谱在相同位置上没有对应的吸收峰，
故推测可能为茶枝柑皮提取物在大鼠体内的代谢产物，也可
能是大鼠受提取物作用而产生的应激产物。
另外茶枝柑皮提取物含药血清和空白血清在色谱图上
未出现橙皮苷等二氢黄酮类成分，说明这些成分可能不被
吸收入血，也可能被代谢成其他成分而不以原型对机体产生
作用。
图 2 对照品色谱图
3 讨论
茶枝柑皮提取物主要含有橙皮苷等二氢黄酮类成分和
川陈皮素等多甲氧基黄酮类成分，他们的紫外吸收峰约分别
766240 卷 5 期 李娆玲等 茶枝柑皮提取物血清药物化学的初步研究
图 3 茶枝柑皮提取物血清色谱图
图 4 空白血清色谱图
表 2 5个入血原型成分对应色谱峰的保留时间及其紫外最大吸收波长
峰号 名称 保留时间 Rt∥min 最大吸收波长 λmax∥nm
1 未知峰 5． 838 297
2 未知峰 50． 845 334
3 川陈皮素 53． 483 332
4 未知峰 55． 351 341
5 橘皮素 56． 685 323
在 280和 330 nm。HPLC － PDA分析结果表明，以 330 nm处
所得图谱的信息较多、表观峰度高、峰形较好。因此选定 330
nm处所得色谱图进行比较。
试验中分别采用甲醇沉淀法、乙腈沉淀法及固相萃取法
对血清样品进行处理，从对待测组分的影响、干扰情况及对
色谱分析条件的影响等方面进行考察，确定采用甲醇沉淀法
处理血清样品。
茶枝柑皮提取物血清色谱图中共检出 5 个组分为茶枝
柑皮提取物的原型成分，其中的多甲氧基黄酮类物质川陈皮
素和桔皮素为入血成分，故可作为功效物质用于茶枝柑皮提
取物的工艺与质量标准研究的评价指标。后续研究将采用
HPLC-MS等分析检测手段更全面地分析茶枝柑皮提取物的
体外、体内成分，采用制备型 HPLC 及普通层析柱建立血中
移行成分的体外制备工艺，同时开展药理、药效学的研究，以
探明其真正的功能因子。
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