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第 32 卷 第 2 期 玉林师范学院学报(自然科学) Vol.32 No.2
2011 年 JOURNAL OF YULIN NORMAL UNIVERSITY (Natural Science)
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散花紫金牛抗炎镇痛作用的实验研究
□李家洲,卢海啸*,廖冰蕾,黎建玲
(玉林师范学院 生命科学与技术学院,广西 玉林 537000)
[摘 要]目的:研究散花紫金牛对小鼠的抗炎、镇痛作用. 方法:用二甲苯致小鼠耳肿胀法
和小鼠棉球肉芽肿的方法来研究散花紫金牛的抗炎作用;采用小鼠热板法和醋酸致小鼠扭体法试
验来研究散花紫金牛的镇痛作用. 结果:散花紫金牛能减轻耳廓肿胀度,降低肉芽肿棉球块重量;
提高小鼠的痛阈值,减少小鼠扭体次数;明显抑制了二甲苯所致小鼠急性耳廓肿、小鼠棉球肉芽
肿及热板、冰醋酸所致小鼠疼痛. 结论:散花紫金牛对小鼠具有明显的抗炎和镇痛作用.
[关键词] 散花紫金牛;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1004-4671(2011)02-0069-04
金牛属(Ardisia)系紫金牛科(Myrsinaceae)
植物.全球300~400种,我国有69种,主
要分布于长江流域以南[1].早在宋朝苏颂
的“图经本草”中已有记载,谓其“气味辛平,
无毒,主治时疾隔气,去风疾”;李时珍“本草纲
目”谓其主治:“解毒破血”.近年来国内用紫金牛
全草治疗肺结核、慢性支气管炎都有较好的效果[2].
研究表明,紫金牛属植物的主要药理作用有:止咳
平喘、抗炎抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗生育、驱虫
和杀虫等[3].但紫金牛属的散花紫金牛,目前国内
外尚无对其进行研究报道.本文对散花紫金牛的提
取物进行药理研究,目的在于确定散花紫金牛抗炎
镇痛的药性,为散花紫金牛的后续研究和开发利用
提供理论基础和实验依据.
1 材料
1.1 药物与试剂
散花紫金牛全草:采于广西玉林市龟山公
园,经广西植物研究所刘演研究员鉴定为紫金牛
科散花紫金牛(Ardisia conspersa E. Walker),采后
晾干并粉碎,粉末备用;0.9%氯化钠注射液:
由广西南宁百会药业集团有限公司生产,生产批
号:0902003;醋酸地塞米松片:由浙江仙琚制药
股份有限公司生产,产品批号:081131,规格:
0.75mg.用前以生理盐水配成浓度为0.024%的药
液;吡罗昔康片:由山西省临汾健民制药厂生产,
批号:080102,规格:10mg×100片.用前以生理盐
水配成浓度为0.024%的药液.
1.2 动物
昆明小鼠,雄性,体重(25±5)g,清洁级,购
于广西医科大学实验动物中心.许可证号:SCXK桂
2003-000.
1.3 仪器
RB-200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司);
电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);
7 mm打孔器.
2 方法
2.1 散花紫金牛粗提物的制备
称取散花紫金牛粉末适量,加入到适量的95%
乙醇中,加热回流1小时,然后抽滤,滤液用旋转
蒸发仪回收,回收的乙醇再加入滤渣中重复上述步
骤3~4次,所得膏状物便是散花紫金牛粗提物.实
验前用生理盐水将其配成高剂量(120mg/kg),中剂
量(60mg/kg),低剂量(30mg/kg)三种.
2.2 小鼠急性耳廓肿胀法
取雄性小鼠40只,随机分5组,每组8只.A组为
正常对照组(等容量生理盐水);B、C、D组分别为
[收稿日期] 2011-03-10
[作者简介] 李家洲,玉林师范学院生命科学与技术学院,副教授;*通讯作者:卢海啸,玉林师范学院生命科学与技
术学院,讲师。
紫
DOI:10.13792/j.cnki.cn45-1300/z.2011.02.018
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玉林师范学院学报2011 年 第 2 期
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散花紫金牛高、中、低剂量组(120mg/kg、60mg/
kg、30mg/kg);E组为醋酸地塞米松阳性对照组(
6mg/kg).每天灌胃给药一次,连续5天,末次给药
30分钟后,用二甲苯0.1 ml均匀涂布于各鼠右耳的
正反面,再过30 min后将小鼠颈锥脱臼致死,沿耳
廓基线剪下两耳,用直径7mm打孔器在双耳同一位
置打下圆形耳片,用电子天平精密称取左右耳片重
量,计算给药组小鼠的耳片肿胀程度及抑制率[4,5].
耳片肿胀程度=致炎侧耳片重量(右耳)—对照
侧耳片重量(左耳);
抑制率=(对照组耳廓肿胀率—给药组耳廓肿胀
率)/对照组耳廓肿胀率×100%
2.3 棉球肉芽肿法
雄性小鼠40只,在乙醚浅麻醉下腹部去毛消
毒.腹部切口,将两个经高压灭菌的5 mg棉球分别
植入小鼠两侧腋窝皮下,缝合皮肤后消毒.随机分
为5组,每组8只:A组为正常对照组(等容量生理盐
水);B、C、D组分别为散花紫金牛的高、中、低剂
量组;E组为阳性对照组(醋酸地塞米松).手术当天
灌胃给药,每天一次,连续5d.末次给药1h后将小
鼠颈锥脱臼致死,取出棉球,在70℃烘箱中干燥2h
后称重,减去原棉球重量即为肉芽肿重量.按照公
式算出小鼠棉球肉芽肿的抑制率[6,7].
抑制率=(对照组肉芽肿干重一给药组肉芽肿干
重)/对照组肉芽肿干重×100%
2.4 热板法
实验前筛选合格小鼠40只(凡5s内出现或30s内
不出现舔后足或跳跃的动物,弃之不用),随机分
为5组,每组8只.A组为正常对照组(等容量生理盐
水),B、C、D组分别为散花紫金牛高、中、低剂量
组(120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg),E组为阳性对
照吡罗昔康组(6mg/kg).腹腔注射给药,分别测定
每只小鼠给药前及给药后30min,60min,90min,
120min的痛反应潜伏期,以小鼠投入热板到出现舔
后足为疼痛反应指标,计算痛阈提高率[8,9].
痛阈提高百分率=(给药后痛阈值—给药前痛阈
值/给药前痛阈值)×100%
2.5 醋酸扭体法
将40只小鼠,随机分为5组,每组8只,称重并
编号.A组为正常对照组(等容量生理盐水),B、C、
D组分别为散花紫金牛的高、中、低剂量组(120mg/
kg、60mg/kg、30mg/kg),E组为阳性对照吡罗昔康
组(6mg/kg).灌胃给药,每天一次,连续5天,末次
给药30分钟后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只.观
察并记录注射醋酸溶液后15 min内出现扭体反应的
次数.实验完毕,计算药物镇痛百分率[10,11].扭体
反应表现为腹部凹陷、躯干和后肢伸张、臀部高起[18].
镇痛率=(对照组平均扭体次数—给药组平均扭
体次数)/对照组平均扭体次数×100%
2.6 数据处理与统计分析
数据用(x±s)表示,采用SPSS17.0统计软件进
行分析,实验结果采用单因素方差分析法进行分
析,组间比较用t检验.
3 结果与分析
3.1 小鼠急性耳廓肿实验
结果见表1,正常对照组小鼠耳廓受二甲苯
刺激出现明显肿胀,耳片重量差值较大;而给药
组、醋酸地塞米松阳性对照组小鼠耳廓肿胀度均
小于正常对照组.其中,高剂量组与正常对照组比
较,有非常显著对抗二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用
(P<0.01),效果接近地塞米松阳性对照组;中剂
量组与正常对照组比有显著性差异(P<0.05),
而小剂量组与正常对照组对比没有显著的统计学差
异.结果说明,散花紫金牛具有显著的抗炎作用,
其作用呈现明显的量效关系.
表1 散花紫金牛对小鼠耳廓肿胀的影响(x±s)
Table1 Ardisia conspersa E. Walker impact on the
mouse ear swelling(x±s)
注:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;
3.2 棉球肉芽肿实验
结果见表2,散花紫金牛的高、中、低剂量组
和醋酸地塞米松阳性对照组的棉球肉芽肿重量都小
于正常对照组.其中高剂量组与正常对照组相比,
有非常显著性差异(P<0.01),效果与地塞米松阳性
对照组十分接近;中剂量组与正常对照组相比,也
有显著性差异(P<0.05).结果说明,散花紫金牛有
明显抑制肉芽组织增生的作用,并呈现一定的量效
关系.
组别
剂量 耳廓炎症
肿胀率mg
抑制率
(%)
A / 8 10.4±1.4 /
B 120 8 6.6±2.1** 36.5
C 60 8 8.3±2.6* 20.2
D 30 8 10.1±1.7 2.9
E 6 8 5.8±1.1** 44.2
鼠数(只)(mg/kg)
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表2 散花紫金牛对棉球肉芽肿重量的影响(x±s)
Table2 Ardisia conspersa E. Walker impact on the
weight of cotton ball granuloma(x±s)
注:与正常对照组比较 *P<0.05,**P<0.01
3.3 热板法实验
表3结果显示,高、中、低剂量组与正常对照
组比较,小鼠的痛阈值都有延长,且随着浓度的
增加痛域值也隨之延长.在给药30min后,高剂量
组分别与给药前和正常对照组相比,痛阈值都有
明显的延长(P<0.01);中剂量组痛阈值也有所延
长(P<0.05);低剂量组无显著的统计学差异.给药
60min后,高、中剂量组分别与给药前和正常对照
组相比,痛阈值都有非常明显的延长(P<0.01);
低剂量组无显著的统计学差异.90min后,各给药组
与给药前和正常对照组相比,均无显著的统计学差
异.从痛阈提高率可看出,30min后和60 min后的散
花紫金牛高剂量组比吡罗昔康阳性对照组的药效
好.以上结果表明,散花紫金牛对小鼠热刺激所致
疼痛反应潜伏期(痛阈值)明显延长,证明散花紫金
牛具有较强的镇痛作用.但持续时间较短,90分钟
后镇痛作用就已基本消失了.
3.4 醋酸扭体法实验
结果见表4,高、中、低剂量组均能明显减
少冰醋酸刺激引起的小鼠扭体次数.其中高、中
剂量组与正常对照组相比都有非常显著性差异
(P<0.01);低剂量组也有显著性差异(P<0.05).其
中高剂量组的镇痛效果比阳性对照组的强.
表4 散花紫金牛对醋酸所致小鼠疼痛的影响(x±s)
Table4 Ardisia conspersa E. Walker impact on the acetic
acid lead mouse pain (x±s)
注:与正常对照组比较 *P<0.05,**P<0.01
4 讨论
本研究以炎症肿胀为主的炎症模型和肉芽组织
增生为主的炎症模型,观察散花紫金牛对炎症的影
响.结果表明,散花紫金牛对二甲苯所致小鼠耳廓
炎症和棉球植入所致肉芽组织增生均有抑制作用,
其中高剂量组有非常显著性差异(P<0.01),药效接
近地塞米松阳性对照组;中高剂量组有也显著性差
异(P<0.05).此外,本文还观察了散花紫金牛对热
板法试验小鼠痛阈的影响和对醋酸所致小鼠扭体反
应的影响.结果表明散花紫金牛能明显抑制热板、
冰醋酸所致小鼠疼痛,其中高剂量组的药效甚至
比吡罗昔康组更好.综上结果,散花紫金牛具有显
著的抗炎镇痛作用,是值得进一步研究的抗炎镇痛
药.
地塞米松是临床常用的糖皮质激素类药物,具
有显著的抗炎、抗毒、抗休克、抗免疫及抗过敏作
用.然而其不良反应很多,如:消化系统并发症;
诱发或加重感染;医源性肾上腺皮质功能亢进;
组别
剂量 鼠数
(只)
肉芽肿干
重mg
抑制率
(%)
A / 8 10.1±2.2 /
B 120 8 6.7±3.0** 33.7
C 60 8 7.5±2.9* 25.7
D 30 8 9.1±2.1 9.9
E 6 8 6.6±1.7** 34.7
(mg/kg)
组别
剂量
mg/kg
给药前
痛阈值t/s
给药后痛阈值t/s
30 min 60 min 90 min 120 min
痛阈提高率(%)
30min 60min 90min 120min
A / 15.0±5.7 16.2±4.1 15.9±5.1 14.7±4.3 15.1±5.7 / / / /
B 120 16.5±5.5 28.3±6.1** △△ 31.2±5.9**△△ 17.4±5.0 16.4±5.3 71.5 89.1 5.5 -
C 60 16.1±6.4 21.7±4.9* 29.9±5.6**△△ 17.0±5.2 15.6±5.8 34.8 85.7 5.6 -
D 30 15.6±5.3 17.1±4.3 20.5±4.7 16.3±5.4 15.6±4.8 9.6 31.4 4.5 -
E 6 15.9±5.5 24.7±5.7**△△ 28.9±4.8**△△ 29.8±5.1**△△ 18.6±7.6 55.3 81.8 87.4 17.0
表3 散花紫金牛对小鼠热板致痛反应的影响(x±s)
Table3 Ardisia conspersa E. Walker impact on the hot plate lead mouse to pain(x±s)
注:相同时间与A组比较,*P<0.05,**P<0.01;与给药前比较△P<0.05,△△P<0.01,n=8
组别
剂量 15 min内
扭体次数
镇痛率
(%)
A / 8 25.4±7.1 /
B 120 8 12.6±4.1** 50.4
C 60 8 15.6±5.6** 38.6
D 30 8 19.8±4.5* 22.0
E 6 8 13.0±4.6** 48.8
(mg/kg) 鼠数(只)
李家洲 等 散花紫金牛抗炎镇痛作用的实验研究
玉林师范学院学报2011 年 第 2 期
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Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Ardisia Conspersa E. Walker
LI Jia-zhou,LU Hai-xiao,LIAO Bing-lei,LI Jian-ling
(College of Life Science and Technology, Yulin Normal University, Yulin, Guangxi 537000)
Abstract: Objective: This paper studies the effects of Ardisia conspersa E.Walker on anti-inflammatory and
analgesic in mice. Methods: Through the way of Xylene lead mice to ear swelling and cotton ball granuloma in
mice to study the anti-inflammatory effect of Ardisia conspersa E. Walker. Through the way of mice on hot plate
and acetic acid lead mouse to writhing to study the analgesic effect of Ardisia conspersa E. Walker. Result: Ardisia
conspersa E. Walker can reduce ear swelling, reduce the weight of cotton ball granuloma; increase pain threshold
value in mice, reduce the number of mice writhing. It has obvious effect to restrain mice’s ear swelling caused by
Xylene, cotton ball granuloma in mice as well as hot plate, and to reduce pain in mice caused by glacial acetic acid.
Conclusion: Its obvious that Ardisia conspersa E. Walker have anti-inflammatory and analgesic effects in mice.
Key words: Ardisia conspersa E. Walker; anti-inflammatory; analgesic
心血管系统并发症;骨质疏松、肌肉萎缩、伤口愈
合迟缓;糖尿病等.停药反应有医源性肾上腺皮质
功能不全和反跳现象[12].吡罗昔康为长效解热镇痛
非甾体抗炎药,主要用于治疗风湿性及类风湿性关
节炎[13].其作用机制除抑制环氧化酶使组织局部前
列腺素的合成减少外,尚可抑制白细胞向炎症部位
的移动和溶酶体的释放及中性粒细胞集结,具有
解热、镇痛、抗炎和抗风湿作用.其主要的不良反
应为偶见头晕、浮肿、胃部不适、腹泻或便秘、粒
细胞减少、再生障碍性贫血等,长期服用可引起胃
溃疡及大出血[14].所以,寻找安全的天然植物来源
的抗炎镇痛药物来预防和治疗炎症,引起了广大科
学工作者的极大关注.在本课题组的另外研究中发
现,散花紫金牛粗提物能改善由肾上腺素引起的局
部微循环障碍,使局部收缩的微血管口径开放,血
流加速(另文发表).而环氧酶途径,是使微血管收
缩,减少血液流动.这提示散花紫金牛是除通过抑
制环氧化酶(cox)而减少前列腺素(PGs)的生成途径
以外而实现药效的.至于散花紫金牛的抗炎镇痛药
效途径、化学成分和药理作用、以及改变炎性介质
等炎症相关物质的含量,有待进一步开发与研究.■
【责任编辑 谢文海】