全 文 ：　○临床报道○
特约栏目 三越药业
猫人参含药血清对人肺腺癌细胞株 A549 EGFR表达
的影响＊
★　郭红飞　杨菊莲　史群云　(江西省中医院　南昌 360006 )
摘要:目的:观察猫人参含药血清对人肺腺细胞株 A549的 EGFR表达的影响及与剂量的关系。方法:免疫细胞化学定量分析
法观察对 EGFR表达的影响。结果:猫人参大 、中 、小剂量组和空白组相比 , 面积灰度乘积值有非常显著性差异(P< 0.01), 3
个剂量组组间比较 , 面积灰度乘积值有非常显著性差异(P< 0.01)。结论:猫人参含药血清对人肺腺细胞株 A549的 EGFR的
表达具有抑制作用。
关键词:猫人参;EGFR;免疫细胞化学定量分析法
中图分类号:R734　　文献标识码:
　　近年来 ,我们应用中药猫人参治疗肺癌 ,临床实
践中发现猫人参具有一定的抑瘤效应 。本课题试图
观察猫人参含药血清对人肺腺细胞株 A549的 EG-
FR表达的影响 。
1　材料方法
1.1　材料
人肺腺细胞株 A549由中科院上海细胞生物研
究所细胞库提供 。SD大鼠 ,清洁级 ,由上海莱克斯
试验动物有限责任公司提供 。
1.2　试剂与仪器
胎牛血清 (FBS)、RPMI1640培养基为美国
GIBCO公司产品 , 兔抗人 EGFRIgG多克隆抗体
(购自北京中山生物技术有限公司 ,为美国 Santa
Cruz公司产品 。
1.3　方法
1.3.1　药物及含药血清制备　猫人参生药水煎浓
缩成含生药浓度为 0.35 g/mL的水溶液 , SD清洁级
大鼠(体重 300±20)g, 24只随机分成 4组:空白对
照组(给生理盐水 2 mL),猫人参小剂量组(0.5 mL
生药水煎液 +1.5 mL生理盐水),中剂量组(按生物
等效计量换算 , 1 mL生药水煎液 +1 mL生理盐
水),大剂量组(2 mL生药水煎液),灌胃给药 ,每日
1次 ,连续 10天 ,最后一次给药前 12小时 ,大鼠禁
食不禁水。动物最后一次给药 1小时 ,吸入乙醚麻
醉 ,摘眼球采血 ,置无菌管。室温下静置 1小时 ,移
至 4℃冰箱静置待血清析出。吸取上清 , 3 500转离
心 15分钟。再次吸取上清 , 0.22 μm滤器滤过除
菌 , 56 ℃水浴锅灭活 30分钟 , -20 ℃冰箱冻存备
用 。
1.3.2　细胞培养　复苏后的人肺腺癌细胞系 A549
常规传代培养。
1.3.3　免疫细胞化学定量分析法观察对表皮生长
因子受体表达的影响　细胞接种培养瓶 ,将细胞分
为 4组:含药血清大剂量组(简称大剂量组), 含药
血清中剂量组 (简称中剂量组 ,含药血清小剂量组
(简称小剂量组),空白血清组(简称空白对照组),
另设 RPMI-1640培养液(含 10%胎牛血清)不加
药物和细胞的调零孔组。大 、中 、小剂量组分别加入
20μl终浓度为 10%的不同剂量组含中药动物血
清;模型空白对照组加入终浓度为 10%的动物模
型血清 20μl,每一剂量均重复 5孔 , 每孔终体积为
200μl, 不足部分加以含 10%胎牛血清的 RPMI-
1640培养液。各组加样后继续培养 48小时 ,加药
组加药 ,空白对照组加入培养液后 ,继续培养 , 收集
细胞 ,固定 , 石蜡切片 。脱蜡后 , 洗涤 ,加生物素标
记兔抗人 EGFR多克隆抗体 。各组随机取片 2张 。
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江西中医药 2010年 12月第 12期总 41卷第 336期 　
＊ 江西省卫生厅中医药科技计划项目(项目编号:2008A083)
　○临床报道○
阴性对照调零 , 每张玻片选 100个细胞 , MOTIC
Advance3.2高级图像分析软件计算胞浆面积和灰
度 ,细胞中 EGFR相对含量以胞浆面积和灰度乘积
表示 。
1.3.4　数据处理　数据保留两位尾数 ,计量资料以
均数 ±标准差表示 ,用 t值或 t值法进行组间差异显
著性检验 ,统计方法采用 SPSS10.0统计软件包 。
2　结果
猫人参含药血清对人肺腺细胞株 A549的 EG-
FR表达的影响见下面表 1。镜下观察 EGFR阳性
细胞为胞膜染成棕黄色 。猫人参大 、中 、小剂量组和
空白组相比 ,面积灰度乘积值有非常显著性差异(P
<0.01), 3个剂量组组间比较 ,面积灰度乘积值有
非常显著性差异(P< 0.01)。其中大剂量组面积
灰度乘积最小 ,中剂量组低于大剂量组 ,但大于小剂
量组 。
表 1　不同剂量组面积灰度乘积
组别 面积灰度乘积
大剂量组 1155±83
中剂量组 1399±85
小剂量组 1553±83
空白对照组 2081±79
3　讨论
表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorre-
ceptor, EGFR)属 于 Ⅰ型受 体酪 氨酸 激酶 ,是
原 癌 基 因 ErbB1 HER1的表达产物 。EGFR广泛
分布于哺乳动物的上皮细胞膜上 ,其信号可介导细
胞的生长 、增殖 、分化 、黏附 、移动等生命现象[ 1] 。
研究表明 ,非小细胞肺癌肿瘤上皮可高表达 EGFR
,常与肿瘤进展 、血管生成 、转移扩散 、凋亡受抑 、放
化疗抵抗密切相关 。EGFR已成为肿瘤治疗的重要
靶点 。 EGFR的信号转导进行干预 ,抑制 EGFR的
活性 ,就能逆转肿瘤的恶性表型 ,抑制肿瘤的进
展。
细胞信号转导体系的发展为研究中医药抗肿瘤
提供了新的思路。在针对以 EGFR为靶点的肿瘤
治疗研究中 ,大量实验证明许多抗癌中药的作用机
制之一即为调节肿瘤 EGFR的表达 [ 2] 。
猫人参是猕猴桃科猕猴桃属植物镊合猕猴桃
(ActinidiavalvataDunn)的根 。分布于江苏 、浙江 、
安徽及江西等地 。性味苦 、涩 ,凉 ,功能:清热解毒 。
主要用于肿瘤 、痈 、疖 、脓肿及妇女白带和麻风病的
治疗。有研究表明:猫人参富含人体所需的各种无
机元素(尤其是 Ca、Mg、Mn、Fe)和多种氨基酸 [ 1-5] ,
有效部位 MA、MB能够抑制小鼠移植性肿瘤的生
长 , 其机制可能与影响细胞周期及诱导凋亡有
关 [ 3] 。猫人参注射液对 H22肝癌小鼠脾脏(胸腺)
指数 、脾淋巴细胞转化指数 、T细胞 CD4 +/CD8 +比
值有升高趋势 ,对不同肝癌细胞株有一定的抑制作
用 ,体外实验结果表明:250mg/mL浓度猫人参注射
液对 H22、CBRJ-7919、SMMC-7721肝癌细胞株均有
抑制作用 ,具有良好的抗肝癌作用[ 6, 7] 。我们应用
猫人参治疗肺癌已有多年的经验 ,临床中发现猫人
参具有一定的抑瘤效应。但其具体作用靶点和猫人
参含药血清对肺癌细胞株 EGFR的影响尚鲜见报
道 。
本研究观察不同浓度的猫人参含药血清对人肺
腺细胞株 A549的 EGFR表达的影响。结果表明猫
人参含药血清可以降低人肺腺细胞株 A549的 EG-
FR表达 ,并呈剂量相关性 ,其中大剂量组抑制效果
最好。
参考文献
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2001 , 7(10):2 958-2 970.
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[ 3]陆胤 ,陈绍瑗 ,吴平.药用植物猫人参有效成分研究(Ⅰ )———无
机元素分析[ J] .浙江大学学报:农业与生命科学版 , 2004, 30(
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[ 6]万旭英 ,张晨 ,凌昌全.猫人参注射液抗肝癌作用和对免疫功能
的影响 [ J].浙江中医学院学报 , 2004, 28(4):56-59.
[ 7]万旭英 ,张亚妮 ,张晨.猫人参注射液体外抗肝癌实验研究 [ J] .
浙江中医学院学报 , 2004, 28(2):45-47.
(收稿日期:2010-11-26　责任编辑:秦小珑)
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