全 文 ：第４２卷　第３期
２０１４年５月
河南师范大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
　 Ｖｏｌ．４２　Ｎｏ．３
　 Ｍａｙ．２０１４
　　文章编号：１０００－２３６７（２０１４）０３－００７９－０５
酶解法提取紫藤总黄酮及自由基清除活性研究
李会端
（楚雄师范学院 化学生命科学学院，云南 楚雄６７５０００）
摘　要：优选酶辅助法提取紫藤总黄酮工艺条件及总黄酮提取液的抗氧化活性研究．辅助法提取藕节中的总
黄酮提取工艺如下：首先纤维素酶酶解，再用乙醇回流．固定提取剂乙醇浓度为７０％，固定料液比为１∶２０ｇ／ｍＬ和
回流时间为２ｈ．设计单因素实验和正交实验初步确定了紫藤中总黄酮提取的较佳实验条件．实验结果表明：酶浓度
为０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解温度为５０℃，ｐＨ值为６．０，酶解时间为２．５ｈ，紫藤颈、紫藤叶、紫藤花和紫藤果荚中总黄酮提
取率分别为０．９４％、４．６０％、３．３２％和５．１６％，可见紫藤不同部位总黄酮含量差异较大．紫藤总黄酮提取液的抗氧化
活性及对自由基的清除实验结果显示，紫藤总黄酮提取液对自由基有较强的清除活性．
关键词：酶辅助法；紫藤；总黄酮；抗氧化活性；自由基
中图分类号：Ｓ１３１；Ｓ１３２ 文献标志码：Ａ
黄酮类化合物泛指两个苯环中间通过３个碳原子连接形成的一系列化合物．黄酮类化合物具有显著地
抗氧化、抗癌、消炎、杀菌、抗病毒和调节肌体免疫力等功效，是一类极具开发前景的天然药物［１－４］．文献中报
道的黄酮类化合物提取方法有有机溶剂浸提法、超声波提取、微波提取、超临界流体萃取及酶解法［５－６］．由于
植物细胞壁的束缚作用，使得总黄酮在提取过程中不易溶出．纤维素酶能降解植物细胞壁的纤维素骨架，增
加细胞内活性成分的溶出，进而释放出黄酮．纤维素酶辅助法提取植物中的总黄酮，具有操作简单、提出率高
等特点，已获得广泛关注．姚晓琳在文献中报道了酶解法提取山楂中总黄酮，提取率高达２．６７％±
０．０６％［７］．
紫藤，属豆科紫藤属，在华北地区多有分布，以冀、豫、晋、鲁最为常见，在华东、华中、华南、西北和西南地
区均有栽培．傅茂润等报道了７０％甲醇超声提取紫藤花中总酚和总黄酮，并研究了紫藤花提取物的抗氧化
作用［８］．姜艳华等报道了丙酮浸提紫藤叶活性成分，并研究了紫藤提取液对香瓜枯萎病菌和白菜软腐病菌的
抑制作用［９］．截至目前，尚没有采用酶解法从紫藤中提取总黄酮的相关报道．本论文拟采用纤维素酶酶解法
分别提取紫藤颈、紫藤叶、紫藤果夹和紫藤花中总黄酮，设计单因素实验和正交实验探究紫藤总黄酮提取工
艺的较佳条件，研究紫藤不同部位总黄酮含量分布及总黄酮提取物的自由基清除活性，为紫藤黄酮类物质的
提取及综合开发利用提供有价值的实验数据．
１　材料与方法
１．１　原料、试剂与仪器
紫藤（采集于楚雄师范学院雁塔校区）晾干，粉碎，备用．无水乙醇；纤维素（＞３０ｕ／ｍｇ）；芦丁标准品、二
丁基羟基甲苯、水杨酸、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠、硫酸亚铁、双氧水、氯化铝（分析纯），三氯化铁，锌粉，亚
硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，等．
７２２型光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）、ＣＰ２１４ｃ电子天平、ＨＨ－Ｓ２ｓ恒温水浴箱、
Ｊ１０５０型托盘天平、ＤＦＹ－５００　５００克摇摆式高速中药粉碎机、电热鼓风恒温干燥箱、回流装置、蒸馏装置、容量
收稿日期：２０１３－１２－１３修回日期：２０１４－０４－０９
基金项目：云南省应用基础研究项目（２０１２ＦＤ０５０）；楚雄师范学院科学研究基金项目（１１ＹＪＧＧ０１）
作者简介：李会端（１９８３－），女，河北宁晋人，楚雄师范学院讲师，博士研究生，研究方向：天然食品化学成分提取及应用研
究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｈｄｏ８＠ｃｘｔｃ．ｅｄｕ．ｃｎ．
DOI:10.16366/j.cnki.1000-2367.2014.03.023
瓶、吸量管等．
１．２　实验方法
１．２．１　总黄酮提取率的计算方法
以芦丁标准品为对照，测定紫藤总黄酮提取率，紫藤总黄酮提取液显色反应参考文献［１０］，使用分光光
度计测量紫藤总黄酮提取液的吸光度值，与总黄酮浓度服从Ｌａｍｂｅｒｔ–Ｂｅｅｒ定律．将吸光度值代入线性回
归方程计算紫藤提取液中总黄酮浓度，再计算紫藤总黄酮提取率：
设紫藤总黄酮的含量为ｘ，稀释以后提取液浓度为Ｃ；原提取液浓度为Ｃ０．
Ｃ０＝Ｃ×ＶＶ０ 　ｘ＝
Ｃ０×５０
２．０００×１　０００×１００％
注：设紫藤样品中黄酮类化合物的含量为ｘ，稀释后的提取液的体积和浓度分别Ｖ０ 和Ｃ；移取原提取液
的体积和浓度分别Ｖ０ 和Ｃ０．
１．２．２　紫藤总黄酮提取液对自由基清除活性研究
参照文献Ｆｅｎｔｏｎ反应体系，加入紫藤提取液后，黄酮类物质与水杨酸竞争·ＯＨ，降低有色络合物生成
量［１０］．固定反应时间，在５１０ｎｍ处测量紫藤提取液吸光度，与空白液对照，计算紫藤中总黄酮对·ＯＨ清除
率．计算公式如下：
·ＯＨ清除率（％）＝Ａ０－
（Ａｘ－Ａｘ０）
Ａ０ ×１００％
，
Ａ０ 为空白液吸光度；Ａｘ 为紫藤提取液吸光度；Ａｘ０为不加 Ｈ２Ｏ２ 提取液本底吸光度．
１．３　芦丁标准曲线绘制与线性关系考察
芦丁标准液的配制及显色反应参考文献，试剂空白做参比，在４００～６００ｎｍ之间扫描测定吸光度，以确
定最大吸收峰波长［１０］．
分别移取芦丁标准液０．００、０．５０、１．５０、２．５０、３．５０、４．５０、５．５０、６．５０ｍＬ于５０．００ｍＬ容量瓶，显色反应
参考文献［１０］，在最大波长扫描吸光度，绘制标准曲线，得回归方程．
１．４　提取液的定性实验
称取２．０００ｇ样品置于５０ｍＬ圆底烧瓶中，加入４０ｍＬ　７０％乙醇，水浴回流提取２ｈ．得紫藤总黄酮提
取液．
移取１．００ｍＬ紫藤总黄酮提取液于小试管，加入少许锌粉，再滴加几滴浓盐酸，振荡（必要时微热），观
察现象．移取１．００ｍＬ紫藤总黄酮提取液于小试管，滴加几滴硝酸铝溶液，振荡，观察现象．移取１．００ｍＬ紫
藤总黄酮提取液于小试管，滴加几滴三氯化铁溶液，振荡，观察现象．
１．５　单因素实验
１．５．１　纤维素酶浓度对总黄酮提取率的影响
分别准确称取２．００００ｇ样品于６支５０ｍＬ圆底烧瓶中，分别加入纤维素酶浓度为０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．１０
ｍｇ／ｍＬ、０．１５ｍｇ／ｍＬ、０．２０ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．３０ｍｇ／ｍＬ的７０％的乙醇１２ｍＬ，调节ｐＨ为６．００，在
５５℃恒温水浴中酶解２．０ｈ．之后再加入２８ｍＬ乙醇回流提取２ｈ，抽滤，洗涤，合并滤液和洗涤液转入
５０ｍＬ容量瓶，用乙醇定容．紫藤提取液显色反应和吸光度测量参考文献［１０］．
１．５．２　酶解温度对总黄酮提取率的影响
参考１．５．１操作，固定纤维素酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解ｐＨ为６．００和时间为２．０ｈ，调节水浴分别在
４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃、６５℃．
１．５．３　酶解ｐＨ对总黄酮提取率的影响
参考１．５．１操作，固定纤维素酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解温度和时间分别为５５℃和２．０ｈ，使用盐酸
和氨水调节ｐＨ分别为３．００、４．００、５．００、６．００、７．００、８．００．
１．５．４　酶解时间对总黄酮提取率的影响
参考１．５．１操作，固定纤维素酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解ｐＨ为６．００和酶解温度为２．０ｈ，酶解时间分
别为０．５ｈ、１．０ｈ、１．５ｈ、２．０ｈ、２．５ｈ、３．０ｈ．
０８ 河南师范大学学报（自然科学版）　　　　　　　　　　　　　　　　２０１４年
１．６　正交实验
基于单因素实验结果，以紫藤黄酮含量为指标设计Ｌ９（３４）的正交实验表，见表１．
表１　Ｌ９（３４）正交实验因素与水平设计
水平
Ａ
Ｃ／（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ｂ
Ｔ／℃
Ｃ
ｐＨ
Ｄ
ｔ／ｈ
１　 ０．１５　 ５０　 ５．０　 １．５
２　 ０．２０　 ５５　 ６．０　 ２．０
３　 ０．２５　 ６０　 ７．０　 ２．５
２　结果与讨论
２．１　芦丁标准曲线绘制与线性关系方程
按１．３操作，扫描不同波长条件下芦丁标准液吸光度，作图１，确定最大吸收波长．波长为５１０ｎｍ时有
最大吸收峰，再增加扫描波长，吸光度值开始减小，故确定５１０ｎｍ为黄酮类物质最大吸收波长．
按１．３操作，绘制标准曲线，得线性方程：Ａ＝１１．２７８　５７Ｃ－０．００１　３６，Ｒ２＝０．９９９　８５．
２．２　总黄酮提取液定性实验结果
紫藤总黄酮提取液显色反应按１．４操作，结果
如表２所示，显色反应现象与黄酮类化合物相同，表
明紫藤中含有黄酮类物质［１０］．
表２　紫藤总黄酮提取液显色反应
试剂 ＨＣｌ－Ｚｎ　 Ａｌ（ＮＯ３）３ ＦｅＣｌ３
现象 粉红色 黄色 墨蓝色
２．３　单因素实验结果与讨论
２．３．１　纤维素酶浓度对总黄酮提取率的影响结果
与分析
按照１．５．１操作，纤维素酶浓度对样品总黄酮
提取率的影响如图２所示：开始阶段随着纤维素酶
浓度增加，总黄酮提取率明显提高，酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ时提取率最高，再增加酶浓度，总黄酮提取率下
降．实验结果显示：紫藤总黄酮提取较佳酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ．分析原因酶浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ时酶解效
率最大，酶浓度再增加，酶解趋于平衡．
２．３．２　酶解温度对总黄酮提取率的影响结果与分析
按照１．５．２操作，酶解温度对样品总黄酮提取率的影响如图３所示：较低温度时，随着酶解温度升高紫
藤总黄酮提取率显著增加，酶解温度５５℃，总黄酮提取率最大，此后随着酶解温度升高总黄酮提取率迅速降
低．分析原因酶解温度过高，酶失去部分活性，温度升高也会使先溶出的黄酮类物质分解，导致总黄酮提取率
降低．
２．３．３　酶解ｐＨ对总黄酮提取率的影响结果与分析
按照１．５．３操作，酶解ｐＨ值对紫藤样品总黄酮提取率的影响如图４所示：随着ｐＨ值增大，紫藤总黄
酮提取率明显增加，当ｐＨ为５．０时，总黄酮提取率最大，继续增加ｐＨ，总黄酮提取率开始降低．分析原因酶
在特定酸碱度，酶解活性最大，体系酸碱度过酸或过碱都会导致酶活性降低．紫藤总黄酮提取纤维素酶的最
佳ｐＨ为６．０．
２．３．４　酶解时间对总黄酮提取率的影响结果与分析
按照１．５．４操作，酶解时间对紫藤黄酮提取率的影响如图５所示：随着酶解时间延长，总黄酮提取率显
著增加，酶解时间２．０ｈ，总黄酮提取率最高，再延长酶解时间，总黄酮提取率开始降低．酶解时间太短，酶解
１８第３期　　　　　　　　　　　　李会端：酶解法提取紫藤总黄酮及自由基清除活性研究
不充分，提取不完全；时间过长，部分黄酮物质分解，导致总黄酮提取率降低．
２．４　正交实验结果与讨论
按照１．６正交实验的因素水平设计表操作，提取紫藤叶中总黄酮，正交实验结果如表３．
表３　正交实验结果
编号
Ａ
Ｃ／（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ｂ
Ｔ／℃
Ｃ
ｐＨ
Ｄ
ｔ／ｈ
总黄酮提取率
（％）
１　 ０．１５　 ５０　 ５．０　 １．５　 ３．９０
２　 ０．１５　 ５５　 ６．０　 ２．０　 ４．０５
３　 ０．１５　 ６０　 ７．０　 ２．５　 ３．４０
４　 ０．２０　 ５０　 ６．０　 ２．５　 ４．６０
５　 ０．２０　 ５５　 ７．０　 １．５　 ３．５５
６　 ０．２０　 ６０　 ５．０　 ２．０　 ３．８０
７　 ０．２５　 ５０　 ７．０　 ２．０　 ３．４０
８　 ０．２５　 ５５　 ５．０　 ２．５　 ４．０５
９　 ０．２５　 ６０　 ６．０　 １．５　 ３．９０
Ｋ１　 ３．７８　 ３．９７　 ３．９２　 ３．７８ －
Ｋ２　 ３．９８　 ３．８８　 ４．１８　 ３．７５ 最佳组合
Ｋ３　 ３．７８　 ３．７０　 ３．４５　 ４．０２ Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ３
Ｒ　 ０．２０　 ０．２７　 ０．７３　 ０．２７ －
　　 由表３可知，提取溶剂乙醇浓度为７０％，水浴回流２ｈ，酶浓度０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解温度５０℃，酶解ｐＨ
值６．０，酶解时间２．５ｈ，即Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ３ 为紫藤叶总黄酮提取的较佳实验条件．极差结果显示Ａ（酶浓度）对紫
２８ 河南师范大学学报（自然科学版）　　　　　　　　　　　　　　　　２０１４年
藤叶总黄酮提取率影响最小，其次是Ｂ（酶解温度）和Ｄ（酶解时间），Ｃ（酶解ｐＨ值）对紫藤叶总黄酮提取率
影响最大．按照上述提取条件，纤维素酶辅助法分别对紫藤颈、紫藤叶、紫藤花和紫藤果荚中的总黄酮进行提
取，结果见表４．
表４　紫藤中总黄酮的提取率
物质名称 紫藤颈 紫藤叶 紫藤花 紫藤果荚
总黄酮提取率／％ ０．９４　 ４．６０　 ３．３２　 ５．１６
２．５　紫藤总黄酮提取液对羟自由基清除活性研究
按照１．１．２方法，参考Ｆｅｎｔｏｎ体系，加入不同体积紫藤提取液，在５１０ｎｍ处测定吸光度，扣除提取液本
底吸收［１０］．做３组平行试验，带入公式计算紫藤提取液对羟自由基清除率．以ＢＨＴ为对照，比较两种抗氧化
剂对·ＯＨ的清除活性．结果如图６所示．
紫藤总黄酮提取液对羟基自由基（·ＯＨ ）有清除活性，且随着提取液体积增加，清除率逐渐增强．对照
实验显示，紫藤总黄酮提取液对·ＯＨ清除活性要高于相同体积的ＢＨＴ．
３　结　论
采用纤维素酶辅助法分别对紫藤颈、紫藤叶、紫藤花和紫藤果荚中的总黄酮进行提取，固定提取剂乙醇
浓度为７０％，料液比为１∶２０ｇ／ｍＬ和回流时间为２ｈ，依次考查了纤维素酶浓度、酶解温度、酶解ｐＨ值和
酶解时间等单因素对紫藤总黄酮提取率影响，设计正交实验确定紫藤总黄酮提取的较佳条件：纤维素酶浓度
为０．２０ｍｇ／ｍＬ，酶解温度５０℃，ｐＨ值为６．０，酶解时间为２．５ｈ．测得紫藤不同部位总黄酮提取率依次为
０．９４％（颈），４．６０％（叶），３．３２％（花）和５．１６％（果荚），可见紫藤不同部位总黄酮含量差异较大．对羟自由
基清除活性实验显示：紫藤提取液对羟自由基（·ＯＨ ）的清除活性高于相同浓度的ＢＨＴ．
参　考　文　献
［１］　Ｙａｎｇ　Ｌ，Ｃａｏ　Ｙ－Ｌ，Ｊｉａｎｇ　Ｊ－Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　Ｃｉｔｒｕｓ
ａｕｒａｎｔｉｕｍ　Ｌ　ｖａｒ　ａｍａｒａ　Ｅｎｇｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，３３（９）：１３４９－１３５５．
［２］　Ｄａｆｆｏｄｉｌ　Ｅ　Ｄ，Ｍｏｈａｎ　Ｖ　Ｒ．Ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ，ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｎｙｍｐｈａｅａ　Ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ　ｗｉｌｄ　ｒｈｉｚｏｍｅ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３，２（５）：３７１０－３７２２．
［３］　Ｈｕａｎｇ　Ｗ，Ｘｕｅ　Ａ，Ｎｉｕ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｐｔｉｍｉｓｅｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｆｏｌｉｕｍ　ｅｕｃｏｍｍｉａｅ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉ－
ｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉ－ｔｅｓｔ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００９，１１４（３）：７６５－１１７２．
３８第３期　　　　　　　　　　　　李会端：酶解法提取紫藤总黄酮及自由基清除活性研究
［４］　Ｌｉ　Ｙ－Ｈ，Ｊｉａｎｇ　Ｂ，Ｚｈａｎｇ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｐｅａ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
２００８，１０６（２）：４４４–４５０．
［５］　张　岩，曹国杰，张　燕，等．黄酮类化合物的提取以及检测方法的研究进展［Ｊ］．食品研究与开发，２００８，２９（１）：１５４－１５７．
［６］　Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｗｅｌｅｒ　Ｃ　Ｌ．Ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，１７：
３００－３１２．
［７］　刘晓光，毛　波，胡立兴．酶解法提取山楂黄酮的工艺［Ｊ］．食品研究与发展，２０１０，８（３１）：５６－５９．
［８］　傅茂润，王　晓，陈庆敏，等．紫藤花提取物的抗氧化作用［Ｊ］．食品与发酵工业，２００９，３５（１２）：１２６４－１２６７．
［９］　姜艳华，樊晓晖，姜　华．紫藤活性成分的提取与抑菌作用初探［Ｊ］．河南农业科学，２００９（３）：６０－６３．
［１０］　文美琼，李　璐，杨申明，等．彝药野坝子花总黄酮的提取及对活性氧自由基的清除作用［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（６）：１４４４－１４４７．
Ｅｎｚｙｍｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ
ａｎｄ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｒａｄｉｃａｌｓ　Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　Ｅｆｆｅｃｔ　Ａｌｐｈａ
ＬＩ　Ｈｕｉ－ｄｕａｎ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｕｘｉｏｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｕｘｉｏｎｇ　６７５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｐｔｉｍｉｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ－ｅｎ－
ｒｉｃｈｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ　ｆｉｒｓｔ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｂｙ　ｃｅｌｕｌａｓｅ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｒｅｆｌｕｘｅｄ　ｂｙ
ｅｔｈａｎｏｌ．Ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　７０％ａｎｄ　ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　１∶２０ｇ／ｍＬ　ｗｅｒｅ　ｆｉｘｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ：ｃｅｌｕｌａｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　０．２０ｍｇ／ｍＬ，ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　５０℃，ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｐＨ　ｏｆ　６．０ａｎｄ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ　ｏｆ
２．５ｈ．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｕｐ　ｔｏ　０．９４％ｆｏｒ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｎｅｃｋ，４．６０％ｆｏｒ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｌｅａｆ，３．３２％ｆｏｒ
Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｎｄ　５．１６％ｆｏｒ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｆｒｕｉｔ　ｃｌｉｐ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｉｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｖａｒｉｅｄ　ｇｒｅａｔｌｙ　ｉｎ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ．Ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｑｕｉｔｅ　ｓｔｒｏｎｇ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｒｏｐｅｒｔｙ　ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ａｎｔｉｏｘｉ－
ｄａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｒａｄｉｃａｌｓ．Ｉｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｗｉｓｔｅｒｉａ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｓｔｒｏｎｇ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｒａｄｉｃａｌｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｎｚｙｍｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｗｉｓｔｅｒｉａ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ；ｒａｄｉｃａｌｓ
４８ 河南师范大学学报（自然科学版）　　　　　　　　　　　　　　　　２０１４年