全 文 ：和平均光密度明显降低，模型组与中药组比较有显著
差(P ＜ 0． 01)。石甘散能促进内源性神经营养因子
BDNF的表达，减少细胞凋亡，发挥抗痫作用。BDNF
表达:与正常组相比，
综上所述，石甘散豁痰开窍，理气活血，能调节离
子通道，抑制神经元放电，通过促进 BDNF的表达保护
神经组织细胞，从而达到抗癫痫的作用。
参考文献:
［1］ 程为平，刘鹏，刘征．石甘散对戊四氮致痫大鼠血清 Glu含量的影
响［J］．中国中医药科技，2014，21(4):385 － 386．
［2］ 刘鹏，程光宇，程为平，等． 石甘散对戊四氮致痫大鼠 GABA 含量
的影响［J］．中医药学报，2014，42(4):97 － 99．
［3］ 安红梅，林晨．石菖蒲的中枢神经系统药理作用研究［J］．长春中
医药大学学报，2014，30(2):230 － 233．
［4］ 刘玉玺，王坤芳，杨育同．石菖蒲挥发油抗惊厥作用及对癫痫大鼠
海马 PKC表达的影响［J］． 中药药理与临床，2015，31(1):97 －
100．
［5］ 赵彦婷，李海峰，王慧．石菖蒲水煎剂对癫痫大鼠脑部神经发生及认知
功能的影响［J］．浙江中西医结合杂志，2013，23(10):787 －789．
［6］ 游杰舒，武姣姣，石晋丽．甘松对动物行为绝望模型的影响［J］．中
国实验方剂学杂志，2012，18(7):205 － 207．
［7］ 肖昭扬，高琴琴，王晖．匹罗卡品癫痫模型中海马区 TＲEK － 2 钾
离子通道表达变化及意义［J］．现代生物医学进展，2015，15(3):
449 － 452．
［8］ 李亚伟，潘心，邹飒枫．雷公藤内酯醇对癫痫大鼠电压门控钾通道
kv1． 1 表达的影响［J］． 国际神经病学神经外科学杂志，2012，39
(2):108 － 113．
［9］ 李志强，邹飒枫，曾常茜，等． 蛇床子素对癫痫大鼠电压门控钾通
道 Kv1． 2 表达的影响［J］． 中风与神经疾病杂志，2012，29(12):
1094 － 1097．
［10］ 王秀杰，赵姝，韩大勇． BDNF 及其受体 TrkB 在不同程度癫痫患
者颞叶或海马中的差异性表达［J］． 黑龙江医学，2011，35(9):
641 － 644．
［11］ 蔡浩，李江丽，谢伟，等． miＲ － 185* 对癫痫海马神经元中
BDNF － TrkB通路表达的影响［J］． 西安交通大学学报(医学
版)，2015，36(2) :169 － 173．
［12］ 杨云生．艾地苯醌对癫痫患者 BDNF、IGF － 1 水平及认知功能的
影响［J］．医学综述，2015，21(19):3634 － 3636．
［13］ 刘昕，胡崇宇，高小平，等．癫痫持续状态 NKCC1、GABAAＲα1 蛋
白在大鼠海马的表达及脑源性神经营养因子对其的影响［J］．中
国现代医学杂志，2015，25(18):1 － 7．
［14］ 赵姝，李春梅，侯晓华．海人酸颞叶癫痫大鼠海马 GAD65 表达的
动态变化［J］．中风与神经疾病杂志，2005，15(8):1189 － 1191．
［15］ 黄隽，徐通，杨朋范，等．颞叶癫痫儿童脑海马组织内 BDNF表达
变化的意义［J］．东南国防医药，2014，16(3):
檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱檱
249 － 252．
基金项目:国家自然科学基金项目(No． 81173501);哈尔滨市应用技术研究与开发项目计划(No． 2014AB3AS045)
作者简介:林晓影(1988 －)，女，博士研究生，主要研究方向:中药复方药效物质基础及其作用机制研究。
通讯作者:匡海学* (1955 －)，男，博士，教授，博士研究生导师，主要研究方向:中药性味理论研究，中药复方药效物质基础及其作用机制研究。
收稿日期:2015 － 10 － 21
修回日期:2015 － 11 － 15
接骨木根皮促进骨折愈合有效部位拆分
及抗炎作用的研究
林晓影，杨炳友，何娅雯，杨春丽，刘艳，匡海学*
(黑龙江中医药大学北药基础与应用研究省部共建教育部重点实验室，
黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:建立接骨木根皮促进骨折愈合有效部位的拆分方法，并考察其抗炎作用。方法:采用
Sephadex LH －20 凝胶色谱分离方法对有效部位进行拆分，用 HPLC法进行色谱指纹图谱研究和互不交
叉验证研究。抗炎作用采用醋酸注射小鼠腹腔毛细血管通透性和蛋清致大鼠足肿胀的模型，考察有效
部位和有效组分的抗炎作用。结果:将接骨木根皮有效部位拆分成环烯醚萜组分和木脂素组分。有效
部位和木脂素组分高剂量组对渗出性炎症有明显的抑制作用(P ＜ 0． 05)，环烯醚萜组分的作用无统计
学意义(P ＞ 0． 05);有效部位、木脂素、环烯醚萜组分高中剂量组均有抑制足肿胀的作用(P ＜ 0． 05)，且
木脂素组分作用强于环烯醚萜组分。结论:建立的接骨木根皮的拆分方法可行，重现性好，基本能够实
现全成分拆分，各拆分组分间化学成分基本无交叉，且尽量保持原型状态。接骨木根皮能够对抗早期及
急性炎症的作用，其中木脂素组分作用强于环烯醚萜组分，两个有效组分对两个模型抗炎的作用均小于
有效部位。
关键词:接骨木根皮;拆分;木脂素;环烯醚萜;炎症
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2016)03 － 0029 － 04
·92·
2016 年 5 月第 33 卷第 3 期
Vol. 33，No. 3，May． 2016
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine

接骨木［SambucuswilliamsiiHance(SWH)］为忍冬
科植物，又名续骨木、大接骨丹等，其根皮作为民间用
药历史较长，具有治疗跌打肿痛、骨折、创伤出血等功
效。临床观察表明，接骨木治疗骨折具有疗程短、恢复
功能快、疗效高的特点［1 － 3］。前期研究已经确定了接
骨木根皮促进骨折愈合的有效部位为 50%乙醇洗脱
部分［4 － 8］。为了明确接骨木根皮有效部位促进骨折愈
合的物质基础，我们对其进行拆分，确定接骨木根皮促
进骨折愈合有效部位的组分组成。在接骨木根皮有效
部位抗炎作用的基础上［9 － 10］，从急性及早期炎症角度
设计了动物实验，初步探讨接骨木根皮有效部位和有
效组分的抗炎作用，为下一步进行接骨木根皮促进骨
折愈合的机制研究提供理论依据。
1 实验材料
1． 1 实验动物
昆明种小白鼠，雌雄各半，体质量 18 ～ 22 g，合格
证号:SCSK黑 2012005。正常健康 SD大白鼠，雌雄各
半，体质量 190 ～ 210 g，合格证号:SCSK 黑 2012005。
室内温度 20 ～ 25℃，相对湿度 40 ～ 70%，12 h 循环
照明。
1． 2 仪器
2695 型高效液相色谱仪(美国 Waters 公司);冷
冻干燥机 Christ LDplus(北京思达兴业仪器有限公
司);可见分光光度计 765 型(上海光谱仪器有限公
司)。
1． 3 药品和试剂
接骨木药材采自哈尔滨市方正县，经黑龙江中医
药大学药学院药用植物教研室苏连杰教授鉴定为忍冬
科接骨木属植物接骨木干燥的根皮，样品保存于黑龙
江中医药大学药学院(110132)。AB － 8 型大孔吸附
树脂(南开大学化工厂);Sephadex LH － 20 型葡聚糖
凝胶色谱(Pharmacia 公司);醋酸地塞米松(三精制
药);伊文思蓝(美国 Amresco公司)。
2 方法
2． 1 接骨木根皮有效部位拆分研究
2． 1． 1 接骨木根皮有效部位的提取和拆分方法
取定量的接骨木根皮有效部位 50%乙醇洗脱液，
投于 Sephadex LH － 20 凝胶柱色谱，依次分别用 7 倍
体积水和 3 倍体积甲醇洗脱，分别得到水洗脱液和甲
醇洗脱液，经减压回收，冷冻干燥，得水洗脱组分和甲
醇洗脱组分。
2． 1． 2 接骨木根皮拆分组分的指纹图谱的测定
为评价接骨木根皮促进骨折愈合有效部位化学组
分拆分方法的合理性、稳定性和重现性，本文对环烯醚
萜组分和木脂素组分分别进行了 HPLC 指纹图谱的
研究。
环烯醚萜组分 HPLC指纹图谱的建立，色谱条件:
色谱柱:J＇sphere ODS － H80(4． 6 mm × 150 mm，5 μm，
日本 YMC)，柱温:25℃，检测波长:240 nm，流动相:梯
度洗脱表见 Tab． 1。
木脂素组分 HPLC指纹图谱的建立，色谱条件:色
谱柱:J＇sphere ODS － H80(4． 6 mm ×150 mm，5 μm，日
本 YMC)，柱温:25℃，检测波长:280 nm，流动相:梯度
洗脱表见 Tab． 2。
Tab． 1 Gradient elution table of Iridoid
Time(min) Flow(mL /min) Acetonitrile(%) H2O(%)
0 1． 0 7 93
28 1． 0 7 93
50 1． 0 20 80
75 1． 0 35 65
Tab． 2 Gradient elution table of Lignans
Time(min) Flow(mL /min) Acetonitrile(%) H2O(%)
0 1． 0 5 95
20 1． 0 10 90
50 1． 0 20 80
75 1． 0 35 65
2． 1． 3 接骨木根皮拆分组分的化学成分互不交叉性
研究
采用以下 HPLC 分析条件，对接骨木根皮各化学
拆分组分化学成分的互不交叉性进行研究。色谱条
件:色谱柱:Waters Symmetry C18(4． 6 mm × 150 mm，5
μm);柱温:25℃;检测波长:225 nm;流动相:梯度洗脱
表见 Tab． 3。
Tab． 3 Gradient elution table
Time(min) Flow(mL /min) Acetonitrile(%) H2O(%)
0 1． 0 5 95
20 1． 0 10 90
50 1． 0 20 80
75 1． 0 35 65
2． 2 接骨木根皮拆分组分的抗炎作用的研究
2． 2． 1 小鼠腹腔毛细血管渗透性试验
取昆明种小鼠，随机分为 11 组，每组 10 只，分为
空白组，阳性药组:醋酸地塞米松(6 mg /kg)，有效部
·03·
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
2016 年 5 月第 33 卷第 3 期
Vol. 33，No. 3，May． 2016

位高、中、低剂量组(900、450、225 mg /kg)，木脂素组分
高、中、低剂量组(130、75、38 mg /kg)，环烯醚萜组分
高、中、低剂量组(770、385、193 mg /kg)。每天灌胃给
药一次，连续 7 d。末次给药 1 h 后静脉注射 0． 5%伊
文思蓝生理盐水溶液 0． 1 mL /10 g，随即腹腔注射
0. 6%醋酸 0． 20 mL /只，20 mm 后断椎处死，用 6 mL
生理盐水分三次洗涤腹腔，吸出洗涤液，合并后加入生
理盐水至 10 mL，3000 转离心 15 min，取上清液用比色
法于 590 nm波长处测定 A 值，以生理盐水调零读取
吸光度 A值，A值表示伊文思蓝含量。
2． 2． 2 大鼠急性非特异性炎症(蛋清足趾肿胀)
取健康 SD 大白鼠 110 只，随机分为 11 组，每组
10 只，分为生理盐水组(等体积生理盐水)，阳性药组:
醋酸地塞米松(4 mg /kg)，接骨木有效部位高、中、低
剂量组(680、340、170 mg /kg)，木脂素组分高中低剂量
组(100、50、25 mg /kg) ，环烯醚萜组分高中低剂量组
(580、290、150 mg /kg)。各组均连续 7 d 灌胃给药。
使用毛细管放大装置，实验前先测量每只鼠右后肢正
常足趾容积，末次给药 0． 5 h 后自足趾中部皮下注射
10%鸡蛋清 0． 1 mL，同时每只鼠灌胃给生理盐水
1 mL /100 g。致炎后分别在 1 h、2 h、4 h、6 h测定其足
跖容积。计算大鼠足跖肿胀率。
肿胀率(%)=(肿胀后容积 －肿胀前容积)/肿胀
前容积 × 100%
2． 3 统计学处理
所有数据以(珋x ± s)表示，差异显著性检验用成组
设计资料的 t检验。
3 结果
3． 1 接骨木根皮促进骨折愈合有效部位的化学组成
拆分研究
取 50%乙醇洗脱组分 5 g，进行拆分，得到水洗脱
液和甲醇洗脱液，减压回收，冷冻干燥，得水洗脱组分
3． 7 g和甲醇洗脱组分 0． 6 g。
所建立的环烯醚萜组分的 HPLC 指纹图谱，相似
度在 99%以上，精密度、稳定性良好;可见两个较大的
吸收峰，分别为环烯醚萜类化合物莫诺苷的 α、β 同分
异构体。
所建立的木脂素组分的 HPLC 指纹图谱，相似度
在 99% 以上，精密度、稳定性良好;结果可见主要有 7
个明显的吸收峰，主要为(7Ｒ，8Ｒ)－ 3 －甲氧基 － 8，
4 －氧新木脂素 － 3，4，7，9，9 －戊醇(苏式)和(7S，
8Ｒ)－ 7，8 －二氢 － 9 －羟基 － 3 －甲氧基 － 8 －羟甲
基 － 7 －(4 －羟基 － 3 －愈木创基)－ 1 －苯骈呋喃丙
醇 － 9 － O － β － D －芹糖基(1→6″)－ β － D －吡喃
葡萄糖等木脂素类化合物。
HPLC方法分析结果:以 HPLC 指纹图谱条件分
析，环希醚萜组分无与木脂素组分相应的色谱峰，说明
两组分间基本无交叉。
3． 2 接骨木根皮拆分组分的抗炎作用物质基础的研究
3． 2． 1 对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
有效部位高剂量组和木脂素组分高剂量组能够抑
制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，其差异
具有统计学意义(P ＜ 0． 05)，且具有剂量依赖性;但环
烯醚萜组分的抑制作用没有统计学意义(P ＞ 0． 05)。
提示对于接骨木根皮有效部位中木脂素组分具有对抗
早期炎症或渗透性炎症的作用，见 Tab． 4。
Tab． 4 Effect of SWH on mouse peritoneal
capillary permeability(珋x ± s，n = 9)
组数 剂量(mg /kg) A值 抑制率(%)
空白组 — 0． 33 ± 0． 02 —
模型组 — 0． 43 ± 0． 08 —
阳性药组 6 0． 24 ± 0． 02＊＊ 45． 13
有效部位高剂量组 900 0． 27 ± 0． 07* 34． 23
有效部位中剂量组 450 0． 34 ± 0． 04 24． 40
有效部位低剂量组 225 0． 38 ± 0． 04 21． 96
木脂素高剂量组 130 0． 32 ± 0． 02* 32． 60
木脂素中剂量组 75 0． 36 ± 0． 02 25． 11
木脂素低剂量组 38 0． 38 ± 0． 03 16． 30
环烯醚萜高剂量组 770 0． 37 ± 0． 02 14． 70
环烯醚萜中剂量组 385 0． 39 ± 0． 05 16． 79
环烯醚萜低剂量组 193 0． 42 ± 0． 02 5． 97
注:Compared with model group，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
3． 2． 2 对大鼠足肿胀的影响
给药前各用药组大鼠足容积与空白组比较差异没
有统计学意义(P ＞ 0． 05)。用药 1 h ～ 6 h，有效部位、
环烯醚萜组分和木脂素组分高剂量组均对大鼠的足肿
胀有持续抑制作用(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01);2 h、4 h 时，
有效部位中剂量和木脂素组分中剂量也有抑制作用
(P ＜ 0． 05)，而环烯醚萜组分中剂量在 2 h 有抑制作
用，4 h没有作用。提示三组都有抑制足肿胀的作用，
木脂素组分作用强于环烯醚萜组分，见 Tab． 5。
·13·
2016 年 5 月第 33 卷第 3 期
Vol. 33，No. 3，May． 2016
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine

Tab． 5 Effect of SWH on paw edema rate of rat(珋x ± s，n = 9)
组别 剂量(g /kg) 正常足容积(mL)
足肿胀率
1 h 2 h 4 h 6 h
模型对照 — 1． 32 ± 0． 03 59 ± 0． 08 55 ± 0． 07 31 ± 0． 04 22 ± 0． 03
阳性药 4 1． 29 ± 0． 02 36 ± 0． 07* 30 ± 0． 01* 24 ± 0． 01＊＊ 17 ± 0． 01*
有效部位高剂量 680 1． 33 ± 0． 04 31 ± 0． 04＊＊ 34 ± 0． 02＊＊ 17 ± 0． 02＊＊ 14 ± 0． 02＊＊
有效部位中剂量 340 1． 27 ± 0． 01 45 ± 0． 08 35 ± 0． 02＊＊ 23 ± 0． 02＊＊ 19 ± 0． 02
有效部位低剂量 170 1． 35 ± 0． 02 56 ± 0． 1 42 ± 0． 04* 29 ± 0． 03 19 ± 0． 03
木脂素高剂量 100 1． 21 ± 0． 03 45 ± 0． 04* 36 ± 0． 02＊＊ 18 ± 0． 01＊＊ 18 ± 0． 01*
木脂素中剂量 50 1． 25 ± 0． 02 48 ± 0． 1 38 ± 0． 01* 25 ± 0． 02* 19 ± 0． 03
木脂素低剂量 25 1． 27 ± 0． 03 54 ± 0． 06 48 ± 0． 04 31 ± 0． 03 22 ± 0． 04
环烯醚萜高剂量 580 1． 27 ± 0． 03 47 ± 0． 08* 38 ± 0． 002* 21 ± 0． 04＊＊ 16 ± 0． 02*
环烯醚萜中剂量 290 1． 31 ± 0． 04 57 ± 0． 09 37 ± 0． 06* 28 ± 0． 02 19 ± 0． 03
环烯醚萜低剂量 145 1． 25 ± 0． 01 54 ± 0． 04 43 ± 0． 06 28 ± 0． 02 24 ± 0． 02
注:Compared with model group，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。
4 讨论
为了明确接骨木根皮促进骨折愈合有效部位的物
质基础，本文建立了接骨木根皮促进骨折愈合有效部
位的拆分方法，确定其组成主要为环烯醚萜组分和木
脂素组分，并利用 HPLC 指纹图谱验证了各化学拆分
组分的互不交叉性。验证结果表明两组分互不交叉性
良好，且拆分方法具有科学性、稳定性和重现性，可以
为开展同类研究提供借鉴，并为进一步进行接骨木根
皮促进骨折愈合的物质基础及机制研究提供理论
依据。
炎症反应是机体最基本的抗损伤反应，也是感染
及其他许多疾病的最基本的病理过程。骨折发生后早
期，血管通透性增加，引起炎症反应。创伤发生的同时
可造成不同程度的周围组织毛细淋巴管和微小静脉损
伤，渗出液回流出现障碍，致肿胀持续而不能及时消
退［11］，极大的推迟骨折的愈合。因此，能够抑制骨折
发生后的炎症反应会对骨折的愈合产生极大的促进作
用。我们采用经典的醋酸致小鼠毛细血管渗出亢进的
渗出性炎症模型［12］和蛋清致大鼠足肿胀的肿胀炎症
模型［13］，旨在探讨接骨木及各组分对早期及急性炎症
的作用情况，为接骨木治愈骨折的机理研究提供理论
基础。本研究表明，对于渗出性炎症，木脂素组分能较
强地抑制炎症早期的毛细血管通透性亢进、渗出和水
肿，从而对渗出性炎症反应起到明显的抑制作用。对
于肿胀性炎症，木脂素和环烯醚萜组分都具有早期抗
炎作用，但木脂素组分的作用强于环烯醚萜组分。综
上所述，木脂素组分在接骨木根皮促进骨折愈合有效
部位对抗早期及急性抗炎作用中起到主导作用，而具
体是哪种化合物起主导作用，以及对其他种炎症是否
有作用、效果是否一致，还有待进一步研究。
参考文献:
［1］ 余传隆，黄泰康． 中药辞海［M］． 北京:中国医药科技出版社，
1997:10 － 12．
［2］ 江苏新医学院．中药辞海［M］．上海:上海科学技术出版社，1985:
2093．
［3］ 韩华，闫雪莹，匡海学，等． 接骨木的研究进展［J］． 中医药信息，
2008，25(6):14 － 16．
［4］ 吕芳．接骨木根皮化学成分的研究［D］．哈尔滨:黑龙江中医药大
学，2002．
［5］ 韩美华．接骨木根皮化学成分及其复方制剂成型工艺的研究［D］．哈
尔滨:黑龙江中医药大学，2003．
［6］ 韩华，杨炳友，杨柳，等．接骨木根皮促进骨折愈合作用的研究［J］．中
草药，2013，44(14):1957 － 1961．
［7］ 宋丹丹，杨炳友，杨柳，等．接骨木根皮的化学成分研究［J］．中医
药信息，2014，31(3):4 － 6．
［8］ 韩华，杨炳友，夏永刚，等． 接骨木根皮促进骨折愈合的初步药理
机制研究［J］．中国药师，2013，16(4):482 － 485．
［9］ 董培良，闫雪莹，匡海学，等． 接骨木根皮抗炎镇痛作用的实验研
究［J］．中医药学报，2008，36(5):18 － 20．
［10］ 杨炳友，卢清秀，朱晓清，等．接骨木总苷片的质量标准研究［J］．
中医药学报，2014，42(3):49 － 52．
［11］ 叶家旭．中医药对骨折早期肿胀治疗的研究进展［J］．中医临床研
究，2013，5(20):117 － 118．
［12］ 徐叔云．药理实验方法学［M］． 2 版．北京:人民卫生出版社，1991:
731．
［13］ 陈奇．中药药理研究方法学［M］． 北京:人民卫生出版社，1993:
366 － 367．
·23·
中 医 药 信 息
Information on Traditional Chinese Medicine
2016 年 5 月第 33 卷第 3 期
Vol. 33，No. 3，May． 2016
