全 文 ：决
第 1 4游第 2期
9 15 8年 6月
湖 南 农 学 院 学 报
J
o u rnal o f Hu o a n Ag ric u lt u a rl Co l l e ge
V o l
.岌 5No .2
Ju ne 18 8 9
竺 `珠根黄酮武的安全毒理学评价
朱天悼 盛忠梅 邹志军 彭 杰
(畜 收 水 产 系 )
李宗道 肖之平 王春挑
(竺 麻 研 究 所 )
[摘 要】通过对 竺麻根有效成份黄酮试的半数致死 t ( L D。 。 )及 显 性 致 死 突 变 试 验 , 测 得 L .D 。为
2 36 9 m gk/ g
, 竺麻根黄酮戒对小白鼠无显性致死效应 , 从而为深入研究其药效 , 扩大兽用药源提供了理 论依据 .
【主厄词】芝麻 ; 根 ; 黄酮 : 毒理学
华
黄酮及其试类 , 从前只作为一种色素应用 , 7 0年代以来 , 人们发现黄酮类似物的生物活
性和药效后 , 黄酮才受到医学上的重视 . 近年来 , 国内外许多学者对黄酮类的药理作用进行
了研究 , 并取得了显著成绩 , 如发现黄酮类具有抗菌 、 解痉 、 抑制胆硷醋酶 、 扩张冠状动脉等
35 种不同的生物活性 〔 ” . B or w n 则综合报道了 28 种黄酮醇类中有 14 种具有致突变作用 〔 2 ’ ·
1 9 84 年我们从兰麻根中也分离提取了黄酮试 , 每 10 09 竺麻根干粉中提出。 · 3 6 9 ` 3 ’ · 为了了解
竺麻根在临床上药用的安全性及致突 变作用 , 我们于 19 8 7年用急性毒性试验法 , 对兰麻根黄
酮试进行了安全毒理学评价 , 求出了半数致死量 ( L D 。 。 ) , 并 利 用小 白鼠的显性致死突变
试验对兰麻根黄酮贰的致突变作用进行了研究 .
材料和方法
1
·
1 试脸药物
竺麻根黄酮试 , 系采 自本院竺麻研究所种植的新鲜竺麻根 , 经洗净 、 切碎 、 晒干 、 粉碎后 ,
用有机溶媒提取法 “ ’ 提取黄酮贰成分 , 烘干 , 临用前再用蒸馏水将其配成 4 肠的浓度备用 ·
.1 2 试验动喃
, 普通小白鼠共 81 只 .其中 29 只公 鼠 , 体重为 18 、 2 2 9 , 用来测竺 麻 根 黄酮贰的半数致死
本文子 万, 8 7年一。月 6日收到
湖 南 农 学 院 学 报 1 98 公年第1 4.
量 :其余 2 5只小 鼠 (其中 4只公鼠 , 体重 3 1 . 5” 3 7 . 49 , 48 只未孕酬冠 , 一体重朽 · 5” 37 · g5
用来作显性致死突变试验 . 小鼠全部由湖南医科大学小动物饲养室提供 .
试脸方法
丰数致兄量 ( L D 。 。 ) .的浏 定— 采用序贯法 叭 ; 沂首先决定一系列按等比级数排列的剂量组 . 参考南京药学院 19 7 2年从竺麻叶中分离提出
之咖啡酸的二乙胺盐小鼠腹腔 注射的L D 6 。为 1 58 3m g / k g t “ ’ , 本试验以 80 0m创k g 为 最 小剂
量 , 按公比 1 . 2排成等 比级数 .
1
.
3
.
1
.
1 该试
先从 s o om以k g剂量开始 , 逐只小 鼠腹腔注射 4 帕兰麻根黄酮贰液 (剂量见表 1 )后观察 24 h .
若小鼠死亡 , 则下一只小 鼠就用低一级剂量 , 反之 , 则用高一级剂量 , 直至死亡 ( + ) 或存
活 ( 一 ) 符号改变 , 即开始正式试验 ` , , . 本试验预试至第 8 只小 鼠时 , 符号开始改变 .
1
.
3
.
1
.
2 正 式试验
试验动物数 ( n ) 为 2 只小 鼠 , 从预试的第 8 只小 鼠开始计数 , 按照预试 法继续进行试
验 , 直至 ( n 一 l ) 只 ( 即 21 只 ) 小 鼠为止 . 最后一只 ( 即第 2 只 ) 小鼠不作试验 , 其反应结
果可能为 ( + ) , 也可能为 ( 一 ) . 因此该 鼠既不能加入该剂量组的死亡动物数内 , 也不能
加入该剂量组的存活动物数内 , 故以问号 ( ? ) 表示 . 但不论该 鼠出现何种反应 , 均应列入
该剂量组的死 亡和存活小鼠的动物总和内 〔 3 ’ . 然 后 计算 L D 。 。及 L D 。 。的标准误 , 再按正态
分布原理求出总体 L D 。 。的 95 肠的可信区间 〔“ ’ .
1
.
3
.
2 显性欲死突变试验
1
.
3
.
2
.
1 剂量与分组
设 3 个试验 组 和 1个对照组 , 每组一只成年公鼠 , 编号后分笼饲养 . 第 1 、 2 、 3 试
验组的公鼠分别给予竺麻根黄酮试L D 。 。的 l / 5 ( 0 . 4 7 3 s m g / g ) 、 r / 1 0 ( 0 . 2 3 6 g m g / g ) 、 l / 2 0
( o
.
l l8 5m g / g ) 的剂量 , 各分成 7 等份 , 每天取 1 份 , 用蒸蒸水稀 释 至 o . s m l , 进行腹腔
注射 , 连注 7 天 , 第四组的公鼠则每天腹腔注射等量 ( o . s m l ) 的生理盐水作为对照 .
1
.
3
.
2
.
2 分毒七交配
将 12 只未孕的成年母鼠随机分为 4 组 , 每组各 3 只 , 分别与给予不同剂量竺麻根黄酮戒和
生理盐水的公鼠同笼饲养交配 , 一周后取出母鼠按组分笼饲养 . 而后另换一批母鼠与公鼠同
笼饲养交配 , 如此连续交配 4 批 , 共计 4 8只母鼠 .
1
.
3
.
2
.
3 计数与计算
每批母鼠于交配后的第 2 周周末将其颈椎脱臼处死 , 剖腹 , 取出卵巢和子宫 , 记录其黄
体数 、 活胎数 、 死胎数和着床总数 . 然后 , 分别计算试验组和对照组的致突变指数 , 并进行
统计分析与显著性检验 .
惫
致突变指数 ( * ) 一醚鲤馨缨黔脸丝立 x ,。 。 : 。 」刁习 闪 、 奋t s 、 夕入
2 试验结果
2
.
1 半狱欢死 t
试验和数据的统计整理结果分别见表 1和表 2
护
将 表 2 中 的 艺狱 ( 即 8 , 2 4 1 一 ) 代入
第 2期 朱夭淖等 竺麻根黄网成 的安全毒理学评价 93
也
L L gD
o o =二 、 。 「。 , f城 * 力二 二。 决 二二 , 认 、 。 _ _ 。 ; , 二 _ , _ 、 、漆 * _ 二 碑 .二~ P ( l一 P )付二肺怅贝阴 讯阴 ` U , “刀 “ J 。 , 气 二1岁 g 夕 ’ 价衣 乙甲阴二 一一一不二厂
, 。 。 八 一 。 。 、 。 、 。 : _ : 。 _ 月 / 。 P (一 P ) 小 、 ; . , 、 二 、 。 : : 1 。 : _ 。 。 1 。 、:。 、 . :。 。 ,飞, , l、 、( 即” · ” 26 8 ) 代入 “ gL “ D 。 。一 d ·犷2 主派一式电得标明吴为0 · “ ` 3 , 将 一仁 述结 果 代 入
L g L D 。 。 士 2 . 9 6 s L g L D 。 。式中 , 经换算得出 , 当竺麻根黄酮试的 L D 。 。为 2 3 6 9 m g / k g 一付 , 其 9 5 a0/
的可信区间值为 2 2 3 5勺 :2 s l 3 m g / k g .
表 1 胜麻根黄酮戒 L D 。 。的测 定
序 号
等比荆 t 组
( m g / g )
2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 1 3 14 15 16 17 18 1 9 2 0 2 ! 2 2
0
.
8 0
0
.
9 6
1
.
1 5
86
:3
喊 1 . 9 9
2
。
3 9
+
十 + 十 + 十
2
。
8 7 + 十 + 十
3 。 4 4 +
注 : ( l) 表中 ` + ` 表示死亡 , “一 ` 表示存活 ; ( 2 )0 . 80 , 2 .” m g跑娜比剂纽预试结果均为` 一 :
表 2 兰麻根黄酮武 L D 。 。浏定数据 的统计整理
串亡)P死荆 t 组《 . 已八 ) 对数
剂且
( x )
存 活 数
( F )
动物总数
( r )
t X
P (一 P )
n 一 l
数亡)S死`
0
。
2 1 9 8
0
。
2 9 9 0
0
。
2 1 9 8 0 . 0 0 0 0 0 。 0 00 0
一 7 94 0
2
。
3 9
2 . 8 7
0
。
3 7 8 2 8+ ( ? )。 9 3一 4 0 3 8
0 。 16 6 7
0
。
5 5 5 6
0
.
0 0 6 6
0
.
0 1 1 8
60目魂00仙
.
0
。
4 5 7 4 2 。 2 8 7 0 0
。
8 0 0 0 0
.
0 0 8 4
3一 4 4 0
。
5 3 6 6 0
。
5 3 6 5 1
。 0 0 0 0 0
.
0 0 0 0
合 计 l I l 0 2 2 8 。 2 4 1 0 。 0 26 8
2
.
2令 显性 . 死突变试验试验结果 ( 表 3 , 4 ) 表明 , 三个试验组的致突变指数与对照组均无显著差异 , 说明搜
麻根黄酮试对小白鼠无显性致死效应 .
彻 南 农 学 院 学 报 ` 。55年第 l`今
表 3兰麻根黄酮戒对小 白鼠的显性致死突变效应
.曰 . .曰 . . . . . . . . . . .
傀 一 塑 策 二 组 该 三 组 第 四 组
致死效应
1 2 1 4 32 3 31 2 341 2 4 3
6
qó 0,曰nJ1 5
l 3
3 7
3 l
17
l 6
2 l
l 7
4 l
3 8
ō合,一0,dnJ840心J咋`,`j0弓曰份」0nDOd,`勺`丹00通ó月」080口`.月黄体数(个 ) 26
活胎数 (个 ) 23
早期死亡胚诫饭了不) ”
晚期死亡胚胎数(个 )
吸 收 胚胎数(个 )
, 床总数 (个 ) 2 6
3 6
2 9
3 2
2 9
4宁ù0q吸曰」
3 2 4 2 4 0 3 7 ! 5 3 4 3 5 3 7 1 7 2 1 4 1 36
. 示其中一只母鼠来孕
表 4 各组致 突变指数及显著性检脸之 “ t 值
死胎数 (包括
x
(
吸收胚胎数 )个 ) 着床总数n (个 )
致突变指数
P,
显著性检验之 ` t . 值 ’
1 4
2 6
1 2 0
.
7
1 7 2
.
2
t l = 0
。 6 0 7
14 0
。
5
9 5
。 7
t : = 1
.
80 4
不5 . 1 。 0 5 7
拓O` 1...矽ó..皿三
.孟ōó口乙,..孟占
l儿 L D 一。
1 /一OL D . o
一2/ o L D o o
对 照 组
l 7
11
, 示各试脸组结果与对照组 比较均无显若性差异 .
3 小结与讨论
( 1 ) 半数致死 量 ( L O 。 。 ) 是能引起试验动物半数死亡的剂 量 . 用它来表示药物的毒性 ,
比较灵敏准确 , 因而是任何一个药物的安全毒理学评价的重要指标之一 临床初次应用某药时 , 一般可取 l / 10 、 1 / S L D 。 。作 为 试用剂量 「` ’ . 故在研究竺麻根黄酮试的药理作用及其临
床效果之前 , 必须首 先测定它的 L D 。 。 , 并以此作为慢性试验的给药依据 .
( 2 )测定 L D 。 。的方法很多 , 各有其优缺点 .根据本试验的要求和我们的条件 , 本试验采用
了序贯法 . 序贯法要求试验的动物性别相同或公母各半 , 体重为 18 、 2 2 9 ,且要有一定的数量 ,
至少在 13 只 以上 ` 7 ’ ; 同时 , 给药后要有一定的观察时间 . 本试验均符合序贯法 L D 。 。的测定
标准 , 因而具有一定的可信性 . 由于序贯法较难估计误差 , 为了克服此缺点 , 我们通过医学
统计分析 , 计算了 L D 。 。的标准误及其 95 帕的可信区间值 , 从而为兽医临床应用芝麻根 黄 酮
试治疗家畜疾病提供了一个安全有效的剂量范围 . 讲
( 3 ) 目前巳知的天然黄酮类化合物 , 根据其化学结构可分为 10 多种类型 ` ’ “ ’ . 本试验系用
竺麻根的总黄酮试 , 测得的 L D 。 。为 2 36 9 m g / k g , 较南京药学院 19 7 2年测得的兰麻叶中咖 啡酸
第 2期 朱天体等 竺麻根黄附式的安全毒理学评价
今 的 L O。 。 (1 5 83 mg/ kg )为大 , 这说明芒麻根黄酮贰成分的毒性较竺麻叶咖啡酸成分要小 , 因
此使用时更加安全 。
( 4 )
“ 显性致死 ” 是生殖细胞染色体多处断裂而引起杂合子的死亡 ` ’ ` ’ . 根 据 每 组 黄
体 、 活胎 、 死胎和着床总数所进行的统计分析和显著性检验表明 , 竺麻根黄酮俄对小鼠无显
性致死效应 .
( 5 ) 各种诱变剂作用于精子的不同发育阶段 , 可在接触该 种 诱变剂后不同时期出现精子畸
形 . 目前认为 “ 2 ’ : 精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞对化学诱变剂较为敏感 ,
故一般在接触诱 变剂后第 4 周最易出现精子畸形或畸形率增高 . 而本试验组的致突变指数与
显著性 “ t ” 检验 , 结果均无显性致死效应 , 表明试验组公鼠在给予竺麻根黄酮贰后第 4 周未
出现精子畸形或畸形率增高的情况 , 也未导致试验组与对照组母鼠致突变指数的显著性差异 ,
由此可说明 , 竺麻根黄酮贰很可能不是一种诱变剂 .
( 6 ) 致突变与致癌之间有很高的相关性 , 发现至少有 90 、 95 肠的致癌物质也是致突变物质 .
已知致癌剂和致突变剂都是亲 电子性物质 , 能与包括 D N A 在内的大分子的亲核中心结合 . 通
过哺乳动物生化转化系统的实验同样证明 , 绝大多数致癌剂是致突变剂 . 最近 , 在致癌基因
领域中为突变和致癌的 因果关系提供了有力的和更直接的证据 , 说明致突变性试验可用于致
癌性检测 .
小 `鼠显性致死试验是在小鼠体内进行 , 不需要特殊设备 , 观察容易 , 结果明确 , 能反映
遗传拇伤的直接后果 , 因而是一种较为实用的方法 .
前人的研究发现 , 黄酮有致癌的 、 也有不致癌的 、 甚至有抗癌的作用 . 兰麻根有效成分
黄 酮贰是否有致癌性 , 通过显性致死突变试验 , 初步认为无致癌 作用 、 当然 , 最终的结论还有
待进一步的研究 · 但本试验至少在这方面作了初步的探讨 , 为进一步开发竺麻根 11十的综合利
用提供了有用的数据 .
我国兰麻常年产量 , 约占全世界产量的 9 0肠以上 〔 ` 3 ’ . 在国内 , 我省竺麻产量又居全国首
位 , 竺麻根来源广泛 . 因此 , 对竺麻根有效成分黄酮试作出正确的安全毒理学评价 , 深入研究其
药效 , 对充分利用和发展竺麻的优势 , 扩大兽用药源 , 将会产生一定的社会效益和经济效益 .
参 考 文 献
1 林启寿 . 中草药成分化学 . 北京 : 科学出版社 , 19 7 7 : 3 43
2
·刘仲则 . 中草药黄雨类化合物心血管活性成分概述 . 湖南中草药 , 1 9 8 7 ; 1s( 4 ) : 41
a 盛忠梅等 . 竺麻根化学成分及其抗菌作用研究 . 中国兽医杂志 , 1 9 84 ; ( 5 ) : 40
4 全国中草药汇编编写组 . 全国中草药汇编 (下册 ) . 北京 : 人民卫生出版社 . 1 9 7 8 : 2 94
6 全国兽医中草药制剂经验选编编写组 . 全国兽医中草药制剂经验选编 . 北京 : 科学出版社 , 1 9 7 7 : ” , 3 97
6 南京药学院中草药学编写组 . 中草药学 (中册 ) . 南京 : 江苏人民出版社 . 19 7 6 : 125
7 张昌绍等 . 药理学 . 北京 : 人民卫生出版社 , 19 65 : 3 93 ~ 3 9 4 , 引 1
8 中国医学百科全书一一医学统计学 . 上海 : 上海科学出版社 , 19 8 2 : 2 0 7
g 王 敏等 . 除草剂 . 胶草灵 ’ 毒性试验 1 . 小鼠显性致死试验 . 浙江医科大学学报 . 19 81 : l 0( 5 ) : 2 12
10 唐慰慈等 . 药物致庙和可能致痛的药物 . 药学通报 , 19 8 2 , ( 1 2 ) : 32 ~ 36
t盆 5 id n e y G r e e n e ta l OC n f e r e n e e o n C u r r e n t S t a t u s o f B io a s s a y s i n G e n e t i e oT x i e o lo g了 ( G E N一 T o x ) . U S A
E P A
, 6 4 D e e
.
1 9 8 0 ; 32 5
挂 王 敏娜 . 小鼠精子畸形试验 . 浙江医科大学学报 , 19 8 3 ; 12 ( 2 ) : 96
均 李宗道 . 麻作的理论与技术(第三版 ) . 上海 : 上海种学技术出版社 , 1 9 8 7 ; ”
湖 南 农 学 院 学 报 1 9 8 8年第 l召 t
E H TSA F E TO XIC O LO GA P YP R EA C I IO TF N O R
F LA VON E GU C O S ID E LF OA R MI E R O O T
Z hu Ti n az hu o S hn eZ hn o gm ei Z hou Z i hju n
( T heD ePr at口 ent o f
L1Z hon gd a o
A n i口 a l Hu s b an dry n ad aqu at i e
P e“ 9 Ji e
Pr odu et s )
Xi a oZ iP i hn gW an gC hu ent a o
( Rai m eR es ear ei l I ost itu t e)
A BSA R TC T
L et ha ld os eo f ha l ft heu n mb er ( LD
。 。
)an d d o mi n ant l et ha lity mu t at i on i n
t he efc et iv e eo mP os it i n o flv n a o eG lu eos id eo ft her a mir eo ot wr e ed et r emi n d e
.
T hed et r emi n at i n o o ft hel et ha ld os o ef ha l ft heu n mb eu r s edt hem et hd o o f
squ ent i a lt r i a l
.
T her a mir o eot flv an o e
’ 5 LD。 。 152 6 3 9m邵 k g. It wi l lu s P P ly t he
aSt ean d et fc et iv eli mit s o ft hed os ei nt hev et et i nr ay eli n i n
.
N o mr a k ed d i任 er -
en o eb et w en et het hr e e ex Pr ei m ent gr ou P s n adt he eont r o li nt he
ex Pr ei m ent o f
t hed omi
n ant l et ha lity mu t at i n ot hru o g ht hs et at i st i es an a ly s n a edt hemar kd e ex
-
a mi n e、 v s a fU n Od . T hr es eU lt s howst hat t hel fan O VeO ft her a mir e0 0t has n o
d o min ant l et ha lity ef f e et
.
U S B E C J TW O R D S Boc m h
r ei an iv a e;R o ot ;F lav n o
e; Tx oi eo lo gy
尹书书蕊书书姚蕊 、弓
、
文 摘 卜
, 犷 , 护 , 宁 , r , r , 护 , 护矛
产犊时奶牛对其组织动员 、 脂肪肝形成和血液化学的影响
R e i d 1
.
M
用两组 ( 每组 9 头 ) 英国黑白花奶牛比较产犊时膘、肥和膘瘦的奶牛对皮下脂肪组织的动
员及其功能活动 , 骨骼肌的动用 , 肝脏脂肪浸润的形成及消散 , 结果 : 两组母牛在 产犊前 4
周和产犊后 26 周之间在动用脂肪组织数量上没有差别 , 两组间在分离脂肪细胞的脂肪产生和
脂肪分解能力上均无差别 . 但在产犊期和泌乳初期发生了较大的变化 ; 膘瘦的母牛 , 特别是
在产犊后所分离的脂肪细胞 内其 乙酸盐变为 C O : 的氧化作用较强 . 在产犊前 4周和产 犊后 4周
期 间 , 膘肥母牛比膘瘦母牛丧失的肌肉纤维面积多 , 而在产犊后 1和 4周时 , 膘肥母牛比膘瘦
母牛的肝脏脂肪浸润多 : 产犊后 l 周 , 平均膘肥母牛比膘瘦母牛的白细胞计数低而红细胞压
积高 , 组间血液成分上的主要差别为 , 产犊后膘肥母牛血液中的C u ( 游离脂肪酸 、
及氨甲酞乌氨酸转移酶的浓度增高 , 结果表明 ,
胆红素傲膘肥母牛和膘瘦母牛在泌乳初期对代谢需要
的反应不同 , 因此这些差别导致膘肥母牛对疾病更敏感 .
向东译自 《 A n im a l p r o d u c t i o u 》 1 9 5 6 ; ( 4 3 ) : 7 、 15