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葎草乙酸乙酯提取物抗炎镇痛作用及其机制的研究＊
曹纬国 ,张　丹＊＊ ,张义兵 ,刘　莎
(重庆医科大学中医药学院 ,重庆　401331)
　　摘　要　目的:研究葎草乙酸乙酯提取物(LAT)的抗炎镇痛药理作用 , 并对其作用机制进行初步研究。方法:采用醋酸扭体
法实验和热板法实验两种疼痛模型观察葎草的镇痛作用;采用二甲苯致小鼠耳肿胀 、棉球诱导大鼠肉芽组织增生和鸡蛋清致大鼠
足肿胀法实验模型研究葎草的抗炎作用;通过小鼠福尔马林镇痛实验和测定大鼠足爪炎性渗出物中 PGE2含量研究其抗炎镇痛机
制。结果:葎草乙酸乙酯提取物能明显的减少小鼠的扭体次数 ,显著的提高小鼠的痛阈值 ,对二甲苯致小鼠耳肿胀 、棉球诱导大鼠
肉芽组织增生和鸡蛋清致大鼠足肿胀均有明显的抑制作用;并能够降低小鼠福尔马林镇痛实验中 Ⅱ相疼痛反应 , 能降低大鼠足爪
炎性渗出物中 PGE2的含量。结论:葎草醇乙酸乙酯提物具有明显的抗炎镇痛作用 ,葎草醇乙酸乙酯提物具有一定的外周性镇痛活
性 , 其抗炎作用可能与其抑制炎性组织中的 PGE2合成或释放有关。
　　关键词　葎草;抗炎;镇痛;作用机制
　　葎草(Humulusscandens(Lour.)Merr.)为桑科葎草属植
物 , 始载于《唐本草》 ,本课题组前期研究发现 , 葎草乙酸乙酯部
位具有较强的抗炎镇痛活性 , 本实验进一步对葎草乙酸乙酯提
取物(LAT)抗炎镇痛药理作用进行了研究。
1　材料与方法
1.1　试验药物　葎草采自重庆虎溪 ,由本校中药教研室鉴定。
取 5kg药材用 95%的乙醇浸泡提取 3次 , 提取液经回收乙醇后
干燥得乙醇总提取物 748g。取 150g葎草醇提物 , 依照极性差
异 , 采用系统分离法 ,分为石油醚部位 、乙酸乙酯部位 、正丁醇部
位和水溶性部位。将乙酸乙酯部位回收有机试剂即得 LAT28.
5g,用时将提取物以 1%吐温-80溶液溶解配制药液。布洛芬片
(哈药集团制药六厂), 盐酸哌替啶注射液(青海制药厂有限公
司)。
1.2　动物　清洁级昆明种小鼠 210只 , 体重 18 ～ 22g, 雌雄各
半;清洁级 SD大鼠 100只 ,雄性 ,体重 150-180g,由重庆医科大
学实验动物中心提供(生产许可证号:SCXK(渝)2007-0001)。
1.3　方法
1.3.1　昆明种小鼠醋酸扭体实验　昆明种小鼠 50只随机分
为 5组 , 即空白对照组 , 布洛芬组 , LAT高 、中 、低剂量组(相当
于生药量 4.0、2.0、1.0g/kg)。按组别连续灌胃 7天 , 空白组给
予等量的 0.5%羧甲基纤维素钠溶液 , 末次给药 30min后腹腔
注射体积分数 0.7%的冰醋酸 0.01ml/g, 观察记录 10分钟内小
鼠的扭体次数 ,伸展后肢 、腹部内凹和臀抬高 ,计算镇痛率。
1.3.2　昆明种小鼠热板法实验　取雌性昆明种小鼠 , 逐只放
于(55±0.2)℃热板仪上 , 记录其出现舔后足反应所需时间 , 即
疼痛反应潜伏期作为小鼠的痛阈值 ,挑选痛阈值在 5 ～ 30s内的
小鼠 50只。即空白对照组 , 布洛芬组 , LAT高 、中 、低剂量组(相
当于生药量 4.0、2.0、1.0g/kg),而后逐只置于热板仪上测定给
31中药药理与临床 2010;26(3)
＊ 基金项目:重庆市产学研合作技术创新项目(104);重庆医科大学校级科研课题(XBYB2008088)　　　　＊＊通讯作者
药前的痛阈值两次 , 取其平均值作为给药前的痛阈值。按组别
分别连续灌胃 7天 , 空白组灌胃等量的 0.5%羧甲基纤维素钠
溶液 , 于末次给药 30min后测定并记录小鼠的痛阈值 ,并计算痛
阈提高百分率。
1.3.3　二甲苯致小鼠耳肿胀实验　取昆明种小鼠 50只 ,雌雄
各半 , 随机分为 5组 ,即空白对照组 , 布洛芬组 , LAT高 、中 、低剂
量组(相当于生药量 4.0、2.0、1.0g/kg)。按组别分别连续灌胃
7天 ,空白组灌胃等量的 0.5%羧甲基纤维素钠溶液 , 于末次给
药 30min后 , 用移液枪将 100%二甲苯滴涂到小鼠的左耳廓
(20μl), 涂二甲苯 1h后引颈处死小鼠 , 剪下左右耳廓 ,以直径 8
㎜的打孔器分别在两耳的相同部位打孔 , 用分析天平称重 , 计
算各组动物耳肿胀度和抑制率。
1.3.4　鸡蛋清致大鼠足肿胀实验　取 SD雄性大鼠 50只 ,随
机分为 5组 , 即空白对照组 , 布洛芬组 , LAT高 、中 、低剂量组
(相当于生药量分别为 2.8、 1.4、 0.7g/kg)。按组别分别连续灌
胃 7天 , 空白组灌胃等量的 0.5%羧甲基纤维素钠溶液。末次
给药前用足容积测定仪测定大鼠右后足的排水量 , 然后各组灌
胃给药后 , 于每鼠右后足跖皮下注射 10%鸡蛋清液 0.1ml/只 ,
并于注射后 1、2、3、4、 5、6h测右后足跖的排水量 , 差值为肿胀体
积 , 计算肿胀率 ,观察到达高峰时间和消退时间 , 比较给药组和
对照组的差异情况。
1.3.5　 LAT对棉球诱导大鼠肉芽组织增生的影响　雄性大鼠
30只 , 随机分为 5组。乙醚浅麻醉 ,在无菌条件下将棉球(每个
重 30mg±0.5mg, 高压灭菌后 , 每个棉球加氨苄西林 1mg/0.
1ml, 50℃烘干)分别植入大鼠两侧腹股沟皮下 , 手术当天开始
给药 , 连续灌胃 7天。第 8天颈椎脱臼致死 ,取出棉球 , 置 60℃
烘箱放置 12h,称重 , 减去原棉球重量 , 即为肉芽肿净重。
1.3.6　 LAT对大鼠足爪炎性渗出物中 PGE2的影响　鸡蛋清
致大鼠足肿胀法实验中 , 在测定大鼠的足肿胀度后将大鼠处
死 , 于踝关节处剪下致炎足 ,剥皮 ,剪碎放入 2ml生理盐水浸泡
24h,离心 , 取上清液 0.1ml, 加 0.5mol/LKOH-甲醇溶液 2ml,在
50℃下异构化 20min, 用甲醇稀释至 4ml, 于 278nm处测定 OD
值 , 以每克炎症组织相当的 OD值(A/g)表示 PGE2的含量。
1.3.7　LAT对小鼠福尔马林镇痛实验的影响　小鼠 60只 ,雌
雄各半 , 随机分为 6组 ,每组 10只 , 即空白对照组 , 布洛芬组 ,
LAT高 、中 、低剂量组(相当于生药量 4.0、2.0、1.0g/kg)和哌替
啶组。前 5组给药同小鼠醋酸扭体实验 , 第 6组腹腔注射哌替
啶(1.5mg/kg)。各组给药后 1h,于小鼠左后肢足跖部皮下注射
2.5%福尔马林溶液 10μl, 并计时 , 观察记录注射后 0 ～ 10min
(Ⅰ相)和 20 ～ 30min(Ⅱ相)内小鼠疼痛反应的累计时间 , 进行
评分。评分方法:舔 、咬或抖足 3分 ,提足 2分 , 跛行 、不动时足
撑地 1分 , 走动自如 0分。分别计算各组小鼠Ⅰ 相和Ⅱ相的累
积分值 ,累积分值 =(0t1 +1t2 +2t3+3t4)/(t1+t2 +t3+t4)
[ t1、t2、t3、t4分别为 0、1、2、3分的持续时间 ] 。
2　结果
2.1　 LAT对醋酸致小鼠扭体反应的影响　与空白对照组相
比 ,布洛芬组和 LAT各剂量组均能明显的抑制醋酸引起的小鼠
扭体反应 , 并且 LAT抑制作用呈现一定的量效关系 , 提示 LAT
对外周化学性刺激引起的疼痛具有明显的镇痛作用 , 结果见表
1。
　　表 1　 LAT对醋酸致小鼠扭体反应的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg) 扭体反应次数　　
空白对照组 10 31.2±4.10
LAT高剂量组 10 4.0 11.1±2.85＊＊
LAT中剂量组 10 2.0 16.8±3.65＊＊
LAT低剂量组 10 1.0 25.8±4.21＊
布洛芬组 10 0.1 9.1±2.02＊＊
　　与空白对照组比较 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01(下同)
2.2　 LAT对小鼠热板法实验的影响　 与用药前及空白组比
较 , LAT高剂量可略微延长小鼠热板反应的潜伏期 , 但中剂量组
和低剂量组作用不明显 ,结果见表 2。
　　表 2　 LAT对小鼠热板法实验的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
舔足反应潜伏期(s)
给药前 给药后 1h　　
痛阈值提高率
(%)
空白对照组 10 15.3±3.61 15.4±4.53
LAT高剂量组 10 4.0 15.2±2.56 16.7±3.61＊ 11.12
LAT中剂量组 10 2.0 15.4±2.94 15.4±2.34 6.33
LAT低剂量组 10 1.0 14.9±3.36 15.0±3.09 2.38
布洛芬组 10 0.1 15.2±2.56 24.9±4.44＊＊ 64.74
2.3　 LAT对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响　 结果表明 LAT
各剂量组对二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用 ,
与空白对照组相比差异性极显著(P<0.01),且 LAT高剂量组
与布洛芬组作用相近 ,结果见表 3。
　　表 3　 LAT对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
耳肿胀值　
(mg)　
肿胀抑制率
(%)
空白对照组 10 4.53±1.94
LAT高剂量组 10 4.0 2.80±0.41＊＊ 38.17
LAT中剂量组 10 2.0 3.38±0.49＊＊ 25.23
LAT低剂量组 10 1.0 4.19±1.68＊ 7.36
布洛芬组 10 0.1 2.39±0.32＊＊ 47.26
2.4　 LAT对鸡蛋清致大鼠足肿胀的影响　 LAT各剂量组均
能明显的抑制鸡蛋清诱导的大鼠足肿胀 , 并呈现一定的量效关
系 ,提示 LAT有较好的抗炎作用 , 结果见表 4。
　　表 4　 LAT对鸡蛋清致大鼠足肿胀的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
肿胀率(%)
1h　　 2h　　 3h　　 4h　　 5h　　　 6h　　　
空白对照组 10 42.54±12.75 55.20±13.09 58.79±8.81 52.82±3.15 50.75±15.19 46.16±9.34
LAT高剂量组 10 2.8 14.99±2.36 ＊＊ 22.77±5.85＊＊ 37.01±3.02＊＊ 34.03±6.60＊＊ 32.35±10.12＊＊ 33.93±2.45＊＊
LAT中剂量组 10 1.4 18.73±5.01＊＊ 26.25±2.61＊＊ 49.36±7.78＊＊ 48.05±5.99＊ 43.03±13.24＊＊ 38.64±11.51＊＊
LAT低剂量组 10 0.7 38.57±12.15＊ 47.08±9.85＊ 52.69±10.81＊ 50.18±13.63 46.25±5.40＊ 41.63±8.20＊
布洛芬组 10 0.08 11.49±3.01＊＊ 16.45±6.07＊＊ 32.77±3.13＊＊ 36.85±5.14＊＊ 38.57±11.05＊＊ 36.14±4.13＊＊
2.5　LAT对棉球诱导大鼠肉芽组织增生的影响　由表 5可见 , LAT能显著性抑制棉球诱导大鼠肉芽组织的增生 , 且呈一定量
32 中药药理与临床 2010;26(3)
效关系 , 结果见表 5。
　　表 5　 LAT对棉球诱导大鼠肉芽组织增生的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
肉芽肿重量　
(mg/100g体重)　
抑制率
(%)
空白对照组 10 25.94±2.56
LAT高剂量组 10 2.8 17.67±2.13＊＊ 31.88
LAT中剂量组 10 1.4 20.41±2.32＊＊ 21.32
LAT低剂量组 10 0.7 22.35±1.95＊ 13.84
布洛芬组 10 0.08 15.28±1.87＊＊ 41.09
2.6　 LAT对大鼠足爪炎性渗出物中 PGE2含量的影响　LAT
各剂量组均可显著降低大鼠足爪炎性渗出物中 PGE2的含量 , 提
示 LAT可能具有抑制炎性介质 PGE2的合成或释放作用 , 从而
表现抗炎活性 , 结果见表 6。
　　表 6　 LAT对大鼠足爪炎性渗出物中 PGE2 含量的影响( x±s, n=
10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
PGE2　　
(A/g足重)　　
抑制率
(%)
空白对照组 10 0.2930±0.0558
LAT高剂量组 10 2.8 0.1740±0.0259＊＊ 40.61
LAT中剂量组 10 1.4 0.2060±0.0375＊＊ 29.69
LAT低剂量组 10 0.7 0.2570±0.0334＊ 12.29
布洛芬组 10 0.08 0.1520±0.0286＊＊ 48.12
2.7 　LAT对小鼠福尔马林镇痛实验的影响　 LAT各剂量组对
Ⅰ相无明显影响 , 但可以显著抑制Ⅱ疼痛反应 ,提示此药对由外
周性刺激引起的疼痛反应有较好的镇痛作用 ,结果见表 7。
　　表 7　 LAT对小鼠福尔马林镇痛实验的影响( x±s, n=10)
组别 鼠数(只)
剂量
(g/kg)
疼痛积分
Ⅰ相 Ⅱ相
空白对照组 10 1.54±0.16 1.56±0.17
LAT高剂量组 10 4.0 1.51±0.11 1.36±0.12＊＊
LAT中剂量组 10 2.0 1.52±0.15 1.41±0.10＊
LAT低剂量组 10 1.0 1.54±0.13 1.53±0.14
布洛芬组 10 0.1 1.45±0.09 1.26±0.13＊＊
哌替啶组 10 0.015 1.28±0.06 1.10±0.08＊＊
3　讨论
　　本实验证明其乙酸乙酯提取物具有明显的抗炎镇痛药理作
用 ,已知葎草乙酸乙酯提取物中含有多种黄酮类化合物 ,如木犀
草素 、牡荆素等 , 前期研究发现四川和重庆部分地区 10月份产
葎草中总黄酮高达 2.4%, 其抗炎镇痛药理作用可能与黄酮类化
合物有关。热板法和醋酸扭体实验是两种用于镇痛药初筛的常
用方法。热板法比较适合评价高位中枢参与的镇痛作用 , 而醋
酸扭体法比较适合外周镇痛作用机制药物的筛选。实验结果表
明乙酸乙酯提取物具有一定的外周性镇痛活性 , 而中枢性镇痛
活性不明显 。小鼠福尔马林致痛模型是国际公认的用于筛选弱
镇痛药物的动物模型 ,其疼痛反应分为两个时相 , 分别代表不同
的疼痛类型 ,第一时相为直接疼痛神经末梢所致 , 第二时相为外
周刺激介质产生引起的。本实验结果表明 , 乙酸乙酯提取物在
第二时相可以显著降低小鼠的疼痛反应 , 而对第一时相的疼痛
反应无显著影响 ,表明乙酸乙酯提取物具有一定的外周性镇痛
活性 , 与热板法实验和醋酸扭体实验结果吻合 ,较好的阐明乙酸
乙酯提取物的镇痛作用机制。 PEG2是一种非常重要的炎性介
质之一 ,存在于炎性组织中 , 可与缓激肽 、白三烯等炎性介质协
同作用 , 引起血管扩张 , 加强组胺和缓激肽增加血管通透性的作
用 ,通过抑制 PEG2的合成 , 可以减轻炎症反应。本实验结果显
示 ,乙酸乙酯提取物抗炎作用可能与其能够降低炎性组织中的
PEG2含量有关。另外 PEG2也是一种重要的疼痛介质 , PEG2
的外周致痛作用早已明确 , 本实验结果表明乙酸乙酯提取物的
镇痛作用也可能与其能够抑制 PEG2的合成与释放有关。
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Studyontheanti-inflammatoryandanalgesicactivitiesofethylacetateextract
fromhumulusscandens(Lour.)Merr.
CaoWeiguo, ZhangDan, ZhangYibin, LiuSha
(TCMColegeofChongqingUniversityofMedicalSciences, Chongqing　401331)
　　Objective:Tostudyontheanti-inflammatoryandanalgesicactivitiesofethylacetateextractfromHumulusscandens(Lour.)Merr.and
itsunderlyingmechanism.Methods:Aceticacidwrithingmethodandhot-platemethodwereusedtostudytheanalgesicactivities.Auriclee-
demainducedbydimethylbenzene, cottonpelletgranulomaofthemiceandedemainfeetinducedbyeggwhiteswereappliedforanti-inflam-
matoryexperiments.TheunderlyingmechanismwasperformedbyformaldehydemethodanddeterminationonthecontentofPGE2 ininflam-
matorytissue.Result:TheethylacetateextractfromHumulusscandens(Lour.)Merr.inhibitedacid-inducedmousewrithingresponseand
enhancedthethresholdofpainvaluesignificantly.Theethylacetateextractinhibitedauricleedemainducedbydimethylbenzeneandedema
infeetinducedbyeggwhitessignificantly.Theethylacetateextractsignificantlyinhibitedthesizeofcotonpelletinducedgranulomaforma-
tion.TheethylacetateextracthadinhibitoryefectonⅡphasepaininformalininducingpain.TheextractcouldreducethecontentPGE
2
in
inflammatorytissue.Conclusion:TheethylacetateextractfromHumulusscandens(Lour.)Merr.showsanti-inflammatoryandanalgesicac-
tivities.Theextractshowedanalgesicactivitythroughinhibitionsubsequentanalgesicreaction.Theanti-inflammatoryactivitiesmayrelateto
itsinhibitoryeffectsonthecontentofPGE2 ininflammatorytissue.
Keywords　 Humulusscandens;anti-inflammatoryeffect;analgesia
33中药药理与临床 2010;26(3)