全 文 ：药学学报 A e t a P h a r m a e e u t i e a S i n i e a 19 8 9 ; 24 ( 5 ) : 3 5 3~ 3 56
女儿茶多糖N L C 一A 的分离纯化及化学结构 ’
焦 佩 玉 方 积 年二
(溯南医药工业研究所 ,长沙 4 1。。1幻 * * 中国科学院上海药物研究所 ,上海 2。。。3 1 )
提要 女儿茶为民间常用中草药 。 经水提取 , 去蛋白及小分子杂质得到女儿茶多馆( N L C 一 A )
粗制品 。 再经 C e l l e x D , s e p h a r o s e 6 B 和 s e p h a d e x G 一 1 0 0相继柱层析 , 得到均一组分N L c 一 A ,
分子量为 1 . 2 x 10 ` , N L C 一 A经全水解 , 甲基化反应 , 过碘酸盐氧化 , s m i ht 降解 , K l 一 I ,反应和 IR
证明其结构为以 a ( 1 , 4) 一 D一葡萄糖为主链 , 并在。一 6位有分枝的葡聚糖 。
类扭词 女儿茶 ; 女儿茶多糖 ,葡聚搪
女儿茶为鼠李科鼠李属植物异叶 鼠李 ( R h a m 。 。 5 h e t e ,叩 h y l l o s O l i v e ) ,生于低山丘陵多
岩的地方 。 民间用于清热 , 凉血 , 止血 , 月经不调和痢疾等 ` ” 。 关于它的组分国外还未报道 ,
国内曾有黄酮成分的报道 `” 。 本文将首先报道女儿茶中一个多糖组分 ( N L C 一 A ) 的分离纯化
及化学结构 。 它的药理作用将另外报道 。
千燥的女儿茶根茎经粉碎 , 乙醇回流 , 残渣用沸水提取 , 乙醇沉淀 , 去蛋白 , 透析 , 乙
醉沉淀 , 得到多糖混合物 、多糖混合物经 C le l xe D 柱层析 , 梯度展层 , 得到 A , B , C , D 四
个组分 。 A组分相继再行s e p h a r o s e 6 B及 s e p h a d e x G 一 1 0 0柱层析 , 得到 白色粉 末 N L e 一 A 。
N L C
一 A 经高速液相层析 , 结果为单一对称峰 。 证明其为均一多糖组分 。 它不 含氮也不含灰
分。 比旋度〔a 〕护+ 1 1 5 。 ( e 0 . 8 , H : 0 ) 。 该多糖能溶于水 , 不溶于有机溶剂 。 用 H P L C法测得
分子量 1 . 2 X i 0’ , N L C 一 A经全水解 , 水解产物经板层析及其衍生物的气相 层 析 `” 发现仅具
一个葡葡糖组分 , 确认该多糖为葡聚糖 。 红外光谱发现在 8 4 。。m 一 ’ 处有吸收 , 说明该多糖之
糖昔键为 a 型 , 与比旋度结果相符 。
N L C
一
A按改良的 H ak o m or i级法 “ ’进行甲基化反应 。 全 甲基化多糖用甲酸及三氟醋酸 ( T F
A )相继水解 , 水解物经还原 , 乙酞化 , 然后气相层析和气相一质谱联用分析 。 气 相层析的
滞留时间 ( t 二 )及质谱主要碎片 (m / z )与标准品或文献记载 “ ’ 比较 : 发现为 2 , 3 , 6 , 一 0 一三甲
基 一葡萄糖 , 2 , 3 , 4 , 6一 O 一四甲基 一葡萄糖 , 2 , 3 , 一 O 一二甲基 一葡萄糖 , 其摩尔比为 12 : :1
1 , 详见表 1 。
T a b 1
.
G C a n d G C一M S a n a l y , 1. 0 ! t h e a l d i t o l a e e t a t e ,
f r o m t h e 口 e t h y l a t e d N L C一 A
P a r t i a l l y m e t h y l a t e d s u g a r t : 1 M
o l a r r a r i o M S ( m /
z )
2
,
3
一
6
一
0
一
M 灿一G l c
2
,
3
,
4
,
6
一
0
一
M e一 G lc
2
,
3
一
0
一
M e :
一
G le
4 3
,
4 5
,
8 7
一
99
,
10 1
,
1 13
,
1 1 7
一
2 3 3
4 3
,
45
,
7 1
,
8 7
, 1 0 1
,
1 1 7
,
12 9
,
1 4 5
,
1 6 1
,
2 0 5
4 3
,
1 0 1
,
1 17
,
1 2 7
,
2 61
r : : R e t e n t i o n t im e o f a l d i t o l a e e t a t e r e l a t iv e t o l
,
5
一
d i
一
0
一 a e e ty l一 2 一 3 , 4 , 6一 t e t r a 一 0一 m e t h y l一D 一 g l u e i t o l o n
3% O V
一
2 2 5 C h r o m Q a t 1 7 0
o
C
本文于 1 98 8年 3月 2 日收到 。
本文曾在 19 8 7年第三届全国夭然有机化学学未会上报告。
药学学报 A e t a P h a rm a e e ut ie a S in ie a 198 9 ; 2 4 (5 ) : 35 3、 3 5 6
NL C
一 A 溶解于。 .0 1M过碘酸钠中避光于 5 1“ C 进行氧化反应 “ ’ , 发现氧 化 9天完成 , 其
过碘酸盐的消耗以及甲酸形成的最终值分别为单位己糖的 1 . 04 和 。 . 08 m ol , 与理论值 1 . 07 和
0
.
07 m ol 符合 , 肯定甲基化反应各残基之摩尔比无误 。
氧化完全的 N L C 一 A 经 s m iht 降解 , 降解产物及其衍生物经薄板层析和气相层析 , 证明其
降解产物为丙三醇和赤鲜醇 , 其摩尔比为 1 : 1 2 。丙三醇为非还原末端葡萄糖残基的降解产物 ,
而赤醉醇为 1 , 4和 1 , 4 , 6葡萄糖残基的降解产物 , 其降解产 物与甲基化结果一致 , 摩尔比
与理论值 1 : 13 也接近 。
为了肯定 N L C 一 A葡聚糖的分枝及侧链的长度 。 N L C 一 A与 K l 一 1 2反应 ` 7 ’ , 测定紫外吸收 ,
发现反应产物在 56 4 . 8 n m处具最大吸收 , 说明该葡聚糖具较少分枝和较短的侧链 。
综上所述 , 可以肯定N L C 一 A的化学结构为以小 D 一 ( 1 , 4) 葡萄糖残基为主链 , 并在 O 一 6
位有分枝的葡聚糖 , 其可能结构如图 1所示 。
于“ 一哪 10 4 -卜 ,一哈
(以一刀蹄份一 G I C ) _甲 己
. 4
= o
,
1 o r
F ig 1
.
P o s s i b l e s t r u e t u r e o f N L C
一
A
根据 N L c 一 A与 K l一 I : 反应的结果 , 说明它的侧链很短 , 推测其 a 值很可能为 。 , a之最大
值不会超过 2 。
具有 a ( 1 , 4 ) 为主链的葡聚糖 ,至今已发现一些 `? , . , ” `。’ 。 但它们的理化性质及分枝均与
N L C
一
A 不同 , 所以可以认为 N L C 一 A是新的葡聚糖 。
实 验 部 分
红外光谱仪用 P e r k i n 一 E lm e r 59 9 B 型仪器 。 ’ 3C N M R 用 B r u k e r A C 一 1 0 0 型仪器 。 G C 用
s h i m a d z u G C
一 g A 型仪器 。旋光仪用 J A s C o D ip 一 1 8 1型仪器 。 H p L C仪用 B i o 一 R a d 1 3 3 0型仪器 。
示差仪用 s h o d e x R l s E 一 5 2型仪器 ,标准多糖为 T系 #IJ 葡聚糖 ( p h a r m a c i a , U p p s a l a , s w e d e n )
其他试剂均为分析级 , 减压浓缩温度低于 4 。“ C 。
分离纯化
干燥的女儿茶根茎用乙醇回流 Z d , 干 燥后用沸水提取三次 , 提取液经减压浓缩至一定
体积 , 加三倍量乙醇沉淀 , 沉淀用水溶解 , 按 s a v a g法 `” ,去蛋白五次 , 去蛋白之溶液对自来
水透析 3 d , 减压浓缩 , 加三倍量乙醇沉淀 , 沉淀经离心 , 丙酮和乙醚相继洗涤 , 真空干燥
得褐色粉末的粗制品 (得率为 1 . 3% ) 。 粗制品溶于水中 , 进行以载体为 C el ex D 的柱层析 ,
0~ Zm ol / L N a C I水溶液梯度洗脱 ,得到四个具旋光活性部分 A , B , C和 D 。 本文报道第一 部分
A 的工作 。 A 部分再相继经 S e p h a r o s e 6 B及 s e p h a d e x G 一 1 0 0柱层析 , 示差折射检测 , 得到均
一组分 , 经透析 , 冷冻干燥获得 白色粉末 N L C 一 A 。
纯度与分子量测定
N L C
一
A溶于 p H 6 . 。的磷酸缓冲液中 , 浓度为 1% , 进行高 效液相层析 “ 2 , 。 柱为 iB 。 -
G el T SK
一
40
, 展开剂为磷酸缓冲液 , 进样量 20 川 , 流速 0 . 4 m l/ m in 得到单一对称峰位 。 然后
按上述相同条件对各种已知分子量的标准多搪D联 t at n T一 2 00 , T 一矽 0 , T 一 1 1 0 , T 一70 , T -
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4。 , T 一 10 和葡萄糖进行高效液相层析 , 给出标堆曲线 。 然后再由标准曲线求得 N L C 一 A之分
子量 。
糖组分分析
N L C
一
A ( 1 0m g )经 2 m o l / L三氟乙酸 ( T F A )封管 1 2 0 o C水解 l h , 未作用之 T F A 经 蒸馏
去尽 。 中性水解液进行硅胶 ` 。 F : 。 `薄板层析 , 溶剂系统C H C 13一 M e 0 H一 H Z o ( 6 4 : 4 0 : s ) 。 二
苯基氨基磷酸试剂显色 。 另一部分中性水解液经还原 , 乙酷化 , 气相层析测定 。
甲基化反应
按改良的 H a k o m o r i法 甲基化 “ ’ 。 全甲基化多糖用 9 0% 甲酸水解 i 0 0 0 C 6 h , 再经 2 m o l / L
三氟乙酸 1 0 ℃水解 1 h0 , 还原 , 乙酷化 , 气相层析和气相一质谱联用分析 .
过碘酸盐级化反应
N L C
一
A ( 1 5 m g )溶于 0 . 0 1m o l / L过碘酸钠 ( 2 0m l )中 , 避光于 1 5 o C恒温氧化 , 间隔不同时
间用分光光度法 `” ’测定过碘酸钠消耗 , 以及用。 . o 05 m ol / L K O H滴定甲酸的形成 。
S m i t n 降解反应
上述氧化完全之N L C 一 A 中加人乙二醇一滴 , 充分混合后 , 对蒸馏水透析 24 h , 透析液用
N a B H
`
( 1 0m g )于室温还原 1 2 h , H A e调 p H至 5 . 0 , 再透析 2 4 h , 减压浓缩至干 , 加人 2 m o l / L
T F A ( 5 m l)
, 水解 10 。℃ 1h2 , 蒸馏去尽多余之 T F A 后 , 分为二部分 , 一部分进 行板层析 ,
其条件与糖组分分析相同 。 另一部分进行乙酞化 , 气相层析分析 。
碘反应
在浓度为 1 m g /m l之N L C 一 A ( i m l )中 ,加人碘试剂 (含 0 . 0 2% 1 2的 0 . 2% K l溶液 ) o . 6m l ,
振摇后 , 用紫外光谱吸收仪测定其吸收最大值。
致谢 本所黄秀兰鉴定原植物。
参 考 文 献
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S T U D I E S O N I S O L A T I O N
, P U R I F I C A T I O N A N D S T R U C T U R E
O F N L C一 A O F R H A M N U万 月万了,石 R O P H YL L U万
P Y Ji a o a n d JN F a n g
.
( H。 。 a , I o s t` t o t . o f p h a , 。 a e e o t玄e a l l , d。 。 ` , y , 叮h a , g e瓜a 4 10 0 1 2 , . s h a o g h a ` I o s t` t o t已 o f 万 a t心, `。 万 . d `c 。
A e a d刃m滋a 刀落几感e a , 召入a ” g h a 云2 0 0 0 3 1 )
A B S T R A C T
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e o s y l s i d e e h a i n s a t o
一 6 o f t h e g l u e o s y l r e s id u e s o f t h e m a i n e h a i n
.
K e y w o r d s R h a m九 “ 5 h e t e犷叩 h y l l林 5 O l i v 。 : P o l y s a e e h a r i d e ; G l u e a n .