全 文 ：泰山女儿茶总黄酮和多糖的含量测定
张恭孝 , 孟宪峰
(泰山医学院化学与化学工程学院 , 山东泰安　 271016)
摘要:目的 建立泰山女儿茶中总黄酮和多糖的含量测定方法。方法 以分光光度法测定总黄酮含量 , 用苯酚 -
硫酸法测定多糖含量。结果 总黄酮含量测定最佳检测波长 510 nm, 芦丁质量浓度在 8 ～ 48μ· mL-1范围内与
吸光度呈良好线性关系 (r=0.9986), 平均回收率 99.03% (RSD=1.72%, n=5);多糖含量测定的检测波
长 490nm, 葡萄糖质量浓度在 5 ～ 50 μ· mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系 (r=0.9964), 平均回收率 99.
26% (RSD=1.57%, n=4)。结论 本方法简便易行 , 结果稳定可靠 , 可用于泰山女儿茶的质量控制。
关键词:泰山女儿茶;总黄酮;多糖;含量测定
中图分类号:R284.1;R927.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-2324 (2010)01-0057-03
收稿日期:2009-04-02
作者简介:张恭孝 (1967-), 男 , 副教授 , 硕士 , 主要从事中药活性成分提取分离及其化学修饰合成研究工作。
DETERMINATIONOFTOTALFLAVONOIDSANDPOLYSACCHARIDES
INNVERTEAFROMTAISHAN
ZHANGGong-xiao, MENGXian-feng
(DepartmentofChemistryandChemicalEngineering, TaishanMedicalColege, Taian271016, China)
Abstract:ObjectivetoestablishthemethodsfordeterminationoftotalflavonoidsandpolysaccharidesinNver
TeafromTaishan.Methodsthecontentofthetotalflavonoidswasdeterminedbyspectrophotometry, andthepol-
ysaccharidecontentwasmeasuredwiththephenol-sulphuricacidmethod.Resultstheoptimaldetectivewave-
lengthwas510nmforthetotalflavonoids, andsatisfactroylinearrelationshipwiththeabsorbabilitywasachieved
whenthemasconcentrationofrutinwaswithinarangeof8 ～ 48u·mL-1 (r=0.9986), theaveragerecover-
yratewas99.03% (RSD=1.72%, n=5).Theoptimaldetectivewavelengthwas490 nmforthepolysac-
charides, therewasgoodlinearrelationshipbetweentheabsorbabilityandthecontentofglucoseinarangeof5
～ 50u·mL-1 (r=0.9964)withanaveragerecoveryof99.26% (RSD=1.57, n=4).Conclusionthis
methodissensitive, simpleandaccurate, anditcanbeusedforthequalitycontrolofNverTeafromTaishan.
Keywords:NverTeafromTaishan;totalflavonoids;polysaccharides;contentdetermination
日常饮用茶是由山茶科山茶属茶亚属植物茶 [ Cameliasinensis(L.)O.Ktze.] 的嫩叶加工而成 ,
含有生物碱 、茶多酚 、茶多糖 、 黄酮类等活性成分以及维生素 、 矿物质 、 蛋白质和氨基酸类等营养成
分 , 具有兴奋提神 、 助消化 、 抗疲劳等作用 , 经常饮茶对心脑血管疾病 、 恶性肿瘤 、老年性痴呆等具有
良好的预防作用 [ 1, 2] 。泰山女儿茶因光照充足 , 生长周期长 , 叶质韧厚耐冲泡 , 口感清香滑润 , 深受人
们喜爱 [ 3] 。本实验在参考文献方法的基础上 , 运用超声技术从泰山女儿茶中连续提取总黄酮及多糖并
测定其含量 , 为泰山女儿茶的质量控制提供科学依据。
1　实验材料
1.1　药品与试剂
泰山女儿茶由位于泰山东麓的泰山女儿茶商贸有限公司茶园提供 , 粉碎成粗粉备用;芦丁对照品 ,
山东农业大学学报 (自然科学版), 2010, 41 (1):57-59　JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScience)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
中国药品生物制品检定所 , 批号 0080 ～ 200306;石油醚 、 乙醇 、 丙酮 、氯仿 、正丁醇 、 浓硫酸 、苯酚 、
葡萄糖等均为国产分析纯 。
1.2　仪器
UV-2401PC型紫外可见分光光度计 , 日本岛津;RE-5205型旋转蒸发器 , 上海亚荣生化仪器厂;
CJD-1006型超声波仪 , 深圳超晋达超声工程设备公司;JA1203A型电子分析天平 , 上海精密仪器有限
公司。
2　方法与结果
2.1　供试品溶液制备
精密称取经 60 ℃干燥 4 h的泰山女儿茶粉 2 g, 4份 , 分别置索氏提取器中 , 用石油醚 (60 ℃ ～ 90
℃)水浴回流脱脂 2次 , 每次 2 h。残渣挥干溶剂后 , 置 100mL锥形瓶中 , 加 80%乙醇 50 mL浸泡 12
h, 超声提取 2次 , 每次 30 min。滤过 , 用少量 80%乙醇多次洗涤滤渣 , 并入提取液 , 转入 100 mL容
量瓶中 , 用 80%乙醇定容 , 即得 4份测总黄酮的泰山女儿茶供试品液Ⅰ , 置冰箱中备用 。
将提取黄酮后的女儿茶残渣分别置 250 mL锥形瓶中 , 加蒸馏水 150 mL放置 2 h, 超声提取 2次 ,
每次 30 min。合并两次提取液 , 滤过 , 用蒸馏水洗涤锥形瓶和滤渣 , 然后定容于 250 mL容量瓶中 , 即
得 4份测多糖的泰山女儿茶供试品液 Ⅱ , 置冰箱中备用 。
2.2　总黄酮含量测定 [ 4, 5]
2.2.1　标准曲线制备　精密称取 105℃干燥至恒重的芦丁对照品 10 mg, 加 80%乙醇溶解 , 定容至
50 mL量瓶中 , 摇匀 , 制成 0.2mg·mL-1的对照品溶液。分别取该溶液 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0
mL于 25 mL量瓶中 , 加 5%亚硝酸钠 1.0 mL, 放置 6min后 , 加 10%硝酸铝 1.0mL, 放置 6min, 再加
4%氢氧化钠 4mL, 加 80%乙醇至刻度 , 摇匀 , 放置 15min, 于 200 ～ 700nm波长范围扫描 , 在 510nm
处均有最大吸收 。用不含芦丁的空白管对照调零。
以 510nm处吸光度值 (A510)为横坐标 , 以样品浓度 (C, μ· mL-1)为纵坐标 , 得回归方程 C=
80.096A510 -0.247, r=0.9986。结果表明 , 芦丁质量浓度在 8 ～ 48μ· mL-1范围内呈良好线性关系 。
2.2.2精密度试验　精密吸取对照品溶液 2.0mL, 5份 , 按 2.2.1项方法测定 , RSD=1.97% (n
=5)。
2.2.3稳定性试验　取同一供试品液显色反应后 , 在 15, 30, 60, 90, 120 min时测定 A510。结果表
明 , 总黄酮与铝离子形成的红色络合物在 2h内稳定 , RSD=1.78% (n=5)。
2.2.4回收率试验　取 2.0 mL已知总黄酮含量的供试品液Ⅰ , 5份 , 分别加入 25mL容量瓶中 , 再
加入 0.2 mg· mL-1的对照品溶液 1.0mL, 按 2.2.1项方法测定 , 根据对照品检出量 , 计算回收率 。平
均回收率为 99.03%, RSD=1.72% (n=5)。
2.2.5样品含量测定和重现性试验 　 4份供试品液 Ⅰ各精密吸取 2.0 mL, 置 25 mL容量瓶中 , 按 2.
2.1项的方法显色测定 , 每份供试品液重复操作 2次 , 取平均 A510。通过标准曲线 , 计算样品总黄酮含
量 。
通过 4份供试品液 Ⅰ的测定 , 泰山女儿茶样品中总黄酮含量的计算结果平均为 0.635%, RSD=
1.71% (n=4)。见表 1。
2.3　多糖含量测定 [ 5, 6]
2.3.1　标准曲线制备　精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品 100mg, 加适量水溶解 , 转移至
100μL容量瓶中 , 加水至刻度 , 摇匀 , 配成 1 mg· mL-1对照品溶液 。分别吸取对照品溶液 10, 20,
40 , 60, 80, 100μL置于大试管中 , 各补加蒸馏水至 2.0mL, 葡萄糖浓度分别为 5, 10, 20, 30, 40,
50 μ· mL-1。然后各加入 5%苯酚溶液 1mL, 缓慢沿壁加浓硫酸 5 mL, 混匀 , 放置 5 min后 , 再沸水
浴加热 15min, 流水冷却至室温 , 进行全波长扫描 , 在 490 nm处均有最大吸收 。以蒸馏水代替葡萄糖
溶液作空白对照 。
以浓度 (C, μ·mL-1)为纵坐标 , 490nm处吸光度 (A490)为横坐标 , 得回归方程:C=3.309+
71.453A490 , r=0.9964。结果表明 , 葡萄糖质量浓度在 5 ～ 50μ· mL-1范围内与吸光度呈良好线性关
系 。
·58· 山东农业大学学报 (自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 41卷
2.3.2　精密度试验　精密吸取葡萄糖对照品溶液 50mL, 5份 , 按 2.3.1项方法测定 A490 , RSD=
1.25% (n=5)。
2.3.3　稳定性试验　将供试品溶液完成显色后 , 每隔 0.5h测 A490 1次 , 连测 5次 。结果表明 2h内
稳定性良好 , RSD=1.27% (n=5)。
2.3.4　回收率试验　取已知多糖含量的供试品液 Ⅱ 50 μL, 4份 , 分别加入葡萄糖对照品溶液 10、
20、 40、 60 μL, 按 2.3.1方法测定 A490 , 根据对照品检出量 , 计算回收率。平均回收率为 99.12%,
RSD=2.19% (n=4)。
2.3.5　换算因子测定　泰山女儿茶粗粉经脱脂 、醇提后 , 用水提醇沉法提取粗多糖 , 再经去蛋白和
水 -乙醇重沉纯化 3次得精制女儿茶多糖。精密称取干燥至恒重的精制女儿茶多糖 20 mg, 置 100 mL
容量瓶中加蒸馏水 , 定容至刻度 , 得 2.0μ·mL-1多糖溶液。精密吸取多糖溶液 0.2 mL, 3份 , 按标准
曲线制备方法测定 A490。
结果 3份多糖溶液平均 A490为 0.149, 通过标准曲线计算多糖溶液中折合葡萄糖浓度 (μ· mL-1)。
按下式计算换算因子 (F), F=W/CD。其中 W为多糖质量 (mg), D为稀释因素 。测得 F=1.4331。
2.3.6　样品含量测定和重现性试验　 4份供试品液 Ⅱ各精密吸取 100mL, 按 2.3.1项方法测定 。每
份供试品液重复操作 2次 , 取平均 A490 , 通过标准曲线计算供试品液 Ⅱ中折合葡萄糖浓度 (C, μ·
mL-1)。样品多糖含量%=CDF/W×100。其中 D为稀释因素 , F为换算因子 , W为样品质量 (mg)。
同一样品的 4份多糖含量测定结果平均为 4.38%, RSD=3.72% (n=4), 表明本方法重现性良
好 。见表。
表　样品含量测定结果 (n=4)
Table　Contentsofthetotalflavonoidsandpolysaccharides(n=4)
项目 Items 1 2 3 4 平均值 Averagevalve% RSD/%
总黄酮
Totalflavonoids 0.621 0.638 0.647 0.635 0.635 1.71
多糖
Polysaccharides 4.13 4.56 4.37 4.46 4.38 3.72
3　讨论
本实验在传统的系统溶剂提取的基础上 , 施加超声波处理 , 利用超声波的空化作用 、机械作用和热
效应加速细胞壁的破坏 , 促进胞内成分的溶出 , 有利于提高收率 , 缩短提取时间 [ 6, 7] 。多糖含量测定方
法较多 , 本实验采用苯酚 -硫酸法测其含量 , 精密度 、 稳定性 、 回收率和重现性试验结果表明 , 本法简
便可靠 、重现性好 、 显色稳定 。茶多糖含量随茶叶品种 、 老嫩程度 、原产地的不同而不同 [ 2] 。泰山女
儿茶属绿茶范畴 [ 3] , 本法测定其多糖含量较高 , 可能与泰山女儿茶光照充足 , 生长周期长有关 。以芦
丁为对照品 , 以硝酸铝 、 亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂 , 利用分光光度法测定泰山女儿茶中总黄酮含
量 , 具有简便易行及结果稳定可靠等优点 , 可用于泰山女儿茶的质量控制 。超声波破碎过程是一个物理
过程 , 无需加热 , 被浸提的活性物质在一定时间内保持不变 , 该法对于某些热敏物质的提取最为合适 。
因此 , 本实验采用超声法提取黄酮和多糖 , 可避免因结构改变而使后续的结构分析和活性研究产生错误
结论 , 但超声提取泰山女儿茶中黄酮和多糖的最优化条件及其结构分析有待进一步研究 。
参考文献
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·59·第 1期　　　　　　　　　　　　　张恭孝等:泰山女儿茶总黄酮和多糖的含量测定