全 文 ：收稿日期:2014 － 02 － 21
基金项目:贵州省省长基金项目( 编号:黔省专合字［2011］61 号) ;贵州
省中药现代化项目( 编号:黔科合中药字［2011］5033 号)。
作者简介:魏升华(1965 －) ，副教授，研究方向: 中药资源研究;E-mail:
weishenghua6512@ 126． com。
通讯作者:徐文芬(1964 －) ，教授，研究方向:中药资源及中药质量控制
研究;E-mail:wenfenxu@ 126． com。
贵州苗药雪人参不同种质资源药材的品质评价研究
魏升华1， 孙庆文1， 黄仕清1， 徐文芬1， 徐益清1， 刘 莉2
(1．贵阳中医学院， 贵州 贵阳 550002; 2 贵阳德昌祥药业有限公司， 贵州 贵阳 550002)
Quality Evaluation of Guizhou Miao Medicine Indigofera stachyoides
from Different Germplasm Ｒesources
WEI Sheng-hua1，SUN Qing-wen1，HUANG Shi-qing1，XU Wen-fen1，
XU Yi-qing1，LIU Li2
摘要:通过对贵州苗药雪人参种质资源野外调查和采集，采用
高效液相色谱法，建立其药材活性成分表儿茶素的含量测定方
法，并依照《中国药典》2010 年版一部附录ⅩA 测定其 30%乙
醇浸出物，分析比较雪人参不同种质资源药材中表儿茶素和浸
出物含量差异，研究结果为该药材的野生驯化研究及规范化种
植的良种繁育提供部分前期实验基础，以促进现代中药农业的
可持续发展。
关键词: 苗药雪人参; 不同种质资源; 表儿茶素; 浸出物;
高效液相色谱法
中图分类号: S 567 文献标志码: A
文章编号: 1001 － 4705(2014)09-0066-05
种质资源是提高中药材质量的关键和源头，种质
的优劣对中药材的产量和质量有决定性的作用，是进
行中药材规范化基地建设的先决条件。贵州民族药材
生产发展过程中，由于对种质资源及选育技术等研究
的相对滞后所致，一些种植药材品种混杂，药材质量参
差不齐，产量不稳定，如贵州德昌祥制药有限公司生产
的芪胶补血颗粒等，为独具特色的贵州民族药，对人体
气血亏损引起的免疫能力低下，以及治疗肿瘤放化疗
后引起的白细胞减少症具有疗效，在省内外市场深受
好评，年产值均超过亿元，目前其主要原料药材雪人参
的野生资源已濒临枯竭，严重影响到了相关产业的健
康可持续发展，选育雪人参优良品种进行规范化种植
已迫在眉睫。
雪人参为贵州重要的苗族药物，是《贵州省中药
材、民族药材质量标准》(2003 年版) 收载品种，来源于
豆科木兰属植物茸毛木蓝 Indigofera stachyoides Lindl．
的干燥根，具有滋阴补虚、舒血舒筋功效，主要用于崩
漏、体虚久痢、肠风下血、溃疡不敛、跌打损伤、肝硬化、
疳积等，该标准目前仅以性状鉴别评价药材品质［1 ～ 3］。
查阅相关文献资料，雪人参根中分离得到的表茶儿茶
素类化合物为有效单体之一［4 ～ 6］。鉴于此，为了有效
评价雪人参不同种质资源药材的内在品质，本文参照
《中国药典》2010 年版一部金荞麦含量测定项及醇溶
性浸出物测定法［7］，采用高效液相色谱法，以表儿茶
素为对照品，建立雪人参不同种质资源药材中表儿茶
素的含量测定方法，测定分析雪人参不同种质资源药
材中表儿茶素和浸出物含量差异，通过综合评分法筛
选优良种源，为该药材野生驯化研究的良种选育及
GAP规范化种植奠定前期基础，以更好地促进贵州省
民族药及现代中药农业的可持续发展提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材 料
1． 1． 1 试药及供试样品
表儿茶素对照品( 批号:878 － 200 /02，供含量测定
用，中国药品生物制品检定所) ;乙腈、甲醇为色谱纯;
磷酸、乙醇等均为分析纯;实验用水为重蒸馏水。
所有实验药材样品均为贵阳中医学院魏升华老
师、孙庆文老师亲自到各产地采集，并准确鉴定为豆科
木兰属植物茸毛木蓝 Indigofera stachyoides Lindl． 的
根。鲜品采回后，过水洗净，切片，其中普安盘水镇采
集样品( 编号为PA 0120404 － 1 至 PA 0120404 － 6) 分
别采用晒干、40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃、120 ℃鼓风干
燥，其余样品晒干或者阴干，粉碎过三号筛，置干燥器
中备用。样品信息详见表 2。
1． 1． 2 仪 器
Agilent 1100 高效液相色谱仪( 美国安捷伦公司) ，
安捷伦液相色谱系统化学工作站;AG 135 电子分析天
平( 瑞士Mettler-Toledo公司) ;KQ-500DE型数控超
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第 33 卷 第 9 期 2014 年 9 月 种 子 (Seed) Vol． 33 No． 9 Sep． 2014
图 1 对照品溶液和供试品溶液 HPLC谱图
声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ;FN 101-2 A
型电热恒温鼓风干燥箱( 长沙仪器仪表厂)。
1． 2 方 法
1． 2． 1 色谱条件
色谱柱为 Agilent SB-C18柱(4． 6 mm × 150 mm，
5 μm) ;流动相为乙腈-0． 3%磷酸水溶液(8 ∶ 92) 等度
洗脱，柱温为 25 ℃，检测波长为 280 nm;流速1． 0 mL /
min;进样体积为5 μL。
1． 2． 2 溶液的制备
(1) 对照品溶液的制备: 精密称取表儿茶素对照
品 8． 20 mg，加甲醇制成每 1 mL含 0． 410 0 mg的溶液，
作为储备液备用。
(2) 供试品溶液的制备: 取供试品粉末约2． 0 g，
精密称定，精密加入稀乙醇 20 mL，称定重量，冷浸 30
min，然后超声提取( 频率为80 Hz)1 h，取出放冷，再称
定重量，用稀乙醇补足损失的质量，摇匀，滤过，弃去初
滤液，取续滤液，用 0． 45 μ微孔滤膜滤过，即得。
1． 2． 3 系统适用性、专属性、线性关系、精密度、稳定
性、重复性及加样回收率试验
(1) 系统适用性: 分别精密吸取表儿茶素和供试
品溶液 5 μL，注入高效液相色谱仪，按“1． 2． 1”项下色
谱条件测定，记录色谱图，计算表儿茶素峰的理论塔板
数、供试品中表儿茶素峰与其他杂质峰的分离度、拖尾
因子。
(2) 专属性考察试验: 精密吸取表儿茶素对照品
溶液和供试品溶液各 5 μL，进样，按“1． 2． 1”项下色谱
条件测定，记录色谱图，采用二极管阵列检测器，比较
对照品和供试品中表儿茶素峰的保留时间和 UV 光谱
图的一致性及纯度因子计算。
(3) 线性关系考察: 配制一系列浓度的表儿茶素
对照品溶液，即 0． 025 62、0． 051 25、0． 102 5、0． 205 0、
0． 410 0 mg /mL，按“1． 2． 1”项下色谱条
件，进样 5 μL，测定峰面积。各重复进样
3 次，以其峰面积平均值为纵坐标，其对
应的对照品质量为横坐标，计算回归方
程和相关系数。
(4) 精密度试验: 精密吸取表儿茶
素对照品溶液(0． 410 0 mg /mL)5 μL，
按“1． 2． 1”项下色谱条件，连续进样 6
次，测定峰面积，计算峰面积的 ＲSD值。
(5) 重复性试验: 取雪人参药材样
品(PA 01208 － 1)6 份，每份约 2． 0 g，精
密称定，按“1． 2． 2”项下供试品制备方
法制备供试品溶液，按“1． 2． 1”项下色
谱条件依法测定，计算样品中表儿茶素含量的 ＲSD
值。
(6) 稳定性试验:取雪人参药材样品(PA 01208 －
1) 约2． 0 g，精密称定，按“1． 2． 2”项下供试品溶液制
备方法制备供试品溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件，分
别于 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h 进样测定，计算表儿茶
素含量的 ＲSD值。
(7) 加样回收率试验: 取已知含量的雪人参药材
样品(PA 01208 － 1)9 份，每份约 1． 0 g，精密称定，分
别按质量分数的 80%，100%，120% 3 个水平加入表
儿茶素对照品，按“1． 2． 2”项下供试品溶液制备方法
制备供试品溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件依法测定，
计算表儿茶素平均回收率和 ＲSD值。
1． 2． 4 样品测定
(1) 表儿茶素含量测定: 取雪人参不同种质资源
药材样品，按“1． 2． 2”项下供试品溶液制备方法制备
供试品溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件依法测定，采用
外标一点法计算干品药材中表儿茶素的平均含量。
(2) 浸出物含量测定: 依照《中国药典》2010 年版
一部附录ⅩA中的醇溶性浸出物热浸法，取样品( 编号
为 gt 0111015-2) ，分别考察水及30%、40%、50%、
55%、60%、70%、80%、90%的乙醇作为溶剂时，提取
浸出物的含量差异，以浸出物含量最高选择提取溶剂，
分别测定雪人参不同种质资源药材浸出物含量。
(3) 水分含量测定 依照《中国药典》2010 年版一
部附录Ⅸ H水分测定法( 第一法) ，分别测定雪人参不
同种质资源药材水分含量。
2 结果与分析
2． 1 系统适用性、专属性、线性关系、精密度、稳定性
和重复性试验结果
试验结果表明:系统适用性，理论塔板数以表儿茶
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资源与利用 魏升华 等:贵州苗药雪人参不同种质资源药材的品质评价研究
表 1 加样回收率试验结果(n = 9)
取样量
(g)
样品中表儿茶
素含量(mg)
对照品加入
量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1． 000 6 1． 400 8 1． 105 5 2． 464 3 96． 194
1． 000 0 1． 400 0 1． 105 5 2． 505 3 99． 978 97． 21 2． 5
1． 000 7 1． 401 0 1． 105 5 2． 456 3 95． 458
1． 000 2 1． 400 3 1． 437 2 2． 868 9 102． 189
1． 000 5 1． 400 7 1． 437 2 2． 860 4 101． 567 100． 95 1． 6
1． 000 1 1． 400 1 1． 365 0 2． 752 9 99． 100
1． 000 9 1． 401 3 1． 820 0 3． 139 1 95． 484
1． 000 7 1． 401 0 1． 820 0 3． 131 0 95． 055 95． 24 0． 23
1． 000 9 1． 401 3 1． 729 0 3． 047 0 95． 185
图 2 对照品溶液及供试品中表儿茶素色谱峰 UV光谱图及纯度计算图
素峰计算应不低于 6 000，表儿茶素峰与
其他杂质峰分离度大于 1． 5，拖尾因子
为 0． 95。专属性，对照品和供试品中表
儿茶素峰的保留时间和 UV 光谱图一
致，且 其 纯 度 因 子 为 999． 682 和
997． 274，表明该方法具有专属性( 见图
1、2)。线性关系，表儿茶素的回归方程
和相关系数为:Y = 723． 972 301 X +
7． 022 958 2 (r = 0． 999 98) ，表明表儿茶
素在 0． 128 1 ～ 4． 100 μg 范围内与峰面
积呈良好线性关系。精密度，对照品表
儿茶素峰面积的 ＲSD值为 1． 4%，表明仪器精密度良
好。重复性，6 份供试品中表儿茶素含量的 ＲSD 值为
2． 5%，结果表明本法测定的重复性良好。稳定性，供
试品中表儿茶素含量的 ＲSD 值为 2． 4%，表明供试品
溶液测定在 24 h内稳定。
2． 2 加样回收率试验结果
3 组比例测得的平均回收率分别为 97． 21%，
100． 95%，95． 24%，ＲSD 值分别为 2． 5%，1． 6%，
0． 23%，结果表明本法测定准确度较高，结果见表 1。
2． 3 样品测定结果
34 批雪人参不同种质资源药材样品的表儿茶素
含量，30%乙醇浸出物含量及水分含量结果见表 2。
2． 4 雪人参不同种质资源药材品质综合评分
对上述测定得到的不同种质资
源雪人参药材中表儿茶素含量和醇溶性浸出物含量，
分别计算其隶属度之后，以表儿茶素的权重系数为
0． 7，醇溶性浸出物的权重系数为 0． 3，采用综合评分
法，综合评价不同种质资源雪人参药材的品质，结果为
普安盘水镇产雪人参种质资源药材的品质最好，其次
为六枝特区牛场乡产的。结果见表 3。
3 讨 论
3． 1 通过对贵州雪人参不同种质资源药材中表儿茶
素含量、浸出物和水分含量测定分析，综合比较，筛选
出雪人参药材品质较好的种质资源，为该药材的驯化
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第 33 卷 第 9 期 2014 年 9 月 种 子 (Seed) Vol． 33 No． 9 Sep． 2014
表 2 不同种质资源雪人参药材中表儿茶素含量、浸出物含量及水分含量测定结果(n = 3)
序号 样品编号 采集产地
采集日期
( 年/月 /日)
表儿茶素
平均含量(%)
浸出物
平均含量(%)
水分平均
含量(%)
1 PA 0120404-1 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 340 2 27． 47 6． 02
2 PA 0120404-2 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 428 0 28． 75 7． 37
3 PA 0120404-3 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 306 4 28． 10 5． 46
4 PA 0120404-4 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 331 0 28． 46 5． 36
5 PA 0120404-5 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 416 0 29． 29 4． 66
6 PA 0120404-6 普安盘水镇 2012 /04 /04 0． 385 8 29． 41 5． 16
7 gt 0111015-2 贵阳市汤粑关 2011 /10 /15 0． 058 7 21． 86 8． 38
8 gt 0111015-1 贵阳市汤粑关 2011 /10 /15 0． 055 4 20． 52 7． 66
9 hx 0120712 花溪高坡大洪村 2012 /07 /12 0． 242 2 22． 54 8． 20
10 lz 0110626-2 六枝特区月亮河 2011 /06 /26 0． 243 0 27． 73 7． 54
11 PA 0110924-1 普安盘水镇南山坡 2011 /09 /24 0． 347 6 29． 80 7． 27
12 PA 0110924-2 普安盘水镇南山坡 2011 /09 /24 0． 083 9 22． 04 7． 11
13 lz 0110626-1 六枝特区牛场乡 2011 /06 /26 0． 186 5 33． 99 6． 36
14 QT 0111015-1 贵阳黔陶乡 2011 /10 /15 0． 000 0 16． 84 7． 96
15 px 0110925-1 盘县羊场乡白块村 2011 /09 /25 0． 150 8 16． 68 7． 07
16 DCX 01111-1 德昌祥基地栽培 2011 /11 0． 089 8 26． 37 6． 92
17 DCX 01203-1 德昌祥基地栽培 2012 /03 0． 044 1 22． 54 7． 68
18 PA 0130405-1 普安盘水镇文毕村 2013 /04 /05 0． 115 4 28． 24 10． 29
19 PA 0130405-2 普安盘水镇文毕村 2013 /04 /05 0． 220 9 26． 45 10． 02
20 PA 01208-1 普安 2012 /08 0． 134 5 24． 46 10． 86
21 PA 010924-1 普安盘水镇南山坡 2010 /09 /24 0． 116 1 24． 28 9． 82
22 zy 0130116 紫云坝羊老凹塘 2013 /01 /16 0． 075 9 20． 82 10． 78
23 lz 01106026-3 六枝特区郎岱镇荷花水库 2013 /06 /26 0． 125 3 26． 13 5． 98
24 lz 01106026-2 六枝特区月亮河 2011 /06 /26 0． 139 8 22． 52 9． 72
25 PA 0110924 普安盘水镇公墓森林公园 2011 /09 /24 0． 082 8 20． 31 10． 44
26 DCX 01203-1 德昌祥基地栽培 2012 /03 0． 038 5 20． 41 10． 60
27 DCX 0130228 牛场 DCX基地 2013 /02 /28 0． 031 2 25． 85 7． 44
28 lz 0110626-1 六枝特区牛场乡 2011 /06 /26 0． 185 3 28． 97 7． 18
29 PA 0120924-2 普安盘水镇森林公园 2012 /09 /24 0． 112 6 21． 01 7． 26
30 DCX 0130228 森林公园 DCX基地 2013 /03 /28 0． 135 6 31． 49 6． 89
31 DCX 01111-1 德昌祥基地栽培 2011 /11 0． 099 3 25． 15 7． 11
32 DCX 0120504 德昌祥公园 2012 /05 /04 0． 045 8 22． 36 7． 58
33 PA 0110924-2 普安盘水镇森林公园 2011 /09 /24 0． 133 9 23． 06 7． 68
34 lps 0120824 六盘水六枝 2012 /08 /24 0． 084 9 26． 40 7． 14
研究、良种选育及规范化生产提供了部分前期研究基
础。但是由于药材品质受到产地、采集时间以及野生
生长年限的不确定性等众多因素的影响，对于雪人参
种质资源的选育，尚需深入研究，应从影响种质资源的
内因到外因，包括其基因型、表型特征以及抗逆性等相
结合进行系统整理研究，筛选优良种源以指导生产所
需。另外，对药材干燥温度的考察对比结果表明，干燥
温度对药材表儿茶素含量有一定影响，为今后雪人参
药材规范化种植的采收加工标准操作规程制定奠定
基础。
3． 2 本实验首次建立的雪人参药材表儿茶素含量测
定方法简便快速、准确可行，可作为苗药雪人参药材的
质量控制方法，为《贵州省中药材、民族药材质量标
准》(2003 年版) 收载的雪人参药材质量标准提升奠定
一定的实验基础。
3． 3 本文以查阅相关文献报道为基础，考察了流动相
为乙腈-水、乙腈-0． 1%醋酸水溶液、乙腈-0． 1%磷酸水
溶液系列流动相组成和比例，对供试品中表儿茶素峰
分离度的影响，以乙腈-0． 3%磷酸水溶液(8 ∶ 92) 为流
动相时，表儿茶素峰对称性好，并与杂质峰达到了基线
分离。
3 ． 3 本实验比较了加热回流提取法与超声提取法对
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资源与利用 魏升华 等:贵州苗药雪人参不同种质资源药材的品质评价研究
表 3 雪人参不同种质资源药材品质的综合评分结果
序号 样品编号 采集产地
表儿茶素
隶属度
浸出物
隶属度
综合评分值
1 PA 0120404-2 普安盘水镇 1． 000 0 0． 697 3 0． 909 2
2 PA 0120404-5 普安盘水镇 0． 972 0 0． 728 5 0． 898 9
3 PA 0120404-6 普安盘水镇 0． 901 4 0． 735 4 0． 851 6
4 PA 0110924-1 普安盘水镇南山坡 0． 812 1 0． 757 9 0． 795 9
5 PA 0120404-4 普安盘水镇 0． 773 4 0． 680 5 0． 745 5
6 PA 0120404-1 普安盘水镇 0． 794 8 0． 623 3 0． 743 4
7 PA 0120404-3 普安盘水镇 0． 715 9 0． 659 7 0． 699 0
8 lz 0110626-1 六枝特区牛场乡 0． 435 7 1． 000 0 0． 605 0
9 lz 0110626-2 六枝特区月亮河 0． 567 8 0． 638 4 0． 588 9
10 PA 0130405-2 普安盘水镇文毕村 0． 516 1 0． 564 4 0． 530 6
11 lz 0110626-1 六枝特区牛场乡 0． 432 9 0． 710 0 0． 516 1
12 hx 0120712 花溪高坡大洪村 0． 565 9 0． 338 5 0． 497 7
13 DCX 0130228 森林公园 DCX基地 0． 316 8 0． 855 6 0． 478 4
14 PA 0130405-1 普安盘水镇文毕村 0． 269 6 0． 667 8 0． 389 1
15 lz 01106026-3 六枝特区郎岱镇荷花水库 0． 292 8 0． 545 9 0． 368 7
16 PA 01208-1 普安 0． 314 2 0． 449 5 0． 354 8
17 lz 01106026-2 六枝特区月亮河 0． 326 6 0． 337 4 0． 329 9
18 PA 0110924-2 普安盘水镇森林公园 0． 312 9 0． 368 5 0． 329 6
19 PA 010924-1 普安盘水镇南山坡 0． 271 3 0． 439 1 0． 321 6
20 DCX 01111-1 德昌祥基地栽培 0． 209 8 0． 559 8 0． 314 8
21 DCX 01111-1 德昌祥基地栽培 0． 232 0 0． 489 3 0． 309 2
22 lps 0120824 六盘水六枝 0． 198 4 0． 561 5 0． 307 3
23 PA 0120924-2 普安盘水镇森林公园 0． 263 1 0． 250 1 0． 259 2
24 px 0110925-1 盘县羊场乡白块村 0． 352 3 0． 000 0 0． 246 6
25 PA 0110924-2 普安盘水镇南山坡 0． 196 0 0． 309 6 0． 230 1
26 DCX 0130228 牛场 DCX基地 0． 072 9 0． 529 8 0． 209 9
27 PA 0110924 普安盘水镇公墓森林公园 0． 193 4 0． 209 7 0． 198 3
28 zy 0130116 紫云坝羊老凹塘 0． 177 3 0． 239 2 0． 195 9
29 gt 0111015-2 贵阳市汤粑关 0． 137 1 0． 299 2 0． 185 8
30 DCX 01203-1 德昌祥基地栽培 0． 103 0 0． 338 5 0． 173 7
31 DCX 0120504 德昌祥公园 0． 107 0 0． 328 1 0． 173 3
32 gt 0111015-1 贵阳市汤粑关 0． 129 4 0． 221 8 0． 157 2
33 DCX 01203-1 德昌祥基地栽培 0． 090 0 0． 215 5 0． 127 6
34 QT 0111015-1 贵阳黔陶乡 0． 000 0 0． 009 2 0． 002 7
供试品表儿茶素提取效率的影响，结果表明，2 种方法
提取效率无显著差异，因超声提取法操作简便，故选择
超声提取法。并考察了超声提取时间、超声频率对表
儿茶素提取效率的影响，结果为均无明显影响，但考虑
到超声提取频率过大可能引入较多杂质，所以选择超
声提取时间为 1 h、频率为 80 Hz。
参考文献:
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第 33 卷 第 9 期 2014 年 9 月 种 子 (Seed) Vol． 33 No． 9 Sep． 2014