全 文 ：收稿日期:2014 － 02 － 19
基金项目:贵州省科学技术基金项目“民族药石楠藤的抗凝血作用活性物质筛选及药材质量控制研究”(编号:黔科合 J字〔2010〕2211 号) ;贵州省中
医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题“民族药物石楠藤对免疫系统的影响及药材质量控制研究”(编号:QZYY 2010-14)和“民
族药物石南藤野生变家种关键技术的前期研究”(编号:黔中医发 2010)79 号。
作者简介:王 波(1988 －) ，男，在读硕士研究生，研究方向:中药资源及中药质量控制研究;E-mail:1169738720@ qq． com。
通讯作者:徐文芬(1964 －) ，女，教授，研究方向:中药资源及中药质量控制研究;E-mail:wenfenxu@ 126． com。
民族药石楠藤不同种质资源药材的品质分析
王 波， 吴连花， 孙庆文， 徐文芬， 何顺志
(贵阳中医学院， 贵州 贵阳 550002)
The Quality Analysis of Ethno-medicine Piper Wallichii from
Different Germplasm Ｒesources
WANG Bo，WU Lian-hua，SUN Qing-wen，XU Wen-fen，HE Shun-zhi
摘要:采用高效液相色谱法，以有效成分海风藤酮含量测定为
评价指标，对收集到的 25 批和不同采收时间采集的石楠藤不
同种质资源药材进行品质分析。结果显示，石楠藤不同种质资
源药材中海风藤酮的含量有明显差异，以贵州金沙产地含量最
高，赤水桫椤保护区产地含量最低; 石楠藤药材采收期以夏季
( 6 ～ 8 月份) 采收产量高质量好。研究结果为该药材野生驯化
及规范化种植的优良种质筛选提供了实验基础，有利于促进现
代中药农业的可持续发展。
关键词: 石楠藤;不同种质资源药材;海风藤酮;优良种质
中图分类号: S 567 文献标志码: A
文章编号: 1001 － 4705(2014)07-0060-04
石楠藤为胡椒科(Piperaceae)胡椒属植物石楠藤
(Piper wallichii(Miq．)Hand． -Mazz．) ，多年生常绿藤
本，为《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003 版)
收载品种，带叶藤茎或全株入药，具有祛风湿，强腰膝，
补肾壮阳，止咳平喘，活血止痛功效。主治风寒湿痹，
腰膝酸痛，痛经，阳痿，咳嗽气喘，跌打肿痛等，是贵州
水族、苗族、布依族、仡佬族常用的药物［1］。通过查阅
文献，石楠藤的化学成分主要有木脂素类、生物碱类和
挥发油等化合物，如海风藤酮、南藤素、玉兰脂 B、山蒟
素 D、山蒟素 C 及山蒟素 B 等，其中海风藤酮具有抑
制 PAF引起的血小板聚集活性［2 ～ 7］。石楠藤药材应
用十分广泛，在贵州民间常用作艾滋病的治疗，其野生
资源越来越少，为此，贵州省中医药管理局专门资助课
题组进行民族药物石南藤野生变家种关键技术的前期
研究和该药材对免疫系统的影响研究，为了石楠藤药
材野生资源的可持续发展和更深层次的开发利用，首
先需要开展石楠藤药材的野生驯化研究，而石楠藤优
良种质的筛选是关键［7，8］。所以，本试验在前人研究
的基础上，通过采集不同产地、不同采收时间的石楠藤
种质资源药材，采用高效液相色谱法，以其有效成分海
风藤酮的含量测定为评价指标［9］，分析评价不同产
地、不同采收时间的石楠藤药材的质量，优选最佳的石
楠藤种质资源和最佳的采收时间，为石楠藤药材引种
栽培以及资源的合理开发应用提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材 料
1． 1． 1 试药及供试样品
海风藤酮对照品(批号:101201，纯度≥98%，上海
信然实业有限公司) ;甲醇、乙腈(江苏汉邦科技有限
公司，色谱纯) ;磷酸、甲醇、乙醇，均为分析纯;实验用
水为重蒸水。
石楠藤药材实验样品采自贵州台江、镇宁龙宫、习
水山岔河、望漠打易镇、金沙、梵净山、荔波茂兰、开阳
紫江、龙里湾寨乡、紫云猴场镇、赤水桫椤，贵阳森林公
园、水田、相思河、三江农场及下坝，四川峨眉山。不同
采收期样品固定在贵阳情人谷产地，于 2011 年每月
27 日定时采集。所有样品经贵阳中医学院孙庆文副
教授鉴定为胡椒科植物石楠藤阴干，备用。
1． 1． 2 仪 器
Agilent 1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ，
安捷伦液相色谱系统化学工作站;AG 135 电子分析天
平(瑞士 Mettler-Toledo 公司) ;HH-S 2 型数显恒温水
浴锅(常州普天仪器制造有限公司金坛市晶玻实验仪
器厂) ;KQ-500 DE型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司) ;FN 101-2 A 型电热恒温鼓风干燥箱
(长沙仪器仪表厂制造)。
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第 33 卷 第 7 期 2014 年 7 月 种 子 (Seed) Vol． 33 No． 7 Jul． 2014
DOI:10.16590/j.cnki.1001-4705.2014.07.055
1． 2 方 法
1． 2． 1 色谱条件
色谱柱:ZOＲBAX SB-C18柱(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ;流动相:甲醇-水(58 ∶ 42) ，流速为:1． 0 mL /
min;检测波长:235 nm;柱温:35 ℃;进样量:15 μL。
1． 2． 2 溶液的制备
(1)对照品溶液的制备:精密称取海风藤酮对照
品适量，加甲醇溶解并制成每 1 mL 含 0． 248 mg 的溶
液，作为储备液。
(2)供试品溶液的制备:取样品粉末(过 3 号筛)
约 1． 0 g，精密称定，置 50 mL具塞锥形瓶中，精密加入
70%甲醇 15 mL，称定重量，超声提取(功率 100 W)
60 min，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重
量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1． 2． 3 系统适用性、专属性、线性关系、精密度、稳定
性、重复性及加样回收率试验
(1)系统适用性:分别精密吸取海风藤酮和供试
品溶液 15 μL，注入高效液相色谱仪，按“1． 2． 1”项下
色谱条件测定，记录色谱图，计算海风藤酮峰的理论塔
板数、供试品中海风藤酮峰与其他杂质峰的分离度、拖
尾因子。
(2)专属性考察试验:精密吸取海风藤酮对照品
溶液和供试品溶液各 15 μL，进样，按“1． 2． 1”项下色
谱条件测定，记录色谱图，采用二极管阵列检测器，比
较对照品和供试品中海风藤酮峰的 UV光谱图。
(3)线性关系考察:配制一系列浓度的海风藤酮
对照品溶液，即 0． 003 88 mg /mL，0． 007 75 mg /mL，
0． 015 5 mg /mL，0． 031 0 mg /mL，0． 062 0 mg /mL，0． 124
和 0． 248 mg /mL，按“1． 2． 1”项下色谱条件，进样 15
μL，测定峰面积。各重复进样 3 次，以其峰面积平均
值为纵坐标，其对应的对照品质量为横坐标，计算回归
方程。
(4)精密度试验:精密吸取海风藤酮对照品溶液
(0． 031 0 mg /mL)15 μL，按“1． 2． 1”项下色谱条件，连
续进样 6 次，测定峰面积，计算峰面积的 ＲSD值。
(5)重复性试验:取同一药材粉末(201010 贵阳森
林公园，过 3 号筛)共 6 份，每份约 1． 0 g，按“1． 2． 2”项
下供试品制备方法制备供试品溶液，按“1． 2． 1”项下
色谱条件依法测定，计算样品中海风藤酮含量的 ＲSD
值。
(6)稳定性试验:取同一药材粉末(201010 贵阳森
林公园，过 3 号筛)约 1． 0 g，精密称定，按“1． 2． 2”项
下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“1． 2． 1”
项下色谱条件分别于 0 h，3 h，6 h，9 h，12 h 和 24 h 进
行测定，计算海风藤酮含量的 ＲSD值。
(7)加样回收率试验:取已知含量的同一药材粉
末(201010 贵阳森林公园，过 3 号筛) ，水分为7． 42%)
共 9 份，每份约 0． 5 g，精密称定，按照 1 ∶ 0． 8，1 ∶ 1，
1 ∶ 1． 2比例，分别精密加入质量浓度为 0． 082 46 mg /
mL的海风藤酮对照品溶液 4． 0 mL、5． 0 mL，质量浓度
为 0． 522 0 mg /mL 的海风藤酮对照品溶液 1． 0 mL，按
“1． 2． 2”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，
按“1． 2． 1”项下色谱条件依法测定，计算海风藤酮平
均回收率和 ＲSD值。
1． 2． 4 样品测定
分别取不同产地、不同采收期石楠藤药材粉末
(过 3 号筛)3 份，每份约 1． 0 g，精密称定，按“1． 2． 2”
项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按
“1． 2． 1”项下色谱条件依法测定，采用外标一点法计
算干品石楠藤药材中海风藤酮的平均含量。
2 结果与分析
2． 1 系统适用性、专属性、线性关系、精密度、稳定性
和重复性
试验结果表明:系统适用性，理论塔板数以海风藤
酮峰计算应不低于 3 500;海风藤酮峰与其他杂质峰分
离度大于 1． 5;拖尾因子为 0． 97。专属性，对照品和供
试品中海风藤酮峰的保留时间和 UV光谱图一致，且其
纯度因子为 999． 796 和 998． 674，表明该方法具有专属
性。线性关系，海风藤酮的回归方程和相关系数为:Y =
2 993． 685 1 X +0． 548 847 9(r = 0． 999 99) ，表明海风藤
酮进样量在0． 058 1 ～3． 72 μg范围内与峰面积呈良好线
性关系。精密度，对照品海风藤酮峰面积的 ＲSD 值为
0． 99%，表明仪器精密度良好。稳定性，供试品中海风
藤酮含量的 ＲSD 值为 2． 2%，表明供试液在 24 h 内稳
定。重复性，6 份供试品中海风藤酮含量的 ＲSD 值为
1． 8%，结果表明，本法测定的重复性良好。
表 1 加样回收率试验结果(n = 9)
称样量
(g)
海风藤酮
的含量
(mg)
对照品
加入量
(mg)
检出量
(mg)
回收率
(%)
平均
回收率
(%)
ＲSD
(%)
0． 500 6 0． 410 3 0． 329 8 0． 740 9 100． 24
0． 500 2 0． 410 4 0． 329 8 0． 744 0 101． 15 100． 59
0． 500 3 0． 410 3 0． 329 8 0． 741 4 100． 39
0． 500 1 0． 410 8 0． 412 3 0． 816 3 98． 35
0． 500 2 0． 410 4 0． 412 3 0． 822 7 100． 00 99． 47 1． 6
0． 500 1 0． 410 5 0． 412 3 0． 823 0 100． 05
0． 500 5 0． 410 7 0． 522 0 0． 946 6 102． 66
0． 500 3 0． 410 5 0． 522 0 0． 945 8 102． 55 102． 67
0． 500 2 0． 410 4 0． 522 0 0． 947 0 102． 80
·16·
资源与利用 王 波 等:民族药石楠藤不同种质资源药材的品质分析
图 1 海风藤酮对照品溶液及供试品溶液 HPLC图谱
2． 2 加样回收率试验结果
3 组比例测得的平均回收率分别
为 100． 60%、99． 47%、102． 67%，ＲSD
值为 1． 6%，结果表明，本法测定准确
度较高，结果见表 1。
2． 3 样品测定
2． 3． 1 石楠藤不同种质资源药材
中海风藤酮含量结果
分别取 25 批石楠藤不同种质资
源药材，按上述供试品溶液制备方法
制备，依法测定石楠藤药材中海风藤
酮含量，以贵州金沙县产含量最高，为
0． 249%，其次是贵阳市下坝乡，为
0． 220%，贵州赤水桫椤保护区含量最
低。结果见图 1 和表 2。
表 2 石楠藤不同种质资源药材中海风藤酮的
含量测定结果(n = 3)
编号
采收日期
(年 /月 /日) 产地
海风藤酮
平均含量
(%)
1 2010 /01 /16 贵阳三江 0． 048 6
2 不详 贵阳三江(农场) 0． 023 4
3 2010 /05 /01 贵州赤水桫椤保护区 痕量
4 2010 /05 /10 贵阳相思河 0． 057 3
5 2011 /06 /06 贵州台江 0． 020 3
6 2011 /06 /05 贵州镇宁龙宫 0． 018 3
7 2011 /06 /14 贵州习水山岔河 0． 059 1
8 2011 /06 /23 贵州望漠打易镇 0． 037 9
9 2011 /06 /27 贵阳森林公园 0． 052 7
10 2011 /06 /19 贵州梵净山 0． 135
11 2011 /06 /30 贵州紫云猴场镇 0． 037 7
12 2011 /06 /15 贵阳水田 0． 047 3
13 2011 /06 /15 贵阳相思河 0． 061 3
14 2011 /06 /12 贵阳三江(雷打岩) 0． 025 9
15 2011 /06 /28 贵阳紫江地缝 0． 057 4
16 2011 /07 /12 贵州金沙县 0． 249
17 2011 /07 /03 贵州龙里湾寨乡 0． 0025 0
18 2011 /08 /16 贵州晴隆县三宝乡(小) 0． 020 3
19 2011 /08 /16 贵州晴隆县三宝乡(大) 0． 012 2
20 2011 /09 /15 贵州梵净山 0． 120
21 2010 /10 /10 贵阳森林公园 0． 087 1
22 2010 /10 /10 贵阳下坝 0． 220
23 2011 /10 /05 贵州荔波茂兰 0． 023 2
24 2010 /10 /24 四川峨眉山 0． 015 3
25 2011 /12 /26 贵阳三江农场(引种) 0． 075 3
2． 3． 2 不同采收时间采集石楠藤种质药材中海风藤
酮含量结果
分别测定 12 批贵州森林公园产的石楠藤药材中
海风藤酮含量。其中石楠藤药材海风藤酮含量以6 ～ 8
月采收的较高。结果见图 2。
图 2 不同采收期石楠藤药材中海风藤酮的含量动态变化
3 讨论与结论
3． 1 中药材品质的形成，除了受遗传物质的主导，还
与生态环境，气候因子密切相关。药用植物在整个生
命活动过程中均受到遗传物质的调控，所以其形态特
质和代谢特质也是由遗传因素决定的。遗传物质是内
因，环境影响是外因。同一物种在不同的环境下引起
表形的变异和代谢产物的差异。通过测定 25 个石楠
藤不同种质资源药材中海风藤酮的含量，结果表明贵
州金沙县含量最高，贵阳市下坝乡次之，贵州赤水桫椤
保护区含量最低。这一结果也验证了中药的品质是由
遗传物质和环境共同决定的。种质资源是提高中药材
质量的关键和源头，种质的优劣对中药材的产量和质
量有决定性的作用，是进行中药材规范化基地建设的
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第 33 卷 第 7 期 2014 年 7 月 种 子 (Seed) Vol． 33 No． 7 Jul． 2014
先决条件，建议以贵州金沙县和贵阳市下坝乡的石楠
藤作为最佳引种种质，通过引种观察，进一步研究其基
因型、表型特征以及抗逆性的相关性，为民族药石楠藤
的野生驯化研究及良种选育提供了前期基础。
3． 2 中药的质量与中药的有效成分含量有关，而有效
成分积累量在植物内呈动态变化，随着时间的变化而
变化。由图 2 可知，石楠藤药材中木脂素类成分海风
藤酮含量从花前期至花期迅速增加，在 7 月份时达到
最高值，果期之后明显下降，海风藤酮含量不足最高含
量的 1 /2，该试验结果支持《贵州省中药材、民族药材
质量标准》中石楠藤药材质量标准制定的采收期。因
此建议石楠藤药材生产在确定采收期时应结合质量好
和产量高加以考虑，以夏季(6 ～ 8 月份)采收为宜。该
研究结果为今后石楠藤药材规范化生产中采收加工标
准操作规程的制定提供了实验基础。
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169 － 175．
我刊常用计量单位
凡涉及计量的地方请用法定计量单位，重量
单位:公斤用 kg，克用 g，吨用 t;长度单位:米用
m，厘米用 cm，毫米用 mm，微米用 μm;面积单位:
公顷用 hm2、平方米用 m2，不能使用亩制;浓度单
位:采用百分比浓度或 mol /L;时间单位:小时用
h，分钟用 min，秒用 s等。未使用法定计量
獉獉獉獉獉獉獉
单位的
稿件原则上不拟采用
獉獉獉獉
。
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资源与利用 王 波 等:民族药石楠藤不同种质资源药材的品质分析