全 文 ：北京中医药 2014年 9月第 33卷第 9期 Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine，September，2014，Vol. 33，No. 9 ·695·
·方药经纬·
藏药结血蒿生药鉴定与质量标准研究
龚强强1 王大仟2 姜 迪1 韩东河1
(1. 北京市卫生局临床药学研究所，北京 100035;2． 首都医科大学附属北京中医医院，北京 100010)
【摘要】目的 对结血蒿进行生药学鉴定，为其鉴别及应用提供科学依据。方法 运用药材性状、显微特征、薄层色
谱、高效液相色谱对该药材进行鉴定。结果 选择 50%甲醇作为提取溶剂，超声时间 30 min，溶剂用量为样品量的 100
倍，系统精密度良好，有良好的重复性，至少在 12 h内稳定，加样回收较好，测得药材中绿原酸平均含量为 1. 372 7 mg /g
(n = 3)，ＲSD = 1. 99%。。结论 结果可为结血蒿生药鉴定、相关质量标准的提高、资源开发利用提供依据。
【关键词】结血蒿;显微特征;薄层色谱;生药鉴定
Study on pharmacognostic identification and quality standard of the Tibetan medicine，Artemisia vestita
Wall. ex Bess.
GONG Qiang-qiang1，WANG Da-qian2，JIANG Di1，HAN Dong-he1
(1. Institute of Clinical Pharmacy，Beijing Municipal Health Bureau，Beijing 100035，China;2. Beijing Hospital of TCM，Capital
Medical University，Beijing 100010)
ABSTＲACT Objective To identify Artemisia vestita Wall. ex Bess. by identification of pharmacognosy and provide the scientific
evidence for its identification and application. Methods Pharmacognosy traits，microscopic characteristics，thin layer chtomatography
(TLC) and high efficiency liquid chromatography(HPLC) techniques were used for identification and quality standard of the
herb. Ｒesults 50% of formaldeh·e as the extraction solvent，ultrasound time was 30min，the solvent dosage was 100 times by the
sample，system precision was good，with fine repetition，stabilized at least 12h，and high recovery rate. The average content of
chlorogenic acid in this herb was 1. 3727 mg /g(n = 3)，ＲSD = 1. 99%. Conclusion These results can be used for scientific evidence
for pharmacognostic identification，promoting quality standard and development and utilization of resources of Artemisia vestita Wall. ex
Bess.
Keywords Artemisia vestita Wall. ex Bess.;microscopic characteristics;thin layer chtomatography;pharmacognostic identification
藏药结血蒿又名普尔芒那保(《度母本草》)，
为菊科植物毛莲蒿(Artemisia vestita Wall. ex Bess)
的地上部分，是藏医常用的药材之一。其功能为
清热解毒，杀虫利湿;主治虫病、疫疽、皮肤病、
咽喉病等症［1］。目前对结血蒿的生药学和质量标
准研究报道较少，本研究对其进行药材性状、显
微鉴定、薄层色谱、含量测定等方面的研究，为
其质量标准的制定提供依据。
1 材料
1. 1 仪器
OLPMPUS DP72 显微数码成像系统(日本奥林
巴斯公司);HITACHI L-2000 高效液相色谱仪
(HITACHI L-2455 二极管阵列检测器，日本日立公
司);SHIMADZU AUW220D 电子天平(1 /10 万，
日本岛津公司);IKA A11 basic 粉碎机;CAMAG
TLC VISUALIZEＲ薄层色谱数码成像系统(瑞士卡
玛公司);超声波清洗器(昆山市 KQ2200B型)。
1. 2 试剂
分析纯(甲酸、乙酸丁酯、磷酸、甲醇)，购
自北京化工厂;硅胶 G 高效薄层板(德国 Merck);
娃哈哈纯化水;乙腈色谱纯(德国 Merck)。
1. 3 样品
藏药结血蒿采摘自北京市海淀区鹫峰自然景
区，经本所郄春鹏主任药师鉴定为菊科植物毛莲
蒿(Artemisia vestita Wall. ex Bess)的地上部分;绿
原酸对照品(110753-201314)中国食品药品检定研
究院，含量以 96. 6%计。
2 方法与结果
2. 1 性状鉴别
本品多已破碎成段。茎呈圆柱形，分枝多而
长，长 2 ～ 6 cm，直径 0. 2 ～ 0. 6 cm;茎、枝表面
紫红色或红褐色，被蛛丝状微柔毛;质略硬而脆，
易折断，断面有髓，具纤维性。叶绿色或灰绿色，
皱缩易碎，完整者展平后为 2 ～ 3 回羽状全裂，裂
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片卵形至长圆形，长 1. 5 ～ 2 cm，宽 1 cm，上面被
疏毛，下面被白色绒毛。花黄绿色，球形或半球
形，直径 2. 5 ～ 3. 5 mm，全部管状，总苞片内层木
质。本品具有浓烈的香气，味苦。
2. 2 显微鉴别
本品粉末灰绿色，味苦。腺毛头部 2 细胞，椭
圆形，腺头黄棕色，柄单细胞。非腺毛为单细胞，
长短不一，平直或弯曲，直径 7 ～ 37 μm，基部膨
大。复合花粉粒呈圆球形、扁球形或不规则形，
为多合体，直径 81 ～ 146 μm;单个花粉粒呈圆形
或椭圆形，直径 24 ～ 40 μm，表面光滑，有 3 个萌
发孔，壁三面增厚。可见棕色至棕红色块状物，
草酸钙簇晶偶见，直径约至 40 μm。纤维淡绿色，
成束或离散，直径 10 ～ 30 μm，壁厚，表面有纵裂
纹，两端断裂处平截。石细胞少见，圆形或长圆
形，壁厚。导管主要为网纹导管，呈类长方形，
具网状纹孔，纹孔呈扁圆形。见图 1。
2. 3 薄层色谱鉴别
取本品粉末 0. 5 g 加甲醇 20 mL 密塞，超声
30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取绿原酸
对照品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为
对照品溶液。薄层色谱法(《中国药典》2010 年版
一部附录 VI B)试验［2］，吸取上述溶液各 4 μL分
别点于同一硅胶 G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水
(1∶ 1∶ 1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，
置紫外灯(365 nm)下检视［3］。供试品色谱中，在
与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光
斑点。见图 2。
图 1 结血蒿的显微鉴别图
1. 结血蒿 2. 绿原酸对照品
图 2 结血蒿薄层色谱图
2. 4 高效液相色谱含量测定
2. 4. 1 色谱条件:Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm);以 乙 腈 － 0. 4% 磷 酸 溶 液
(10∶ 90)为流动相;柱温 25 ℃;流速为 1. 0 mL /
min;检测波长为 327 nm。
2. 4. 2 对照品溶液的制备:取绿原酸对照品置五
氧化二磷减压干燥器中干燥 12 h 后，取干燥的绿
原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加
50%甲醇制成每 1 mL含 23 μg的溶液，即得。
2. 4. 3 供试品溶液的制备:
(1)提取溶剂考察:取结血蒿粉末(过四号
筛)约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中分别加
甲醇、50%甲醇、水 50 mL，称定重量，超声处理
(功率 250 W，频率 35 kHz)30 min，放冷，称定
重量，分别用甲醇、50%甲醇、水补足减失的重
量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 mL 至 25 mL
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棕色瓶中，挥干水和甲醇加入甲醇洗涤，3 份样品
均用甲醇定容至 25mL 滤过后，分别进样 10 μL，
测定绿原酸的含量，甲醇为 1. 285 0 mg /g，50%甲
醇为 1. 383 1 mg /g，水为 1. 174 4 mg /g。以 50%甲
醇作为提取溶剂，绿原酸的含量最高。
(2)提取时间的考察:取结血蒿粉末(过四号
筛)约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中加 50%
甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率 250 W，
频率35 kHz)20、30、40 min，放冷，称定重量，
用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密
量取续滤液 5 mL至 25 mL棕色瓶中，以 50%甲醇
定容至 25 mL滤过，分别进样 10 μL，测定绿原酸
的含量，20 min 为 1. 245 9 mg /g，30 min 为 1. 373 2
mg /g，40 min为 1. 360 7 mg /g。超声处理 30 min 有
较好的提取效果。
(3)提取溶剂用量考察:取结血蒿粉末(过四
号筛)约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中分别
加入药粉量 50 倍、100 倍、150 倍的 50% 甲醇，
称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 35 kHz)
30 min，放冷，称定重量，用 50%甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 mL 至 25
mL棕色瓶中，三份样品均用 50%甲醇定容至 25
mL滤过后，分别进样 10 μL，测定绿原酸的含量，
50倍为 1. 264 2 mg /g，100 倍为 1. 363 3 mg /g，150
倍为 1. 291 4 mg /g。加入样品 100 倍量的 50%甲醇
即可达到良好的提取效果。
2. 4. 4 线性关系考察:精密量取 4、6、8、10、
12、15 μL对照品溶液注入高效液相色谱仪，以绝
对进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归处
理，得回归方程:Y = 2563 01X + 593 17，Ｒ2 =
0. 999 2。绿原酸进样量在 0. 088 9 μg ～ 0. 333 3 μg
之间呈良好的线性关系。
2. 5 精密度实验
分别精密吸取绿原酸对照品溶液 10 μL，重复
进样 6 次，测得绿原酸对照品峰面积 ＲSD =2. 93%
(n = 6)，表明系统有良好的精密度。
2. 6 重复性实验
精密称取结血蒿粉末(过四号筛)适量，按照
供试品溶液制备方法，平行制得 6 份供试品溶液
后，分别测定绿原酸含量，测得药材中绿原酸含
量平均值为 1. 383 2 mg /g，ＲSD = 2. 54%，表明本
方法有良好的重复性。
2. 7 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别于配置后 0、2、4、
6、8、12 h，注入高效液相色谱仪中，测得绿原酸
的峰面积 ＲSD = 2. 38%(n = 6)，表明供试品溶液
至少在 12 h内稳定。
2. 8 加样回收实验
分别精密称取已知含量的样品 6 份，各约
0. 5 g，分别精密加入绿原酸对照品适量，按上述
供试品溶液制备方法和色谱条件，制备加样回收
供试品溶液并注入高效液相色谱仪中测定，计算
回收率。绿原酸的平均回收率为 102. 58%，ＲSD =
1. 01%(n = 6);样品回收率在 95% ～ 105%之间，
加样回收较好。见表 1。
表 1 绿原酸加样回收率实验结果(n = 6)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0. 726 0 1. 023 0 1. 784 0 103. 40
0. 700 0 1. 046 0 1. 772 0 103. 47
0. 703 0 1. 065 0 1. 779 0 100. 99 102. 58 1. 01
0. 695 0 1. 042 0 1. 767 0 102. 85
0. 725 0 1. 013 0 1. 757 0 101. 89
0. 741 0 0. 105 8 1. 840 0 103. 85
2. 9 样品含量测定
按照上述色谱条件对供试品溶液进行测定，测
得药材中绿原酸平均含量为 1. 372 7 mg /g(n = 3)，
ＲSD =1. 99%。
3 小结
青蒿为菊科蒿属植物黄花蒿 Artemisia annua L.
的干燥地上部分，与结血蒿性状和显微结构比较
相似，但二者性状特征具明显不同之处:青蒿茎
表面黄绿色或棕黄色，不被柔毛;结血蒿茎、枝
表面紫红色或红褐色，被蛛丝状微柔毛。显微特
征二者非常相似较难区分，可在扫描电镜下对二
者花粉粒表面小刺的分布密度及微细形态特征进
行区分［4］。采用薄层色谱法对结血蒿进行定性鉴
别，试验分离效果和重现性好。
藏药结血蒿化学成分研究的相关报道较少，
研究［5-10］发现，结血蒿的水提物及醇提物都具有不
同程度的免疫抑制作用;结血蒿总黄酮具有抗炎、
免疫抑制作用;同时总黄酮中的单体成分棕矢车
菊素有抑制接触性超敏反应的作用、高车前素具
有抑制血管再生及胰腺肿瘤的作用、中国蓟醇体
外具有抗炎的作用等。结血蒿清热解毒的主要功
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效，可能与其含有的黄酮类物质具有抗炎、免疫
抑制的药理作用有关。从目前的化学成分研究可
知，其他黄酮单体成分缺乏对照品，只有绿原酸
较容易获得对照品，并且现代药理也证明绿原酸
具有抗炎、抗病毒、抗菌、免疫调节等多种药理
作用，是结血蒿清热解毒的有效成分之一，故选
择结血蒿中的绿原酸进行含量测定［11］。
以上鉴别方法可以为该药的质量标准的制定
以及资源的合理开发利用提供参考依据。
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作者简介:龚强强，男，30 岁，硕士研究生，
初级药师。研究方向: 天然药物质量标准及中药
制剂工艺研究。
(收稿日期:2014-04-21
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·消 息·
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