全 文 ：2010 第十二卷 第二期 ★Vol.12 No.2
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
收稿日期：2009-09-10
修回日期：2009-11-15
＊ 广东省教育部产学研项目（03032）：注射用黄金菊的研发，负责人：张贵君。
＊＊ 联系人：韩茹，2007届硕士研究生，主要研究方向：中药药效组分质量标准体系研究，E-mail：hanru88@163.com；张贵君，教授，博士生导师，
主要研究方向：中药鉴定方法学、组分中药及中药药效组分质量标准体系研究，Tel：010-84738624，E-mail：guijunzhang@163.com。
注射用黄金菊冻干粉针质量标准研究＊
□韩 茹＊＊ 张贵君＊＊ 张春晖 崔萌萌
（北京中医药大学中药学院 北京 100102）
摘 要：目的：建立注射用黄金菊（冻干）的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别处方中 4种药
效组分；并用 RP-HPLC 法对制剂中的 4 种药效组分进行定量分析。色谱柱：Agela Venusil HPLC
Clumns（4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.6%磷酸水（12∶88～30∶70）；检测波长：340nm。结果：薄层
色谱斑点清晰，阴性无干扰。黄芩苷在 1.652～9.912μg范围内线性关系良好，平均回收率为 99.59%;绿
原酸在 0.1096～0.6576μg 范围内线性关系良好，平均回收率 99.39%；荭草苷在 0.1944～1.164μg 范围
内线性关系良好，平均回收率为 99.13%；牡荆苷在 0.0472～0.2832μg 范围内线性关系良好，平均回收
率为 99.19%。结论：本方法简便易行，可有效地控制黄金菊粉针质量。
关键词：注射用黄金菊 质量标准 药效组分 TLC RP-HPLC
doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2010.02.019
注射用黄金菊冻干粉针是在药效组分理论指导
下，由临床经验方提升而得的现代制剂，由金莲花、黄
芩、野菊花 3味中药效组分组成，依据体外抑菌试验
和体内代谢试验筛选出 4种药效组分，此药效组分具
有明确的量和比例关系[1]。该制剂具有清热解毒的功
效[2]。可用于急慢性扁桃体炎、咽炎、上呼吸道感染的
临床治疗。本文依据其药效组分的性质，应用薄层色
谱和高效液相色谱分别对注射用黄金菊进行了定性
鉴别和定量测定，为该制剂的质量控制提供依据。
一、材料与仪器
Agilent1100 高效液相色谱仪（HP 真空脱气泵，
HP 四元泵，HP 自动进样，HP 柱温箱，HPDAD 检测
器）；色谱柱 :Agela Venusil HPLC Clumns（4.6mm×
250mm, 5μm)；BP110S电子分析天平；岛津 VW-2000
型紫外全波长扫描仪。
注射用黄金菊（自制，批号：080701，080702，
080703）；黄芩苷对照品 (批号：110715-200815)，荭草
苷对照品 (批号：111777-200801)，牡荆苷对照品 (批
号：111687-200501)，绿原酸 (批号：110753-200413)，
以上对照品均购自中国药品生物制品检定所。乙腈、
甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为屈臣氏纯净水。
二、方法与结果
1. TCL同时鉴别 4种药效组分
（1）混合对照溶液的制备。
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
取绿原酸、黄芩苷、荭草苷和牡荆苷对照品适
量，用甲醇制成每毫升含 2mg的标准对照液。
（2）供试品溶液的制备。
取样品 60mg，加甲醇 3mL，振摇 1min，作为供试
品。
（3）各组分阴性对照溶液的制备。
按照注射用黄金菊处方，除去被检药材，按工艺
分别制成阴性对照液。
（4）展开方法及条件。
照薄层色谱法《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ
B 试验 [3]，吸取上述溶液各 10μL，分别点于同一聚酰
胺薄膜上，以乙酸乙酯-乙醇-水-冰醋酸（6∶2∶0.5∶
0.2）混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光
灯(365nm)下观察，供试品色谱在与对照品色谱相应
的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性样品无干
扰。
（5）结果。
置紫外光灯(365nm)下观察，供试品色谱在与对
照品色谱相应的位置上，依次显相同颜
色的暗紫色荧光斑点（黄芩苷）、亮蓝色
荧光斑点（绿原酸）、黄绿色荧光斑点
（荭草苷和牡荆苷 Rf值不同），阴性样
品无干扰（见图 1~4）
2. HPLC 同时测定 4 种有效组分
含量
（1）色谱条件。
色谱柱:Agela Venusil HPLC Clumns
（4.6mm×250mm，5μm)；流动相 A 相为
0.6%磷酸水，B相为乙腈，进行梯度洗
脱；0～30min，12%～21%，30min～60min，
21%～30%；检测波长为 340nm；流速为
1.0mL·min-1；柱温为 25℃，见图 5~6。
（2）混合对照品溶液的制备。
精密称取绿原酸对照品（室温减压
干燥 4h）1.37mg、荭草苷对照品 2.43mg、
牡荆苷对照品0.59mg，置 5mL 容量瓶
中，加甲醇适量，超声 5min使溶解并稀
释至刻度；精密称取黄芩苷对照品（室
温减压干燥 4h）4.13mg，置 5mL容量瓶
中，分别精密量取绿原酸对照品溶液、
荭草苷对照品溶液、牡荆苷对照品溶液
各 1mL至容量瓶中，加甲醇定容至刻
度。即得绿原酸、荭草苷、牡荆苷、黄芩苷浓度分别为
0.0548mg·mL -1、0.0972 mg·mL -1、0.0236 mg·mL -1、
0.826mg·mL-1的混合对照品溶液。
（3）供试品溶液的制备。
精密称取注射用黄金菊冻干粉 300mg，置 100mL
容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，经
0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
（4）线性关系考察。
精密吸取混合对照组分溶液 2μL、4μL、6μL、
8μL、10μL、12μL，按上述色谱条件测定峰面积，以对
照品溶液质量浓度（ug·μL-1）为横坐标，对照品峰面
积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，结果见表 1。
（5）精密度试验。
精密吸取混合对照品组分溶液 10μL，重复进样 6
次，按峰面积计算，绿原酸峰面积平均值 RSD=0.03%，
荭草苷峰面积平均值 RSD=0.07%，牡荆苷峰面积平均
值 RSD=0.15%，黄芩苷峰面积平均值 RSD=0.29%，结
果表明，仪器精密度良好，符合定量分析要求。
图 1 缺牡荆苷 TLC图谱
1. 牡荆苷对照品；2，3，4. 供试品；
5，6． 混合对照品；7，8. 阴性对照。
图 2 缺黄芩苷 TLC图谱
1. 黄芩苷对照品；2，3，4. 供试品；
5，6． 混合对照品；7，8. 阴性对照。
1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8
图 3 缺绿原酸 TLC图谱
1. 绿原酸对照品；2，3，4. 供试品；
5，6． 混合对照品；7，8. 阴性对照。
1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8
图 4 缺荭草苷 TLC图谱
1. 荭草苷对照品；2，3，4. 供试品；
5，6． 混合对照品；7，8. 阴性对照。
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2010 第十二卷 第二期 ★Vol.12 No.2
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图 5 种混合标准品 HPLC色谱图
1.绿原酸；2.荭草苷；3.牡荆苷；4.黄芩苷。
图 6 注射用黄金菊冻干粉针 4种药效组分 HPLC色谱图
1.绿原酸；2.荭草苷；3.牡荆苷；4.黄芩苷。
（6）稳定性试验。
精称称取供试品，按供试品的溶液
的制备项下方法制备供试品溶液，室温
放置，分别在 0h，0.5h，1.0h，2.0h，4.0h，
6.0h，8.0h 按“色谱条件”项下进行分析
测试，结果表明，供试品溶液在 8h内稳
定；绿原酸、荭草苷、牡荆苷、黄芩苷
RSD依次分别为 0.02%、0.10%、0.43%、
1.69%。
（7）重现性试验。
精密称取同一批号供试品 6份，按
供试品溶液制备项下方法制备供试品溶
液，按色谱条件项下测定供试品含量，结
果绿原酸含量平均值 RSD=0.74%，荭草
苷含量平均值 RSD=0.56%，牡荆苷含量
平均值 RSD=1.58%，黄芩苷含量平均值
RSD=0.63%，表明方法重现性较好。
（8）加样回收率试验。
精密称取已知含量的供试品 3份，
分别精密加入各对照品适量，按供试品
的溶液的制备项下方法制备供试品溶
液，按色谱条件项下进行分析测试，结
果见表 2。
（9）样品含量测定。
取 3批样品，每批重复测定 3个样
品取其平均值，制备供试品溶液，精密
吸取 10μL，分别进样，测定峰面积，以
外标法计算样品中绿原酸、荭草苷、牡
荆苷和黄芩苷含量，结果见表 3。
三、讨 论
本实验建立了 4 种药效指标成分
同时鉴定的薄层色谱方法，其专属性较
强，斑点清晰，重现性较好，灵敏度高；
采用同一测定条件，进行 4种药效指标
成分的含量测定，缩短了检测时间，节
约了检测成本。方法学考察表明，这些
方法在较大范围内线性关系良好，4 种
药效指标成分含量均在线性范围之内，
且此方法具有较好的精密度、稳定性、
重现性和回收率。
色谱条件选择时，曾考察过甲醇-
mAU
100
80
60
40
20
0
0 10 20 30 40 50 min
1 2
3
4
9.
87
4
18
.7
68
22
.3
95
44
.9
12
mAU
100
80
60
40
20
0
0 10 20 30 40 50 min
1
2
3
4
43
.9
45
22
.3
45
18
.7
12
9.
82
3
表 1 4种对照组分线性回归方程（n=6）
组分 回归方程 r 线性范围（ug）
绿原酸 Y=1027.3x + 11.903 r = 0.9999 0.1096～0.6576
荭草苷 Y=657.78x + 9.8859 r = 0.9997 0.1944～1.164
牡荆苷 Y=1008x + 5.9574 r = 0.9995 0.0472～0.2832
黄芩苷 Y=196.31x - 196.18 r = 0.9999 1.652～9.912
表 2 4种有效组分的加样回收率（n=3）
称样量
（g）
样品含量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均值
（%）
RSD
（%）
0.043 0.389 0.358 0.746 99.61 99.59 0.22
绿原酸 0.045 0.408 0.362 0.769 99.8
0.041 0.376 0.213 0.588 99.35
荭草苷 0.045 0.510 0.571 1.079 99.73
0.043 0.090 0.521 0.607 99.21 99.13 0.54
牡荆苷 0.045 0.095 0.475 0.563 98.56
0.043 7.221 1.268 8.483 99.53 99.19 0.42
黄芩苷 0.045 7.582 1.023 8.592 98.72
0.041 6.975 1.532 8.496 99.31
0.043 0.486 0.457 0.938 98.97 99.39 0.39
0.041 0.469 0.443 0.909 99.48
0.041 0.087 0.551 0.636 99.63
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
水、甲醇-0.6%磷酸水与乙腈-0.6%磷酸水不同梯度
的流动相，最终实现现在的梯度，此条件下黄芩苷，
荭草苷和牡荆苷的保留时间适中，
分离效果好。
参考文献
1 张贵君.中药研究的误区与创新研发的新思
路.中国中药杂志，2007，32（13）∶1367~1369.
2 尹秀丽，张贵君.HPLC法测定黄金菊含片和胶
囊中荭草苷.中药材，2006，37（7）∶1024~1025.
3 国家药典委员会.中国药典 2005年版一部.2005，附录ⅥB.
表 3 样品含量测定
批号
绿原酸含量 荭草苷含量 牡荆苷含量 黄芩苷含量
/mg·mg-1 RSD/% /mg·mg-1 RSD/% /mg·mg-1 RSD/% /mg·mg-1 RSD/%
01 8.623 1.61 6.854 0.19 1.047 1.04 128.183 2.01
02 8.570 0.83 6.805 0.22 1.139 0.75 121.204 1.86
03 8.589 1.20 6.833 0.64 0.983 1.42 119.525 0.97
（责任编辑：李沙沙，责任译审：张立崴）
The Quality Standard for Huangjinju Injections
Han Ru， Zhang Guijun， Zhang Chunhui， Cui Mengmeng
（School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China）
Abstract: This study aimed to establish the quality standard of Huangjinju Injection. An RP-HPLC method was de-
veloped for the quantitative determination of four components baicalin，chlorogenic acid，orientin and vitexin in
Huangjinju Injection. The analysis was performed on an Agela Venusil HPLC Column （4.6 mm×250 mm, 5 μm) us-
ing isocratic elution with the mobile phase consisting of acetonitrile, water and 0.6%phosphoric acid （12∶88~30∶70）
at 340 nm． The TLC sports developed were clear, and the blank test showed no interference. A good linear rela-
tionship was obtained with a correlation coefficient >0.999， ranging from 1.652 to 9.912 μg for baicalin, from
0.1096 to 0.6576 μg for chlorogenic acid, from 0.1944 to 1.164 μg for orientin, and from 0.0472 to 0.2832 μg for
vitexin． The recoveries were respectively 99.59％ , 99.39％ , 99.13％ and 99.19％ , with RSD below 0.6％ . This
method is simple, reliable and accurate, and may be usable for the quality evaluation of Huangjinju Injection ．
Keywords: Huangjinju Injection, Quality standard, Active components alignment, TLC, RP-HPLC
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