全 文 ：基础研究
黄皮果提取物的解酒及护肝作用研究
黄泽伟1，程江凤1，蔡珊1，林美金1，卢瑞荣1，吴科锋2，李文德2，3，*，黄韧4
（1.广东医学院第一临床学院，广东湛江 524023；2.广东天然药物研究与开发重点实验室，广东湛江 524023；
3.广东医学院药理学教研室，广东湛江 524023；4.广东省实验动物监测所，广东广州 510260）
摘 要：观察黄皮果提取物对小鼠酒精中毒解酒及护肝作用。建立酒精中毒模型，选取 ICR小鼠 40只, 随机分为
4 组分别为正常组、模型组、黄皮果提取物低剂量组（5 g/kg）、黄皮果提取物高剂量组（10 g/kg）。实验组给予相应剂
量的提取物，正常组和模型组给予等量生理盐水 30 min后，正常组灌以相应的生理盐水量，其余各组分别用二锅头
白酒 0.12 mL/10 g灌胃。观察并记录黄皮果提取物对小鼠攀附时间、醉酒率、醉酒潜伏时间、持续醉酒时间及肝组织
形态的影响。并检测小鼠血清中丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乙醇脱氢酶（ADH）的水平。
与模型组相比，酒前灌黄皮果提取物各剂量组均可显著降低小鼠醉酒率、延长醉酒潜伏时间及小鼠的攀附时间（P＜
0．05），各剂量组均能降低小鼠持续醉酒时间，但仅高剂量组有显著差异性。同时各剂量组可明显降低 ALT的水平及
促 ADH水平升高，且差异有显著性（P＜0．05），但对 AST的影响不明显。病理结果显示，与模型组相比，黄皮果提取物
各剂量组对由酒精引起的肝细胞变性、坏死，炎细胞浸润均有明显改善。黄皮果提取物能明显改善乙醇致急性肝损伤。
关键词：黄皮果提取物;酒精中毒;解酒；护肝
Effect of the Extract from Fruit of Chinese Wampee for Antialcoholism and Liver Protection
HUANG Ze-wei1, CHEN Jiang-feng1, CAI Shan1, LIN Mei-jin1, LU Rui-rong1, WU Ke-feng2, LI Wen-de2, 3, *,
HUANG Ren4
（1.The First Clinical Medical School, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, Guangdong, China; 2.Guangdong
Key Laboratory for Research and Development of Natural Drugs, Zhanjiang 524023, Guangdong, China; 3. Pharmacology
Department of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, Guangdong, China; 4. Guangdong Laboratory Animal
Monitoring Institute,Guangzhou 510620, Guangdong, China）
Abstract：Observed the antialcoholism and liver protection on alcoholism mice of the extract from Fruit of
Chinese Wampee(FCW). Alcoholism model was established to use redstarwine,which alchohol content was 52 %
by volume. Forty ICR mice were divided randomly into four groups: blank, model, FCW-low dosage (5 g/kg) and
FCW-high dosage (10 g/kg). FCW dosages were administrated the extract of FCW,while normal and model
groups were administrated equal volume normal saline.Thirty minutes later, 0.12 mL/10 g ethanol was
administrated to each animal except the blank group which was given equal volume normal saline.The climbing
time, the rate of drunkenness, the durative time of drunkenness, the latent time of drunkenness were calculated
in all groups. And the content of ALT, AST and ADH were detected in serum. Compared to model group, both
FCW dosages could significantly reduce the rate of drunkenness and raise the latent time of drunenness,the
climb time (P<0.05). For the durative time of drunkenness,only the FCW-high dosage significantly reduced less
than the model group (P <0.05). Both FCW dosages more significantly downregulated the level of ALT and
upregulated the level of ADH than the model group. The severe hepatic lesions as well as neutrophilic infiltration
and ballooning degenerations of hepatocytes induced by ethanol were considerably reduced in FCW groups by
pathological examination. The extract of FCW could reduce acute liver injury induced by ethanol.
Key words：FCW; alcoholism; antialcoholism; liver protection
基金项目：广东省科技计划项目（2012B040304013）；广东医学院大学生创新实验项目（09ZZF010）；广东省大学生创新实验项目（KY1085）
作者简介：黄泽伟（1986—），男（汉），在读本科生，专业：临床。
*通信作者：李文德（1977—），副教授，硕士，主要从事天然产物药理学研究。
食品研究与开发
Food Research And Development
2012年 9月
第 33卷第 9期
33
长期过量或一次性大量摄入酒精引起的酒精中
毒及并发症已严重影响了人们的正常生活，据统计在
欧美国家，酒精中毒是位列心血管疾病、肿瘤之后占
第 3位的公共卫生问题，美国一般人群的终生患病率
高达 18 ％，且有超过 20 %的入院病人是由于滥用酒
精致的急性中毒所引起的[1-2]。我国是酒精的生产和消
费大国，由饮酒引起的酒精中毒患者数量巨大，因此
开发有效防醉酒、醒酒及护肝的药物及保健食品受到
医药及食品行业的普遍重视。芸香科黄皮属黄皮
（Clausena lansium），果实具有健脾开胃、行气解郁之功
效，现代药理学研究也发现了其中的有效成分黄皮酰
胺有抗衰老、保肝解毒和促智的作用[3-5]。本研究拟通
过小鼠酒精中毒动物模型观察黄皮果提取物在防醉
及保肝方面的作用,并为将其开发为解酒护肝产品提
供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料
健康 ICR种小鼠，雌雄各半，体重 24 g～28 g，均为
清洁动物，检疫合格，由广东省实验动物中心提供。52°
二锅头白酒为北京红星酒业有限公司产品；752N紫外
可见分光光度计：上海精科；T－500型电子天平：常熟
双杰测试仪器；台式离心机：上海安亭科学仪器公司；
ALT、AST、ADH酶试剂盒：南京建成生物工程研究所；
酶标仪：BIO-TEX ELX800。
1.2 方法
1.2.1 黄皮果提取物的制备
烘干、粉碎后称取适量黄皮果，分别以 60℃和 90℃，
水煎 3次，按 1∶1混合，并浓缩成含生药量 1 g/mL供试
品备用，用时分别配成含生药 5、10 g/kg进行实验。
1.2.2 小鼠给酒剂量的选择
36只 ICR小鼠随机分为 6组，每组 6只，雌雄各半，
实验前禁食 12 h，自由饮水，实验时分别从 0.11mL/10 g～
0.16 mL/10 g不同剂量的白酒（52°红星二锅头）分别对
6组小鼠进行灌胃，每组 6只。观察记录小鼠醉酒数
量。醉酒与否以翻正反射（ lost of righting reflex, LOR）
是否消失为判断指标,小鼠灌酒后,将其背向下轻轻放
在动物笼内，若动物背向下的姿势保持 20 s以上，则
认为翻正反射消失，即为醉酒，反之为不醉。
1.2.3 黄皮果对小鼠醉酒的影响
选取小鼠 40只，雌雄各半，随机分为 4 组，每组
10只,随机分成：正常组、模型组、黄皮果提取物低剂量
组（生药 5 g/kg）、高剂量组（生药 10 g/kg）。各实验组给
予相应的药物 30 min后，空白组灌以等量的生理盐水,
其余各组分别灌胃实验用酒 0.12 mL/10 g，分别记录小
鼠醉酒数量、攀附时间（灌服酒后，然后立即将小鼠放
在垂直的金属网上，观察小鼠活动情况并记录各小鼠
攀附在网上的时间），醉酒潜伏时间（从灌酒到翻正反
射消失的时间）及持续醉酒时间（从翻正反射消失到
清醒的时间）。
1.2.4 生化指标检测
灌酒 6 h后用眶静脉采血，处死小鼠，3 000 r/min
离心 10 min，分离血清，-20 ℃冰箱保存，按照试剂盒
说明方法检测血中 ALT、AST、ADH。
1.2.5 肝组织病理变化观察
处死小鼠后迅速剖腹取出肝脏，取部分肝组织用
10 %福尔马林固定 36 h后，HE染色，观察小鼠肝组织
形态。
1.2.6 统计学处理
所有数据均以 x±s表示，并采用 SPSS 13.0统计软
件进行数据整理和统计，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 食用酒精灌胃制备小鼠酒精中毒动物模型
不同酒精摄入量对小鼠醉酒状况的影响见表 1。
分别给小鼠灌胃白酒 0.11、0.12、0.13、014、0.15、
0.16 mL/10 g，记录 30 min内小鼠醉酒数，实验结果表
明 0.12 mL/10 g组 6只全部醉倒而都没有醉死，因此
0.12 mL/10 g为较佳致醉量。
2.2 黄皮果提取物对酒精中毒小鼠醉酒效果的影响
黄皮果提取物各剂量组防醉结果见表 2。
表 2 黄皮果提取物对小鼠醉酒率、醉酒潜伏时间、持续醉酒
时间(n=10)
Table 2 Effect of the astract from FCW on the rate of
drunkenness, latent time of drunkenness and durative time of
drunkenness(n=10)
组别 醉酒数
醉酒率/
%
攀附时间/
min
醉酒潜伏时间/
min
持续醉酒时间/
min
模型组 10/10 100 1.62±0.22 34±5 161±18
黄皮果低剂量组 8/10 80 2.42±0.27* 40±14 119±17*
黄皮果高剂量组 7/10 70 5.5±0.58* 56±8* 102±14*
注：*表示 vs模型组 P<0.05。
表 1 不同酒精用量对小鼠醉酒情况的影响(n=6)
Table 1 Effect of different dosage of alcohol on the rate of
drunkenness(n=6)
剂量/（mL/10 g） 醉酒率/% 存活率 死亡率/%
0.11 66.7 6/6 0
0.12 100 6/6 0
0.13 100 6/5 16.7
0.14 100 6/4 33.3
0.15 100 6/4 33.3
0.16 100 6/3 50
基础研究黄泽伟，等：黄皮果提取物的解酒及护肝作用研究
34
与模型组相比，灌酒前 30 min给予不同浓度的黄
皮果提取物,均可降低小鼠醉酒发生率、延长攀附时间
及缩短小鼠持续醉酒时间，且有统计学意义（P<0.05），
尽管给药组均发现可明显延长小鼠醉酒潜伏时间，仅
高剂量组对延长醉酒潜伏时间的差异有显著性（P＜0．05）。
2.3 黄皮果提取物对小鼠血清中 ALT、AST、ADH 水
平的影响
黄皮果提取物各剂量组对小鼠血清中 ALT、AST、
ADH水平的影响见表 3。
与正常组相比，模型组 ALT和 AST水平明显升高
（P<0.05），说明大剂量的酒精摄入可使肝功能受损。黄
皮果提取物高、低剂量组与模型组相比均可明显降低
小鼠血清 ALT水平（P<0.05），但对 AST的水平影响不
明显，同时各实验组均可升高 ADH水平且差异有显
著性（P<0.05）。
2.4黄皮果提取物对小鼠肝组织病理变化的影响
HE染色光镜下观察不同组别小鼠的肝组织形态
的结果见图 1。
结果显示：正常组小鼠肝细胞无明显变性、坏死，
无炎细胞浸润；模型组小鼠肝脏可见肝小叶中央静
脉、汇管区周围有大量肝细胞水样变，肝细胞脂肪样
变明显，可见炎细胞浸润；与模型组相比,黄皮果提取
物高剂量组与低剂量组肝细胞水样变、脂肪样变以
及炎细胞浸润均有明显改善，其中以高剂量组效果更
显著。
3 讨论
醉酒状态是酒精中毒的一个特征指标，是由于过
量摄入乙醇，超过了机体氧化酒精的速度，而产生的
蓄积中毒。目前已证实乙醇及其代谢产物乙醛具有强
烈的脂质过氧化反应和毒性，严重损伤肝细胞及心肌
细胞，导致肝功能及心肌功能下降[6-7]。因此，通过降低
乙醇在体内的蓄积或加快乙醇在体内的代谢可防止
酒精中毒的发生，也是解酒防醉的治疗原则。实验结
果显示，与模型组相比，酒前灌黄皮果提取物可显著
降低小鼠醉酒率、持续醉酒时间、延长醉酒潜伏时间
及小鼠的攀附时间，这说明黄皮果提取物有明显的防
醉效果。
肝损伤的一个重要标志就是生化指标的变化，正
常肝内 ALT含量约为血中的 100倍，当肝脏实质性损
害时，只要有 1 %的肝细胞坏死，就可使血清活性增加
1倍；当细胞膜通透性增加时，即使无坏死，肝细胞内
的转氨酶也可以顺浓度差而释放入血。因此转氨酶是
肝细胞损害的敏感标志，也是乙醇所致肝损伤最敏感
的指标[7]。本实验结果显示,模型组中 ALT比正常组显
著升高，而各剂量黄皮果提取物组可使 ALT有明显的
下降，表明对肝细胞有保护作用，这与 HE染色观察到
的结果相符，其中模型组肝细胞出现明显的变性、坏死
区域，而黄皮果提取物低、高剂量组肝细胞形状无明
显变性坏死区域。而 AST则以心肌含量最高，其次为
肝脏，只有当肝细胞受到明显损伤，尤其是线粒体损
伤时才释放到血中，因此 AST提示肝细胞损伤严重[8]。
实验中测得的用药组 AST水平与模型组相比降低不
如 ALT明显，是否说明酒精中毒不仅引起肝损伤，同
时也损伤了心肌细胞导致大量的 AST释放入血，而提
取物对心脏功能无明显保护作用，这需要进一步实验
证实。
乙醇脱氢酶（ADH）是人体分解乙醇的主要酶类，
主要分布于肝脏，ADH分解酒精的速度主要与 ADH
的量有关[9]，血清中 ADH的水平可以反映体内酒精代
谢的情况，目前大部分解酒药物也正是基于这一机制
开发的。与正常组比较，模型组小鼠肝组织 ADH活性
有所升高，而低、高剂量组与模型组相比的 ADH有明
表 3 黄皮果提取物对小鼠血清中 ALT、AST、ADH水平的
影响(n=10)
Table 3 Effect of the extract from FCW on the level of ALT, AST
and ADH in serum(n=10)
组别 ALT（OD） AST(OD) ADH(OD)
正常组 0.206±0.011 0.236±0.013 0.438±0.025
模型组 0.252±0.016 0.271±0.017 0.552±0.108
黄皮果低剂量组 0.227±0.023* 0.262±0.015 0.743±0.085*
黄皮果高剂量组 0.215±0.004* 0.257±0.023 0.821±0.116*
注：*表示 vs模型组 P<0.05。
A：正常组 B：模型组
C：低剂量组 D：高剂量组
图 1 黄皮果提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的影响
（HE染色×400）
Fig.1 Effect of the astract from FCW on the acute liver injury
基础研究 黄泽伟，等：黄皮果提取物的解酒及护肝作用研究
35
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
显的上升，表明黄皮果提取物组可以诱导 ADH活性
增强、促进乙醇的代谢,加速乙醇的排除体外,降低血
清乙醇浓度。这可能与黄皮果提取物内存在能增强
ADH活性的相关物质如黄皮酰胺类等，但其相关机制
尚未明确，需作进一步研究。
参考文献：
[1] McCarty C A, Ebel B E, Garrison M M,et al. Continuity of binge and
harmful drinking from late adolescence to early adulthood [J].
Pediatrics,2004,114(3):714-719
[2] Malyutina S,Bobak M,Kurilovitch S,et al.Trends in alcohol intake
byeducation and marital status in urburn population Russian
between mid 1980s and the mid1990s[J].Alcohol alcoholism,2004,
39(1):64-69
[3] 潘瑞乐,朱兆仪.黄皮属药用植物研究进展[J].国外医药-植物药
分册,1990,5(6):243-247
[4] Liu G T,Li W X,Chen Y Y, et al. Heptaoproteetive action of nine
constituents isolated from the leaves of Clausena lansium in mice[J].
Drug Develop Res,1996,39(2):174- 178
[5] 张均田,段文贞,刘少林,等.(-)黄皮酰胺的抗老年痴呆作用[J].医
药导报,2001,20(7):403-404
[6] E Wilson, W S Waring. Severe hypotension and hypothermia caused
by acute ethanol toxicity[J]. Emerg Med J,2007,24(7):1-2
[7] Angela Dolganiuc, Gyongyi Szabo. In vitro and in vivo models of
acute alcohol exposure[J]. World J Gastroenterol,2009,15(10): 1168-
1177
[8] 乔光彦.病毒性肝炎与肝功能异常[J].小儿急救医学,2004,11(6):
418-420
[9] Luisa Vonghia, Lorenzo Leggio, Anna Ferrulli, et al. Acute alcohol
intoxication[J].European Journal of Internal Medicine,2008,19:561-
567
收稿日期：2012-04-07
基础研究
罗汉果蛋白酶的分离纯化和部分性质研究
周先丽1，梁成钦1，徐庆1，刘国雄2，苏小建2，*
（1.广西桂林医学院，广西桂林 541004；2.广西师范大学环境与资源学院，广西桂林 541004）
摘 要：对罗汉果蛋白酶的分离纯化和部分性质进行研究。利用硫酸铵盐析、离子交换和凝胶过滤柱层析对罗汉果蛋
白酶进行了分离纯化，对纯化所得的酶进行了分子量和等电点测定。结果表明，纯化酶为电泳纯，回收率为 4.2 %，纯
化倍数为 31.1，凝胶过滤层析和 SDS-PAGE电泳测得酶的分子量分别为 40.3 ku和 39.0 ku，等电聚焦电泳测得其等
电点为 8.55。
关键词：罗汉果；蛋白酶；纯化；性质
Study on the Seperation, Purification and some Properties of the Protease from the Fruits of Siraitia
Grosvenorii
ZHOU Xian-li1, LIANG Cheng-qin1, XU Qing1, LIU Guo-xiong2, SU Xiao-jian2, *
（1. Guilin Medical College, Guilin 541004, Guangxi, China; 2. College of Environment and Resources of Guangxi Normal
University, Guilin 541004, Guangxi, China）
Abstract：To study the seperation, purification and some properties of the protease from the fruits of siraitia
grosvenorii. The protease was purified by using ammonium sulfate precipitation, ion exchange and gel filtration
chromatography. At the same time, molecular weight and isoelectric point of the purified protease were also
基金项目：广西教育厅专利资助项目（桂教科研［2008］27号）
作者简介：周先丽（1979—），女（汉），助理研究员，硕士，研究方向：药理学研究。
*通信作者：苏小建（1957—），男（回），教授级高级工程师，学士，研究方向：天然产物化学。
食品研究与开发
Food Research And Development
2012年 9月
第 33卷第 9期
36