全 文 ：检验检测
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茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌
核。其味甘、淡、平、归肺、胃、肾经。具有利水渗湿,健脾宁心的功效。用
于水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠[1]。
茯苓酸为四环三萜酸,是茯苓中的主要活性成分之一[2～3],具有增强
人体免疫力、抗癌、增强胰岛素的分化诱导及止吐等作用。文章采用
高效液相色谱法,建立了茯苓与茯苓皮含量测定方法,并对不同栽
培条件茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量进行比较,为茯苓与茯苓皮的质
量评价提供依据。
1 仪器与试药
LC200高效液相色谱仪(美国PE);PL-203电子天平(瑞士);
HUMANpowerl(Scholar)纯水/超纯水系统(韩国);SK-18TC超声
波清洗器。
试剂乙腈为色谱,纯水为自制高纯水,其他试剂均为AR。茯苓
酸对照品由北京恒元启天化工技术研究院提供(12101202供含量测
定用)。
普洱市栽培茯苓与茯苓皮中茯苓酸的含量测定
郭芬1 马巾媛1,2 李维峰1 杨竹雅2
(1.云南热带作物职业学院 云南普洱 665000;2.云南中医学院 云南昆明 650500)
摘要:目的:建立茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量的测定方法,比较不同栽培条件的茯苓与茯苓皮中茯苓酸的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,色
谱柱为DiamonsilC18,4.6×250nm,5um);乙腈-0.4%乙酸(85:15)为流动相;流速为1mL/min;检测波长为206nm,柱温25℃。结果 :茯苓酸在0.49ug～5.88ug
范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系, r=0.9997,平均回收率96.94,RSD=1.97%。结论: 该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓及茯苓皮中茯苓酸的含量
测定。
关键词:茯苓 茯苓皮 茯苓酸 反相高效液相色谱法 含量测定
中图分类号:TQ461 文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2014)11-0004-02
Abstract:purpose:The skins of poria cocos and poria peel poria cocos acid content determination method, to compare different cultivation conditions of
poria cocos and tuckahoe of poria cocos acid content in the skin. Methods:using reversed-phase high performance liquid chromatography, chromatography
column for DiamonsilC18, 4.6 x 250 nm, 5 um); Acetonitrile and 0.4% acetic acid (85:15) as mobile phase; The flow rate of 1 ml/min; Detection wavelength of
206 nm, column temperature 25 ℃. Results:poria cocos acid in ug 0.49 ~ 5.88 ug mu g range had good linear relationship with its chromatographic peak area,
r = 0.9997, the average recovery of 96.94, RSD = 1.97%. Conclusion the method is simple, exclusive and stable, and can be used for the skins of poria cocos and
poria cocos poria cocos acid content determination.
Key words:Poria cocos poria peel Poria cocos acid reversed phase high-performance liquid chromatography Content determination
作者简介:郭芬(1967—),女,硕士,副教授,主要从热作加工和高职教育研究。
图1 茯苓酸对照品的HPLC图谱 图2 茯苓药材的HPLC图谱
编号 栽培方法 产地 茯苓中含量（%） 茯苓皮中含量（%）
1 野生 云南省普洱市江城县 0.0842 0.1315
2 野生 云南省普洱市思茅区 0.0756 0.1309
3 树桩栽培第一次采收 云南热带作物职业学院试验地 0.0639 0.1032
4 树桩栽培第二次采收 云南热带作物职业学院试验地 0.0577 0.0954
5 段木 云南省普洱市景谷县小黑江 0.0662 0.1029
6 段木 云南热带作物职业学院试验地 0.0623 0.1206
7 段木 云南省普洱市宁洱县德化乡 0.6055 0.1118
表2 样品含量测定结果(n=3)
样品名 样品中含量（m g） 加入量（m g） 测得总量（m g） 回收率（%） 平均回收率 RSD（%）
1
2
3
4
5
0.5849
0.5831
0.5822
0.5798
0.5801
0.588
0.588
0.588
0.588
0.588
1.1449
1.1608
1.1677
1.1463
1.1406
95.23
98.24
99.58
96.34
95.31
96.94 1.97


表1 回收率试验结果
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茯苓药材采自云南热作学院实验地,宁洱,景谷。由中科院购买
的菌种5.78栽培而来。
2 方法与结果
2.1 色谱条件的选择[4～6]
用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂(DiamonsilC18,4.6×
250nm,5um);柱温25℃ 乙腈-0.4%乙酸(85:15)为流动相;流速
1mLmin-1;206nm检测。此条件下,茯苓酸和样品中的其它物质可以
达到良好的分离。(见图1、图2)。
2.2 对照品溶液制备
精密称取茯苓酸对照品4.9mg,用甲醇溶解并定容于10mL容量
瓶中,摇匀。即配制得0．49mg/mL的茯苓酸对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备[7]
取茯苓粉末(60目)约2g,精密称定,置100ml具塞锥形瓶中加入
甲醇20ml超声处理90分钟(中途补充损失的甲醇),取出,放冷,过滤;
用微孔滤膜(0.45ul)滤过,即得。
2.4 线性关系的考察
在上述同样色谱条件下分别精密吸取对照品溶液(0.49mg/
mL)2ul、4ul、6ul、8ul、10ul注入高效液相色谱仪,测定峰面积。结果
见表。以峰面积为横坐标茯苓酸进样质量为纵坐标,绘制标准曲线
并计算回归方程:Y=2.059×10-6-0.121146,r=0.9997。结果表明茯
苓酸在0.49ug-5.88ug范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取同一批样品溶液10μL,重复进样6次,测定茯苓酸峰
面积积分值,结果RSD＝0.92%(n＝5),表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一样品溶液,分别在0min、2h、4、6h、12h、24h进样
20ul,记录峰面积,计算RSD值,RSD=0.88%,结果见表明供试品溶
液在24h内稳定。
2.7 重现性性试验
精密称定同一批茯苓药材粉末5份,按供试品液制备方法处理,
在上述同一色谱条件下,分别进样20ul随行标准品测定药材中茯苓
酸含量,RSD=1.33%,结果表明,此方法重现性好。
2.8 回收率试验
精密称定已知含量的茯苓粉末约2g(40目),精密称定,置25ml容
量瓶中,分别加入近等量的茯苓酸对照品,按照供试品溶液项下规定
制备。进样20ul,按上述色谱条件进样测定,计算其回收率,结果见表1。
结果表明在本方法中对照品的回收率为95.23～99.58,
RSD=1.97,回收率良好,符合规定。
2.9 样品含量测定
采用上述色谱条件,按1.4.2项下制备供试品溶液,分别对茯苓
药材进行HPLC分析,实验结果见表2。
实验结果表明,不同栽培方法、不同产地茯苓和茯苓皮中茯苓
酸的含量不一样。不同栽培方法下茯苓中茯苓酸的含量:野生＞段
木栽培＞树桩原地栽培;不同产地茯苓中茯苓酸的含量(段木栽培):
云南省普洱市景谷县小黑江＞云南热带作物职业学院试验地＞云
南省普洱市宁洱县德化乡;茯苓皮中茯苓酸的含量明显高于茯苓中
的含量,其中不同栽培方法下茯苓皮中茯苓酸的含量:野生＞段木
栽培＞树桩原地栽培;不同产地茯苓皮中茯苓酸的含量(段木栽培):
云南热带作物职业学院＞云南省普洱市宁洱县德化乡＞云南省普
洱市景谷县小黑江,树桩栽培茯苓和茯苓皮中茯苓酸的含量均为第
一次采收＞第二次采收。
3 讨论
茯苓皮中茯苓酸的含量是茯苓中的2倍左右。由于茯苓皮价格
远低于茯苓,在生产中大量茯苓皮被丢弃,造成资源的极大浪费,本
研究结果对合理利用茯苓皮资源,具有较大意义。
通过本论文的研究建立了茯苓酸的含量测定方法,该方法重复
性好,可靠性强,完善了《中华人民共和国药典》2010年版(一部)茯苓
项下的质量标准,为再版药典补充茯苓药材质量标准“含量测定”内
容提供了依据。这对于进一步有效控制茯苓药材的质量具有重要意
义。
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