全 文 ：中国药物与临床 2014年 5月第 14卷第 5期 Chinese Remedies & Clinics，May 2014,Vol.14,No.5
能力和还原能力，说明抗氧化成分在用水提液提取时可以溶
出。而北虫草水提液对自由基的清除率高于北虫草根，根据
实验结果，北虫草中多糖的含量高于北虫草根，说明其抗氧
化性与多糖有一定的关系。虽然抗氧化活性的主要成分可能
为多糖，但水提液中除多糖外，还有黄酮等化学成分，所以抗
氧化活性还可能与这些抗氧化成分有关，这些还有待于进一
步研究。另外，因试样仅为粗提物，若将提取物中的抗氧化物
质提纯，则抗氧化能力可能会进一步提高，因此可进一步对
这两种物质有活性成分的提纯。
北冬虫夏草和北冬虫夏草根样品水提液均具有一定的
抗氧化活性，其中对羟基自由基的清除率最高，样品溶液浓
度为 100 mg/ml时清除率达到 90％以上，对 DPPH·自由基的
清除率次之，对 O2-的清除率最低，对 O2-清除率较低可能与
样品中各化学成分结构以及清除不同自由基的具体作用机
制不同有关。实验中 4个抗氧化指标均显示，北虫草水提液
的抗氧化活性要高于北虫草根。整体来说样品的抗氧化活性
较高，是良好的营养滋补品，对人体有很好的保健作用。
参 考 文 献
［1］ 廖春丽，方改霞，王莲哲.蛹虫草主要有效成分分析［J］．安徽农
业科学，2008，36（12）：5050-5052.
［2］ 鲁晓岩.硫酸苯酚法测定北冬虫夏草多糖含量［J］．食品工业科
技，2002，23（4）：69-70．
［3］ 孙军德，侯静，杨逸，等.富硒蛹虫草水浸提物的体外抗氧化活
性研究［J］．沈阳农业大学学报，2012，43（2）：179-183.
［4］ Yamaguchi T，Takamura H，Matoba T，at al． HPLC method for e-
valuation of the free radical-scavenging activity of foods by using
1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ［J］． Biosci Biotechnol Biochem，
1998，62（6）：1201-1204.
［5］ 金鸣，蔡亚欣，李金荣，等.邻二氮菲-Fe2＋氧化法检测 H2O2/Fe2＋
产生的羟自由基［J］．生物化学与生物物理进展，1996，2（36）：
553-555.
［6］ Megalli S，Aktan F，Davies NM，at al． Phytopreventative antihy-
perlipidemic effects of Gynostemma pentaphyllum in rats ［J］． J
Pharm Pharmaceut Sci，2005，8（3）：507-515.
（收稿日期：2014-01-13）
图 4 样品水提液还原能力的测定
土茯苓之名始载于《本草纲目》，该书指出：“此药有赤白
二种，入药用白者良”。该品种品名较多，其中短柱肖菝葜资
源相对较丰富，具有清热除湿、解毒之功效，用于杨梅毒疱、
筋骨挛痛、瘰疬痈肿等症。本研究应用高效液相色谱法
（HPLC）对不同种植地的土茯苓的主要功效成分糖苷类化合
物进行指纹图谱研究，为药材的鉴别和质量控制提供参考。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
饮片来源：本实验所用土茯苓 G1~G5均采自贵州；S1~
S5均采自四川，由山西医科大学药学院鉴定为百合科植物短
柱肖菝葜。
色谱乙腈（B＆J）；色谱甲醇（天津四友精细化学品有限公
司）；纯净水（娃哈哈）。甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷对照品自
制（纯度＞99％）。其余试剂均为分析纯。
1．2 仪器与设备
Waters 2695 液相色谱仪；Waters 2487 检测器；安捷伦
1260色谱仪系统；数控超声波清洗器（KQ5200DE，昆山市超
声仪器有限公司）；分析天平（德国赛多利斯 BS223S）；
1．3 方法
1．3．1 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长
为 25 cm，内径为 4．6 mm，粒径为 5 μm）；以乙腈为流动相
A，以 0．1％H3PO4为流动相 B，进行梯度洗脱，前 10 min流动
相 A和流动相 B的比例为 3∶97，10~90 min流动相 A和流动
相 B的比例为 35∶65，90~100 min流动相 A和流动相 B的比例
为 36∶65，检测波长为 254 nm；柱温为 25 ℃；流速为 1．0 ml/min。
1．3．2 对照品溶液制备：取丁香酸葡萄糖苷对照品适量，精
密称定，加甲醇制成每 1 ml含 0．15 mg的溶液。
1．3．3 供试品溶液的制备：取本品粉末约 1．0 g，置锥形瓶中，
加入 80％甲醇 50 ml，超声处理补足减失的质量，滤过，将滤
液蒸干，残渣用 50％甲醇溶解转移至 5 ml量瓶中，加 50％甲
醇至刻度。
1．3．4 样品测定：分别精密吸取对照溶液和供试品溶液各 20
短柱肖菝葜药材土茯苓的高效液相色谱指纹图谱分析
董晓娟 赵正保
DOI：10.11655/zgywylc2014.05.014
作者单位：030001 太原，山西医科大学药学院（第一作者现在太
原市第三人民医院药剂科）
通信作者：赵正保
浓度（mg/ml）
6.25 12.5 25 50 100
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
吸
光
度
北虫草
北虫草根
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中国药物与临床 2014年 5月第 14卷第 5期 Chinese Remedies & Clinics，May 2014,Vol.14,No.5
μl，注入高效液相色谱仪。供试品特征图谱中应呈现 4个特
征峰，与参照物峰相应的峰为 S峰，计算各特征峰与 S峰的
相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规
定值为 0．341（峰 1）、0．899（峰 2）、0．954（峰 3）、1．000（峰 4）。
2 结 果
2．1 精密度：取土茯苓药材 1份，按供试品溶液制备方法制
备，连续进样 6次。计算相对标准偏差（RSD）均＜1．0％，结果
表明精密度良好。见表 1。
2．2 稳定性：取土茯苓药材 1份，按供试品溶液制备方法制
备，进样 6次。结果显示，共有峰的相对保留时间的 RSD均＜
1．5％，土茯苓药材的供试品溶液在 12 h内通过 HPLC分析结
果稳定。见表 2。
2．3 重复性试验：取土茯苓药材 6份，按供试品溶液制备方
法制备并进行检测，结果表明，所考察的特征峰的相对保留
时间及相对峰面积具有较好的重现性，相对保留时间的 RSD
均＜1．0％，相对峰面积的 RSD均＜2．5％。见表 3。
表3 土茯苓 HPLC相对峰面积重复性测定结果
1 2 3 4 5 6
1 0．617 0．640 0．611 0．630 0．635 0．648 2．221
2 1．377 1．413 1．373 1．395 1．389 1．386 1．029
3 1．499 1．525 1．471 1．492 1．526 1．527 1．549
4 1 1 1 1 1 1 0
共有峰 RSD（％）
表2 土茯苓 HPLC相对峰面积稳定性测定结果
0 h 2 h 4 h 8 h 10 h 12 h
1 0．609 0．611 0．621 0．601 0．618 0．613 1．150
2 1.366 1．373 1．395 1．392 1．385 1．353 1．180
3 1．517 1．571 1．592 1．615 1．601 1．585 1.014
4 1 1 1 1 1 1 0
共有峰 RSD（％）
表 1 土茯苓 HPLC相对保留时间精密度测定结果
0 h 2 h 4 h 8 h 10 h 12 h
1 0．341 0．341 0．339 0．339 0．344 0．341 0．454
2 0．899 0．899 0．899 0．899 0．899 0．890 0．021
3 0．954 0．954 0．954 0．954 0．954 0．954 0．010
4 1 1 1 1 1 1 0
共有峰 RSD（％）
2．4 参照物的选择及参照物储备液的制备：由于白土苓药材
指纹图谱中丁香酸葡萄糖苷的含量相对稳定，峰面积较大，
保留时间适中，且与相邻峰分离度较好，因此选择丁香酸葡
萄糖苷为参照峰。
2．5 特征指纹峰的指认：由于土茯苓药材指纹图谱中丁香酸
葡萄糖苷的含量相对稳定，峰面积较大，保留时间适中，且与
相邻峰分离度较好，因此选择丁香酸葡萄糖苷为参照峰 S；从
中选定了 4个相对含量较高的 4个峰作为共有峰，指认了甲
基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、芒果苷、丁香酸葡萄糖苷 3个色
谱峰。
2.6 标准指纹图谱的建立：应用中药色谱指纹图谱相似度评
价系统对 10批供试品进行 HPLC分析，选择色谱图中 4个
共有峰为校正点，建立了土茯苓药材的对照指纹图谱。
2.7 指纹图谱相似度：通过“中药色谱指纹图谱相似度评价
软件”［1］计算，得到各批次药材色谱指纹图谱相似度。以共有
模式为参照进行相似度分析，根据 10批药材的相似度结果，
土茯苓药材指纹图谱相似度应不得低于 0．85。
3 讨 论
本实验对土茯苓进行了 HPLC 指纹图谱研究，结果表
明，不同来源的土茯苓化学成分既有相关性，又有所区别。所
有样品共有峰一致，表明所含化学成分相近，不同产地土茯
苓药材在上述色谱条件下分析所获得的指纹图谱，以共有模
式为参照进行相似度分析，得 10批药材的相似度结果。指纹
图谱可以较为全面地反映中药注射液的中提化学成分以及
含量的情况［2］，本文经试验表明土茯苓指纹图谱各主要色谱
峰相对保留时间均稳定，进行土茯苓的质量控制方法是可行
的。经指纹图谱分析［3，4］，指纹图谱共存在 4个共有峰，从中选
定了相对含量较高的 4个峰作为共有峰，在同样色谱条件下
测定对照品溶液，通过与样品峰的保留时间进行比较，指认
了甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、芒果苷、丁香酸葡萄糖苷 3
个色谱峰。该方法简便，准确，重复性好。
参 考 文 献
［1］ 吴昊，田燕华，郭平平．多元统计学在参麦注射液指纹图谱中的
应用［J］．中成药，2002，24（1）：3-6．
［2］ 赵爱桔，沈培强，祁大庆，等．参麦注射液 HPLC指纹图谱的研
究［J］．齐鲁药事，2010，29（9）：525-527．
［3］ 王春梅，胡坪，刘清飞，等．指纹图谱技术在茵陈提取工艺优化
中的应用［J］.中成药，2007，29（6）：785-787.
［4］ 邓湘昱，孙国祥．茵陈的 HPLC指纹图谱研究［J］.中成药，2005，
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（收稿日期：2013-11-18）
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