全 文 ：　2009, Vol.33, No.6　 271　
　 ProgressinPharmaceuticalSciences　
· 研究与交流 ·
　2009年第33卷　第 6期　第 271　 页　
[接受日期 ] 　2009-01-15 ＊通讯作者:　濮社班 ,副研究员;
研究方向:　中药资源学;
Tel:025-85391084;　E-mail:pusheban@126.com
doi:10.3969/j.issn.1001-5094.2009.06.006
RP-HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸 A
和 3-表去氢土莫酸的含量
夏　烨 1 , 　杨春华3, 4 , 　刘静涵 2 , 　濮社班1 ＊
(1.中国药科大学生药学教研室 , 江苏 南京 210038;2.中国药科大学天然药物化学教研室 ,江苏
南京 210009;3.中国药科大学分析测试中心 ,江苏 南京 210009;4.中国药科大学教育部药物质量
与安全预警重点实验室 ,江苏 南京 210009)
[摘要 ] 　目的:建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。 方法:采用 DikmaDimonsalC18色谱柱
(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 以 0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相 , 流速:1.0 mL·min-1 , 检测波长:243 nm, 柱温:
25 ℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的含量。结果:测得茯苓酸 A和 3-表去氢
土莫酸的线性范围分别为 0.073 ～ 0.292g·L-1(r=0.999 7)和 0.027 ～ 0.135g·L-1(r=0.999 9);加样回收率分别
为 102.63%和 98.88%。结论:该法能快速 、准确地测定茯苓皮中两个活性成分的含量 , 为茯苓皮的质量控制提供
了一个较好的检测方法 。
[关键词 ] 　茯苓皮;茯苓酸 A;3-表去氢土莫酸;反相高效液相色谱
[中图分类号 ] 　O657.72;R284　　[文献标识码 ] 　B　　[文章编号 ] 1001-5094(2009)06-0271-03
SimultaneousDeterminationofPoricoicAcidAand
3-EpidehydrotumulosicAcidinPoriaPeelbyRP-HPLC
XIAYe1 , 　YANGChun-hua3, 4 , 　LIUJing-han2 , 　PUShe-ban1
(1.DepartmentofPharmacognosy, China PharmaceuticalUniversity, Nanjing 210038 , China;
2.DepartmentofNaturalMedicinalChemistry, ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210009 , China;
3.CenterforInstrumentalAnalysis, ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210009 , China;4.KeyLabo-
ratoryofDrugQualityControlandPharmacovigilanceAfiliatedtoMinistryofEducation, ChinaPharma-
ceuticalUniversity, Nanjing210009 , China)
[ Abstract]　Objective:ToestablishamethodtoevaluatethequalityofPoriapeel.Methods:Asimple
gradientRP-HPLCprogramwascarriedouttodeterminethecontentofporicoicacidAand3-epidehydro-
tumulosicacidsimultaneously.ADikmaDimonsalC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)wasused, the
mobilephasewas0.1% formicacid-acetonitrile, ataflowrateof1mL min-1 , withthecolumntempera-
tureof25 ℃, andthedetectionwavelengthwas243nm.Results:ThelinearrangeofporicoicacidAand
3-epidehydrotumulosicacidwas0.073-0.292 g L-1 (r=0.999 7)and0.027-0.135 g L-1 (r=
0.999 9), respectively.Andtherecoveriesofthetwocomponentswere102.63% and98.88%, respec-
tively.Conclusion:ThemethodisrapidandaccuratetodeterminethecontentofporicoicacidAand
3-epidehydrotumulosicacidinPoriapeel.It′saneasywaywhichalsoprovidesthegooddetectionmeans
forthequalitycontrolofPoriapeel.
· 研究与交流 ·
　2009年第33卷　第6期　第 272　 页　
272　 　2009, Vol.33 , No.6　
　 ProgressinPharmaceuticalSciences　
[ Keywords]　Poriapeel;poricoicacidA;3-epidehydrotumulosicacid;RP-HPLC
　　 茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓 [ Poriacocos
(Schw.)Wolf]干燥菌核的外皮 ,性平 ,味甘 、淡 ,归
心 、肺 、脾 、肾经[ 1] ,具有利水渗湿 、健脾胃 、宁心安
神的功效 ,主要有效成分为三萜酸类(如茯苓酸)和
多糖等 [ 2-4] 。 《神农本草经》将其列为上品 ,为历届
药典所收载 。 《中国药典 》2005年版尚未制定其含
量测定项 ,目前仅有茯苓酸的含量测定[ 5]及药材指
纹图谱研究 [ 6-7] 的文献报道 。文献 [ 8-10]报道 ,茯
苓酸 A具有抗肿瘤作用和一定的细胞毒作用 , 3-表
去氢土莫酸能够被人体小肠的上皮细胞吸收且具有
清除自由基的活性 ,两者均为茯苓皮药材所含的活
性成分 。本研究采用 RP-HPLC法同时测定茯苓皮
药材中这两种成分的含量 ,为茯苓皮药材的质量控
制提供了一种更为有效的检测手段。
　仪器与试药
Agilent1100系列高效液相色谱仪 , DAD检测器 ,
Chemstation工作站 , AE240型天平(Metle公司)。
茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸均从茯苓皮中分
离制备得到 ,结构经 UV、IR、MS和 NMR确证;纯度
经 HPLC/DAD检测达 98.0%以上 。茯苓皮药材购
自不同药店 ,经中国药科大学生药学教研室濮社班
副研究员鉴定为 《中国药典》规定的多孔菌科真菌
茯苓的干燥菌核的外皮。样本编号为 2007-0-1211,
保存于中国药科大学分析测试中心。
乙腈(Merck公司 ,色谱纯), 甲醇 、乙醇 、甲酸
(南京化学试剂厂 ,均为分析纯)。实验用水为乐百
氏纯净水。
　方法与结果
2.1　色谱条件
DikmaDimonsalC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,
5 μm)。流动相 A:0.1%甲酸水溶液 , B:乙腈 。梯
度条件为 0-20min, B%:75% ～ 90%;20-25 min,
B%:90% ～ 95%。流速:1.0 mL·min-1 ,检测波长:
243nm,柱温:25℃,进样量:10μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　分别精密称定茯苓酸 A
和 3-表去氢土莫酸对照品 18.25mg和 6.75mg,置同
一 50mL容量瓶中 ,加流动相至刻度 ,摇匀 ,即得混
合对照品溶液 。
2.2.2　供试品溶液的制备　取茯苓皮样品约 1 g,
精密称定 ,置 50mL具塞锥形瓶中 ,加 20mL甲醇加
塞称定 ,于超声仪中提取 30分钟 ,称定 ,用甲醇补足
质量 ,过 0.45μm微孔滤膜 ,滤液密封备用。
2.3　标准曲线的绘制
吸取茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸混合对照品溶
液 2、4、6、8mL置 10mL容量瓶中 ,以流动相定容至
刻度 ,制成不同质量浓度的对照液。按 “ 2.1”项下色
谱条件 ,分别进样 ,以色谱峰峰面积(Y)为纵坐标 ,对
照品质量浓度(C)为横坐标进行线性回归。得回归
方程分别为:Y=2.5×103C+1.3×105 , r=0.999 7;
Y=-20C+1.1×105 , r=0.999 9。结果表明 ,茯苓
酸 A和 3-表去氢土莫酸分别在 0.073 ～ 0.292g·L-1
和 0.027 ～ 0.135g·L-1范围内线性关系良好 。
2.4　精密度试验
取同一供试品溶液 ,按 “ 2.1”项下色谱条件 ,连
续进样 6次。测得茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的
峰面积的 RSD分别为 0.73%和 0.8%。结果表明 ,
该法具有良好的精密度 。
2.5　重复性试验
取同一批药材 6份 ,每份约 1g,精密称定 ,制备
成供试品溶液 ,按 “ 2.1”项下色谱条件 ,进样 ,测得
茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的峰面积的 RSD分别
为 2.6%和 2.1%。结果表明 ,该法重复性良好 。
2.6　稳定性试验
取同一样品溶液分别于 0、2、4、 6、 8小时按
“2.1”项下色谱条件 ,进样 ,测得茯苓酸 A和 3-表去
氢土莫酸的峰面积的 RSD分别为 1.4%和 1.8%,
表明供试品溶液在 8小时内稳定性良好 。
2.7　回收率试验
取已知含量的茯苓皮样品 3份 ,每份约 1 g,精密
称定 ,依次加入含量分别为已知样品中茯苓酸 A和
3-表去氢土莫酸含量 80%、100%和 120%的茯苓酸 A
与 3-表去氢土莫酸混合对照品溶液 ,按 “ 2.2.2”项下
方法制备 ,并按 “2.1”项下色谱条件 ,进样测定。计算
得茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的回收率分别
102.63%(RSD=1.9%)和 98.88%(RSD=1.2%)。
2.8　样品的含量测定
分别取 5份购自不同药店的茯苓皮样品 , 按
　2009, Vol.33, No.6　 273　
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　2009年第33卷　第 6期　第 273　 页　
“ 2.2.2”项下方法制备成样品溶液 5份 ,按 “2.1”项
下色谱条件 ,每份进样 3次;另取混合对照品溶液 ,
进样 3次 ,按外标法计算得茯苓酸 A和 3-表去氢土
莫酸的含量(见表 1)。
表 1　茯苓皮药材中茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的含量
Table1　ContentofporicoicacidAand3-epidehydrotumulosic
acidinsamples(n=3)
来源 茯苓酸 A(%)
3-表去氢土莫酸
(%)
国盛连锁药房 0.024 3 0.009 9
御恩堂 0.031 7 0.011 2
益丰大药房 0.032 6 0.012 2
国盛药业 0.038 3 0.010 2
先声药店 0.040 3 0.013 7
2.9　市售茯苓皮药材成分比较试验
分别取 5份购自不同药店的茯苓皮样品 ,按
“ 2.2.2”项下方法制备成样品溶液 5份 ,按 “2.1”项
下色谱条件 ,每份进样 1次;另取混合对照品溶液 ,
进样 1次。结果表明 ,来自不同药店的茯苓皮药材
在成分上保持了较好的一致性(见图 1)。
(1)茯苓酸 A;(2)3-表去氢土莫酸
a.混合对照品;b.购自国盛连锁药房;c.购自御恩堂;d.购自益丰大
药房;e.购自国盛药业;f.购自先声药店
图 1　市售茯苓皮药材甲醇提取物的 HPLC图
Figure1　HPLCspectrumofdiferentPoriapeelpurchasedfrom
market
　讨论
三萜酸类成分是茯苓皮中的主要有效成分 ,具
有多种生物活性 。本实验采用高效液相色谱法 ,在
25分钟内能直接测得茯苓皮中两个主要的三萜酸
类成分茯苓酸 A和 3-表去氢土莫酸的含量 。该法
操作简单 ,线性范围宽且杂质干扰小 ,稳定性和重复
性好 ,具有快速 、准确 、灵敏度高的特点 ,是一种较为
理想的测定方法。
提取溶剂和提取方法的不同对于茯苓酸 A和
3-表去氢土莫酸的提取能力也有所不同。本实验考察
了 70%乙醇 、无水乙醇 、70%甲醇和甲醇对茯苓皮中
总三萜类的提取能力 ,结果表明 ,甲醇的提取效率最
高。另外还考察了冷浸 、超声和回流提取对两种三萜
酸的提取能力 ,结果表明 ,超声提取的效果最好。
本实验证明茯苓皮的甲醇提取物中主要含有茯
苓酸 A、3-表去氢土莫酸以及保留时间在 20 min以
后的一些弱极性组分 ,此外还证明了市售茯苓皮药
材在成分上的一致性 ,为该味中药材可以开发成为
质量可控的现代中药或中药提取物提供了依据。
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