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茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量比较研究



全 文 :Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2010 November,Vol.21 No.6
收稿日期:2010-06-21
作者简介:段启(1969-),副主任中药师,硕士,主要从事中药质量标准研究。Email:duanq2005@163.com。
茯苓是多孔菌科真菌 Poria cocos(Schw.)Wolf
的干燥菌核,性平,味甘、淡,归心、肺、脾、肾
经[1],是一味常用的利水渗湿、健脾和胃、宁心安神
的中药;临床使用分茯苓、茯神、赤茯苓等,自古以
来就是一味药食两用、非常重要的中药。茯苓皮为削
下的茯苓外皮,形状大小不一,性平,味甘、淡,
功专利水、消肿,主要含有四环三萜酸和多糖等成
分[2],茯苓酸属于茯苓中主要成分四环三萜酸(统称
茯苓素)中的主要活性成分之一[3-4],具有增强人体免
疫力、抗癌等作用,各版药典都有收载。为提高饮片
的质量,本研究通过文献研究制定了茯苓、茯苓皮中
茯苓酸 HPLC含量测定方法[5],并对两者的含量进行
了对比。该方法稳定,可靠,简便,适于推广,弥补
了茯苓和茯苓皮饮片质量标准的空白。
1 仪器与试药
美国 Agilent1100液相色谱仪,UV检测器,含在
线真空脱气机、四元梯度泵、柱温箱、Agilent 化学
工作站、KQ-250DB超声波清洗仪(功率 250 W,频
率 40 kHz,上海艺源超声设备有限公司)、METTLER
AE240 电子天平(梅特勒-托利多国际股份有限公
司);甲醇、乙睛和磷酸为色谱纯,水为双蒸馏水;
茯苓酸对照品购自沈阳药科大学协合标准品公司(质
量分数大于 98 %);茯苓药材为本课题组采集,经本
中心庄义修教授鉴定为多孔菌科真菌 Poria cocos
(Schw.)Wolf 的干燥菌核,是药典规定的正品茯苓。
茯苓与茯苓皮中茯苓酸含量比较研究
段 启,姚丽梅,庄义修(广东食品药品职业学院,南药资源保护与利用工程技术开发研究中心,广州
510520)
摘要:目的 建立茯苓酸HPLC含量测定方法,比较茯苓与茯苓皮之间含量差异。方法 采用反相高效液相色
谱法,色谱柱为Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相: 乙腈-0.5 %磷酸水(70 ∶ 30); 流速为0.8
mL·min-1 检测波长:242 nm;柱温:30 ℃。结果 茯苓酸在0.362~9.050 μg范围内与峰面积呈良好线性关系,
r=0.999 9,平均回收率99.54 %,RSD=1.01 %。结论 该方法稳定,可靠,简便,适于茯苓与茯苓皮药材质量
评价。
关键词:茯苓;茯苓皮;茯苓酸;含量测定;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1003-9783(2010)06-0654-03
Comparison of Contents of Pachymic Acid in Poria and Cortex Sclerotii Poriae by HPLC
DUAN Qi,YAO Limei,ZHUANG Yixiu (Guangdong Food and Drug Vocational College,Research & Development
Center for Engineering and Technology of Medicinal Resources Protection and Utilization in South China,Guangzhou
510520,China)
Abstract: Objective To establish a method for determining the content of pachymic acid in Poria and Cortex Sclerotii
Poriae,and to compare the content of pachymic acid in the two herbs. Methods HPLC method was used for the de-
termination of pachymic acid in Poria and Cortex Sclerotii Poriae from Anhui,Hubei and Yunnan provinces. The
chromatographic conditions were as follows: Hypersil ODS C18 column (4.6 mm×200 mm,5 μm),ancetonitrile-0.5
% phosphoric acid(70 ∶ 30)as mobile phase,flow rate being 0.8 mL/min,column temperature at 30 ℃,and detec-
tion wavelength at 242 nm. Results Pathymic acid showed a good linear relationship with the peak areas between
0.362~9.050 μg (r=0.999 9).The average recovery was 99.54 % with RSD=1.01 %. The content of pachymic acid in
Poria and Cortex Sclerotii Poriae from three habitats was Hubei > Yunnan > Anhui. Conclusion The method is
proved to be feasible for quality assessment of Poria and Cortex Sclerotii Poriae.
Keywords:Poria;Cortex Sclerotii Poriae;Pachymic acid;HPLC;Content determination
·654·
中药新药与临床药理 2010年 11月第 21卷第 6期
茯苓皮为同一产地茯苓的皮,共 10批,产地见表 1。
表1 茯苓、茯苓皮产地
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性 色谱柱为 Hypersil ODS
柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相:乙腈-0.5 %磷
酸水(70 ∶ 30);流速 0.8 mL·min-1;检测波长:242
nm;柱温为 30 ℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品茯苓酸 1.81
mg,置于 10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即
得到 0.181 mg/mL的对照品液。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取茯苓粗粉约 2 g、
茯苓皮约 0.27 g,精密称定,分别置 100 mL具塞锥
型瓶中,精密加甲醇 20 mL,密塞,称定重量,超声
处理 15分钟,取出,冷却,称定重量,用甲醇补足
失去的重量,摇匀,静置,取上清液,用 0.45 μm微
孔滤膜,滤过,取续滤液,既得。
2.4 标准曲线绘制 分别精密吸取标准溶液 0.2、0.5、
1.0、2.0、5.0 mL置于 10 mL量瓶中,加入甲醇至刻
度,制成不同质量浓度的对照液。分别进样 10 μL,
以色谱峰峰面积为纵坐标,对照品质量浓度为横坐标
做线性回归,回归方程为 Y=657.53X,r=0.9999。结
果表明茯苓酸在 0.362~9.050 μg与色谱峰面积呈良好
线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10 μL,
连续进样 6次,以茯苓酸峰面积计算,其 RSD=1.39
%。结果表明:具有良好的精密度。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液分别于 1 h、
2 h、4 h、12 h、24 h各进样 10 μL,以茯苓酸峰面
积计算,其 RSD=0.29 %,表明供试品溶液在 24 h内
稳定。
2.7 重复性试验 精密称定同一批茯苓药材粗粉 6
份,按供试品液制备方法处理,各吸取 10 μL 进样
测定,其 RSD=0.50 %,结果表明该方法重现性良
好,见表 2。
表2 重复性试验结果(n=3)
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约
1.0 g,分别加入一定量的茯苓酸对照品,按照供试
品溶液项下规定制备,并进样测定,计算其回收率,
平均回收率为 99.54 %,RSD=1.01 %(n=6)。结果见
表 3。
表3 茯苓酸加样回收率试验结果(n=6)
2.9 样品测定 分别取 10批茯苓及茯苓皮样品,按
供试品溶液项下进行操作,并进样测定,结果见表
4,色谱图见图 1。
表4 茯苓酸含量测定结果(n=3)
3 讨论
3.1《中国药典》2010年版(一部)中茯苓、茯苓皮药材
和饮片标准中均无含量测定项[6]。本研究采用了流动
相乙腈-0.5 %磷酸水(70 ∶ 30,75 ∶ 25,80 ∶ 20)及梯
度洗脱的方法,结果表明流动相比例
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
产 地
安徽金寨县桃岭乡桐岗村村东山坡
安徽金寨县桃岭乡桐岗村村西山坡
安徽金寨县桃岭乡桐岗村村南山坡
安徽金寨县桃岭乡桐岗村村北山坡
云南武定县万德乡马德坪村村北山坡
云南武定县万德乡马德坪村村南山坡
云南武定县万德乡马德坪村村东山坡
湖北罗田县九资河镇九资河村村南朝北山坡
湖北罗田县九资河镇九资河村村东面山坡
湖北罗田县九资河镇九资河村朝南坐北山坡
茯苓取样量/g
0.999 7
0.999 9
1.000 1
0.999 8
1.000 0
1.000 2
茯苓酸含量/%
0.050 8
0.051 0
0.050 7
0.051 1
0.051 2
0.050 9
茯苓酸平均值/%
0.051 0
RSD/%
0.50
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
茯苓中含量/%
0.055 2
0.056 1
0.056 2
0.055 7
0.050 7
0.050 8
0.051 8
0.036 3
0.036 5
0.036 8
RSD/%
0.81
0.78
1.10
0.96
0.78
0.98
1.50
1.02
1.32
0.51
茯苓皮中含量/%
0.550 5
0.550 7
0.529 7
0.664 0
0.324 0
0.309 2
0.333 9
0.442 6
0.445 9
0.464 5
RSD/%
1.33
1.25
1.02
0.85
0.68
0.78
1.42
0.51
0.67
0.91
编号
1
2
3
4
5
6
茯苓取
样量/g
1.000 1
0.999 9
1.000 2
0.999 8
0.999 9
1.000 0
实测值/mg
0.101 5
0.098 5
0.099 8
0.100 8
0.099 7
0.099 9
药材含量/mg
0.055 2
0.055 2
0.055 2
0.055 2
0.055 2
0.055 2
对照品加入量/mg
0.045 3
0.045 3
0.045 3
0.045 3
0.045 3
0.045 3
回收率
/%
101.0
98.06
99.30
100.3
99.20
99.40
平均回收率
/%
99.54
RSD
/%
1.01
茯苓酸
(下转第659页)
·655·
中药新药与临床药理 2010年 11月第 21卷第 6期
(上接第655页)
为 70 ∶ 30时洗脱效果较好,故本实验流动相为 70 ∶
30。同时考察了冷浸提取法,水浴提取法及超声提取
法三种提取方法的提取能力,茯苓酸含量分别为
0.035 5 %、0.046 1 %和 0.056 2 %,说明超声提取法
明显优于其他两种提取方法。考察了超声 15 min,
30 min,45 min时的提取能力,结果表明超声 15 min
的提取效果与其他两个时间提取效果无明显差异,故
超声时间确定为 15 min。
3.2 含量测定结果表明,安徽产四批茯苓中茯苓酸的
平均含量为 0.055 8 %,茯苓皮为 0.573 7 %,茯苓皮
比茯苓高 10.28倍;云南产三批茯苓和茯苓皮中茯苓
酸平均含量分别为 0.051 1 %和 0.322 4 %,茯苓皮中
茯苓酸含量比茯苓高 6.3倍;湖北产三批茯苓和茯苓
皮中茯苓酸平均含量分别为 0.036 5 %和 0.41 %,茯
苓皮中茯苓酸含量比茯苓高 12.34倍。结果表明茯苓
皮中茯苓酸含量远高于茯苓,而在茯苓主要产区,由
于茯苓皮价格远低于茯苓,故大量茯苓皮被丢弃,造
成资源的极大浪费,且药理试验表明,茯苓酸具有增
强人体免疫力、抗癌等作用 [3-4],目前已有药业公司
开发以茯苓酸为主要成分的药品,本研究结果对合理
利用茯苓皮资源,具有较大意义。
参考文献:
[1] 凌一揆,颜正华. 中药学 [M]. 第 3版. 上海:上海科学技术出版
社,1984:95.
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[6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药
科技出版社,2010:224.
(编辑:修春)
采用管式超滤膜过滤技术对配制后的安神药液进行
终端过滤,可有效解决板框过滤因助滤层问题造成滤
过质量稳定性差的问题,同时采用管式超滤膜过滤,
可有效除去药液中的微生物,免除高温灭菌而诱发的
沉淀的问题,解决了安神补脑液在保存期间容易产生
沉淀或粘壁等问题,从而提高了产品质量稳定性,降
低了市场投诉率,使药品安全、有效,提高产品的市
场竞争能力。
参考文献:
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:化学工
业出版社,2010:715.
[2] 郭立伟,金万勤,彭国平. 21世纪的植物深加工现代化技术—膜
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中国中医药现代化远程教育,2008,6(5):496-497.
(编辑:修春)
原工艺:药材提取液 → 粗滤 → 药液浓缩 → 醇沉 → 浸膏液 → 液体配液 → 过滤 → 灌封 → 灯检 → 成品
新工艺:药材提取液粗滤 → 微滤(陶瓷膜过滤)→ 药液浓缩 → 醇沉 → 浸膏液 → 液体配液 → 超滤(管式膜滤器过滤)→ 灌封 → 灯检 →
成品
图4 膜分离技术实施前后工艺流程对比图
→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→
图1 茯苓与茯苓皮HPLC色谱图
1为茯苓酸
mAU
40
30
20
10
0
1
0 2 4 6 8 10
mAU
250
200
150
100
50
0
0 2 4 6 8 10
1
9.
33
4
mAU
40
35
30
25
20
15
10
5
0
1
0 2 4 6 8 10
c. 茯苓
t / min
t / min
t / min
a. 茯苓酸对照品
b. 茯苓皮
9.
30
0
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