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不同加工方法对白茯苓及茯苓皮中多糖含量的影响



全 文 :收稿日期:2014-01-09; 修订日期:2014-06-23
基金项目:国家中医药管理局重点学科建设项目;
湖南省高校科研项目(No. 12C1259);
湖南省科技厅科技计划项目(No. 2014NK3022);
湖南省“十二五”中医药重点学科项目(1008)
作者简介:李习平(1973 - ),女(汉族),湖南岳阳人,岳阳职业技术学院
副教授,副主任药师,硕士学位,主要从事中药炮制理论与饮片质量控制
的研究工作.
* 通讯作者简介:石继连(1973-),男(汉族),湖南会同人,湖南中医药大
学药学院副教授,硕士研究生导师,博士学位,主要从事中药炮制与制剂
研究工作.
不同加工方法对白茯苓及茯苓皮中多糖含量的影响
李习平1,张 琴2,周逸群2,胡和婧2,石继连2*
(1.岳阳职业技术学院,湖南 岳阳 414000;
2.湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208)
摘要:目的 比较不同加工方法对白茯苓及茯苓皮中多糖含量的影响,为茯苓饮片的规范化加工和质量控制提供参考。
方法 采用苯酚 -硫酸法测定茯苓多糖吸光度,检测波长为 487nm。结果 白茯苓的多糖含量比茯苓皮高,经过蒸制后,白
茯苓和茯苓皮所含的多糖含量均明显降低,尤其是高压蒸影响更大。结论 茯苓多糖对热压不稳定,茯苓切制前不宜蒸
制。研究结果可为茯苓的产地加工提供科学依据。
关键词:白茯苓; 茯苓皮; 加工; 多糖
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 12. 035
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2014)12-2902-02
茯苓为多孔菌科真菌茯苓 Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌
核,味甘、淡,性平,归心、肺、脾、肾经,有利尿渗湿、健脾宁心之功
效,主要用于水肿尿少、痰饮眩晕、脾虚食少、便溏泄泻、心神不
安、惊悸失眠等症[1]。现代研究表明,茯苓多糖为茯苓主要成分
之一,具有抗肿瘤,提高免疫力的作用[2]。茯苓多在产地经发汗
后及时加工切制,蒸制后切制者较生切者的切面光滑,片形美观,
但生产成本增加。笔者尚未见关于蒸制对茯苓多糖影响的国内
外文献报道。为了比较不同加工方法对茯苓多糖的影响,本实验
对不同方法所得的白茯苓及茯苓皮的茯苓多糖含量进行研究,为
茯苓饮片的规范化加工和质量控制提供参考。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 双光束紫外可见分光光度计(TU - 1900 型,北京普析
通用仪器有限责任公司),电子天平(TP - 214 型,北京赛多利斯
仪器系统有限公司),电热恒温水浴锅(DK - S22 型,上海精宏实
验有限公司),电热恒温干燥箱(202 - 3AB 型,天津市泰斯特仪
器有限公司),JZ20Y. 1 - E - 2 型旋流燃气灶(最大热流量
3. 7KW,迅达科技集团股份有限公司),压力锅(苏泊尔 YL269H2
型)以及普通不锈钢蒸锅等。
1. 2 材料 茯苓药材采自湖南靖州,经湖南中医药大学周日宝教
授鉴定为多孔菌科真菌茯苓 Poria cocos(Schw.)Wolf 的新鲜菌
核。葡萄糖对照品(购于中国食品药品检定研究院,批号:110833
- 201205),化学试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 白茯苓及茯苓皮不同加工方法的样品制备
2. 1. 1 生切品 取发汗后的新鲜茯苓净药材,及时削去外皮作茯
苓皮,白茯苓切成厚片,均置干燥箱中于 80℃烘干,即可。
2. 1. 2 普通蒸后切品 取发汗后的新鲜茯苓净药材,置于普通蒸
锅内,用燃气灶加热,武火隔水蒸至圆汽后改用中火蒸 120 min,
稍冷后取出,及时削去外皮作茯苓皮,白茯苓切制成厚片,均置干
燥箱中于 80℃烘干,即可。
2. 1. 3 高压蒸后切品 取发汗后的新鲜茯苓净药材,置于高压锅
内,用燃气灶加热,武火隔水蒸至圆汽后改用中火蒸 120 min,稍
冷后取出,及时削去外皮作茯苓皮,白茯苓切制成厚片,均置干燥
箱中于 80℃烘干,即可。
2. 2 水分的测定 精密称取上述各种方法制备的白茯苓和茯苓
皮各 2 ~ 5 g,平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中,照中国药典附
录的水分测定方法干燥失重法[1]测定,计算含水量。结果见表
1。
表 1 不同加工方法的白茯苓及茯苓皮的水分测定结果 %
加工方法 白茯苓 茯苓皮
生切 3. 68 4. 01
普通蒸后切 4. 98 4. 10
高压蒸后切 4. 34 3. 42
n = 3
2. 3 茯苓多糖的含量测定[2,3]
2. 3. 1 苯酚液的配制 取苯酚 100 g,加铝粉 0. 1 g,加碳酸氢钠
粉末 0. 05 g,常压蒸馏,收集 181 ~ 182℃的馏分,称取此冷凝后的
馏分 5 g,加水定容 100 ml棕色量瓶中,即得 5%苯酚溶液。
2. 3. 2 对照品溶液的制备 精密称取 105℃干燥恒重的标准葡
萄糖 0. 020 0 g,置 100 ml的容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀,即
制成葡萄糖对照品溶液,浓度为 0. 200 mg /ml。
2. 3. 3 供试品溶液的制备 分别精密称取上述不同加工方法的
白茯苓及茯苓皮粉末(过 60 目筛)约 0. 5 g,置于索氏提取器中用
100 ml石油醚回流处理 3h,再用 80%乙醇 100 ml提取 3h,冷却,
过滤,滤渣干燥后加 1. 0 mol /NaOH 溶液 50. 0 ml,浸渍过夜,过
滤,弃去初滤液,收集续滤液,精密吸取续滤液 1. 0 ml 至 100 ml
容量瓶中,加水定容至刻度,即得。
2. 3. 4 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
1 ml,分别置 20 mL 试管中,分别加入 5% 苯酚溶液 1. 0 ml,摇
匀,缓慢加入浓硫酸 6. 0 ml,迅速摇匀,45℃水浴 30 min 后移至
冰水浴中放置 30 min,在紫外分光光度仪上,测定波长从 200 ~
700 nm之间的吸收度,结果二者均在 487 nm 处有最大吸收,故
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 12 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 12
选 487 nm为测定波长。
2. 3. 5 测定法 精密吸取对照品或供试品溶液 1. 0 ml,加入 5%
苯酚溶液 1. 2 ml,摇匀,缓慢加入浓硫酸 7. 0 ml,迅速摇匀,45℃
水浴 30 min后移至冰水浴中放置 30 min,在紫外 -可见分光光
度计 487 nm的波长处测定吸光度。
2. 3. 6 线性关系考察 分别精密吸取葡萄糖对照品溶液 0. 0,
0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0 ml,分别置 10 mL具塞试管中,分别准
确补水至 1. 0 ml,按“2. 3. 5”项下测定法测定吸光度,以浓度(C)
为横坐标,以吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线,得线性回归方
程 A = 6. 081 2C + 0. 015 3 (r = 0. 999 1),表明葡萄糖在 0. 02 ~
0. 20 mg /ml范围内线性关系良好。
2. 3. 7 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液 1. 0 ml,分别于
20,40,60,80,100,120 min,按“2. 3. 5”项下方法测定吸光度,计
算结果吸光度的 RSD为 1. 79%,表明供试品溶液在 120 min内稳
定性良好。
2. 3. 8 精密度试验 精密量取对照品溶液 1. 0 ml,按“2. 3. 5”项
下方法测定吸光度 6 次,计算吸光度的 RSD为 2. 20%,表明仪器
精密度良好。
2. 3. 9 重复性试验 精密称取同一种茯苓制品(鲜切白茯苓)6
份各 0. 5 g,按“2. 3. 3”项下方法制备供试品溶液,精密量取供试
品溶液各 1. 0 ml,按“2. 3. 5”项下方法测定吸光度,计算结果,吸
光度 RSD为 2. 36%,表明本方法重现性好。
2. 3. 10 加样回收试验 精密量取已知多糖含量的续滤液 0. 5 ml
共 9 份,分别置 100 ml容量瓶中,分别加入 80%、100%及 120%
的葡萄糖对照品,加水定容至刻度,制备供试品溶液。再按
“2. 3. 5”项下方法测定吸光度,计算回收率,结果平均回收率为
98. 56%,RSD为 2. 52%(见表 2),表明本方法准确度良好。
表 2 加样回收试验结果
编号
取样量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 4. 82 3. 80 8. 65 100. 79
2 4. 82 3. 80 8. 54 97. 89
3 4. 82 3. 80 8. 42 94. 74
4 4. 82 4. 80 9. 47 96. 88
5 4. 82 4. 80 9. 69 101. 46 98. 56 2. 52
6 4. 82 4. 80 9. 42 95. 83
7 4. 82 5. 70 10. 44 98. 60
8 4. 82 5. 70 10. 47 99. 12
9 4. 82 5. 70 10. 62 101. 75
2. 3. 11 样品含量测定 取不同方法加工的白茯苓及茯苓皮样
品,按“2. 3. 3”项下方法制备供试品溶液,再按“2. 3. 5”项下方法
测定吸光度 3 次,计算样品多糖含量(结果见表 3)。
表 3 不同加工方法样品的多糖含量测定结果
方法 样品名称 平均含量 /% RSD /%
生切 白茯苓 96. 72 1. 79
茯苓皮 79. 04 2. 45
普通蒸后切 白茯苓 86. 27 2. 16
茯苓皮 62. 18 2. 47
高压蒸后切 白茯苓 72. 26 2. 32
茯苓皮 51. 84 2. 51
从表 3 可知,白茯苓中的多糖含量比茯苓皮中的含量高,经
过普通蒸制后,白茯苓中的多糖含量由 96. 72%降为 86. 27%,茯
苓皮中的多糖含量由 79. 04%降为 62. 18%。而经过高压蒸制
后,多糖含量较低更明显,白茯苓中的多糖含量由 96. 72%降为
72. 26%,茯苓皮中的多糖含量由 79. 04%降为 51. 84%。
3 讨论
茯苓由于多为较大的菌核,未切制之前难于干燥而发霉变
质,故多在产地经发汗后及时切制。湖南靖州作为我国茯苓的主
要产地之一,年加工鲜茯苓 2 万余吨,当地主要有生切和蒸后切
两种切制茯苓的方法,蒸后切可以使切面光滑平整,且不易破碎,
但生产成本增加。
茯苓多糖是茯苓的主要有效成分。曾有研究报道[4]比较了
趁鲜切制与传统发汗后切制法所得白茯苓片中多糖的含量差异,
但未见蒸制对茯苓多糖影响的有关研究报道。为了弄清蒸制对
茯苓多糖的影响,本研究比较了生切、普通蒸后切及高压蒸后切
等 3 种方法切制的白茯苓及茯苓皮中茯苓多糖的含量。实验结
果显示,白茯苓的多糖含量比茯苓皮高,经过蒸制后,白茯苓和茯
苓皮所含的多糖含量均明显降低,尤其是高压蒸影响更大。若以
茯苓多糖作为评价指标时,茯苓不宜蒸制为好。本研究可为茯苓
的产地加工方法提供科学依据。
苯酚 -硫酸比色法是测定多糖含量较为经典有效的方法之
一。本实验通过全波长扫描选定了 487 nm 为测定波长,与有关
文献[2 ~ 4]的波长不同。本法经过方法学考察后用于本实验测定
茯苓多糖时,供试品溶液在 120 min 内稳定,平均加样回收率为
98. 56%,RSD为 2. 52%,结果表明本法简便、稳定、可靠。
参考文献:
[1] 国家药典委员会. 中国药典,一部[S]. 北京:中国医药科技出版
社,2010:224,附录 52.
[2] 王耀登,安 靖,聂 磊,等. 不同产地茯苓饮片的多糖的含量比
较研究[J]. 时珍国医国药,2013,24(2):321.
[3] 张怡莎,陈华国,周 欣,等.不同产地茯苓及茯苓皮中多糖成分的
研究[J].贵州师范大学学报(自然科学版),2010,28(3) :101.
[4] 郝建萍,王昌利,孙 静. 不同切制法对茯苓中茯苓多糖含量的影
响[J]. 陕西中医学院学报,2010,33(1):55.
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 12 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 12 期