全 文 ：　[收稿日期] 　2010-08-31;2011-01-08修回
　[基金项目] 　广西教育厅科研项目“金樱根提取物药理活性及作用机制研究”(200808MS017);广西桂东特色资源开发与利用实验室资助项
目“通泉草口服液药理活性研究”[ 2009SYS(2)07]
　[作者简介] 　邹堂斌(1980-),男 ,讲师 ,从事天然产物研究与开发。
[ 文章编号] 1001-3601(2011)02-0114-0148-03
金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放 NO的影响
邹堂斌 , 解庆林
(贺州学院 化学与生物工程系 , 广西 贺州 542800)
　　[摘　要] 为探索金樱根的抗炎作用及对炎症因子一氧化氮(NO)的调控作用 ,建立小鼠二甲苯耳廓肿
胀模型 、琼脂肉芽组织增生模型 ,并通过测定金樱根对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放 NO 的影响观察金樱根的抗炎作用及其与 NO的关系 。结果表明 ,金樱根能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀 、琼脂肉芽组织增
生 ,能抑制炎症因子 NO 的释放。认为 ,金樱根具有较好的抗炎作用 ,这种作用与抑制 NO 等炎症因子释放
有关 。[关键词] 金樱根;抗炎;巨噬细胞;一氧化氮(NO)[中图分类号] S567.9 [文献标识码] A
Anti-inflammatory Effect of Cherokee Rose Root and Its
Effect on NO Release of Macrophage
ZOU Tang-bin , XIE Qing-lin
(Department of Chemistry and Biological Engineering , Hezhou College , Hezhou , Guangxi 542800 , China)
　　Abstract:The ant i-inflammato ry effect of cherokee ro se roo t w as obse rved by building m ice
dimethy lbenzene auricle sw elling model and agar g ranulation hyperblastosis model and the effect of
cherokee rose roo t on NO release of mice coeliac macrophage w as de termined to study the anti-
inf lammatory effect of cherokee ro se root and adjusting ef fect o f cherokee rose ro ot on NO release(inf lammato ry factor).The results showed that cherokee rose root could inhibit mice auricle sw elling
caused by dimethylbenzene , agar granulat ion hyperblastosis and NO release.cherokee ro se roo t is o f g ood
ant i-inflammato ry ef fect and its ant i-inflammato ry ef fect may be related to inhibi tion o f NO release.
Key words:cherokee rose roo t;anti-inf lammatory;macrophage;NO
　　金樱根(Cherokee Rose Roo t , CRR)又名金樱
蔃 、脱骨丹 ,为蔷薇科植物金樱子的根或根皮 ,性味
酸涩 ,有固精涩肠作用。临床报道可用于治疗子宫
脱垂 、细菌性痢疾 、小儿脱肛等症。该植物为广西优
势植物资源之一 ,化学成分中以鞣质类报道居多 ,而
鞣质在抗炎 、抗氧化 、抗病毒及抗癌等方面均有报
道[ 1-2] 。一氧化氮(NO)是一种不稳定自由基 ,既是
一种信使分子 ,又是一种细胞毒性分子 ,NO 表现为
生理性或病理性作用 ,主要取决于量的多少。为探
索金樱根的抗炎作用及对炎症因子 NO 的调控作
用 ,提高其临床应用价值 ,特进行金樱根的抗炎作用
及对巨噬细胞释放 NO的影响试验 。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试剂与器具 金樱根注射液(1mL 相当于
0.4 g 药材), 二甲苯(广州化学试剂厂),水杨酸钠
(陕西汉江药业集团),大黄(贺州桂东大药房),NO
试剂盒(南京建成生物工程研究所),巯基乙醇钠(上
海宝瑞化工有限公司),新生牛血清(Gibco),脂多糖
(Sigma), RPM I-1640培养基(Gibco),二氧化碳培
养箱(Thermo),电子天平等 。
1.1.2 试验动物 BALB/c 小鼠(♂),体重(20±
2)g ,清洁级 ,由中山大学实验动物中心提供 。
1.2 试验方法
1.2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验 将 30只小
鼠随机分为 3组 ,每组 10只 ,分为金樱根组 、水杨酸
钠(2%)组和对照组 。药物组以 0.2mL/10g 体重
腹腔注射药液 ,对照组注射生理盐水 ,每日 1次 ,连
续 3 d。末次给药 30min后 ,均匀涂抹二甲苯 50μL
于各组小鼠左耳两面致炎 ,右耳作对照。1h 后脱颈
椎处死 ,沿耳廓基部剪下两耳 ,用直径 5mm 打孔器
取下相同部位耳片 ,称重。以对照耳重量为 100%,
计算药物对致炎耳的肿胀抑制率[ 3] 。
1.2.2 小鼠琼脂肉芽组织增生试验 选取小鼠 30
只 ,于乙醚浅麻醉下 ,无菌操作 ,在鼠背中线皮下注
射 2%琼脂液 0.5mL/只 。24h 后分组 ,方法同小鼠
耳廓肿胀试验。药物组以 0.2mL/10g 体重剂量腹
腔注射药液 ,对照组注射生理盐水 ,每天 1次 ,连续
7 d。第 8 天脱颈椎处死小鼠 ,取肉芽肿称重 ,比较
各组间的差异。计算药物对肉芽肿的抑制率:
肉芽肿抑制率/ %=[(对照组肉芽肿湿重-药
　贵州农业科学　2011 , 39(2):148～ 150　Guizhou Ag ricultural Science s
物组肉芽肿湿重)/对照组肉芽肿湿重] ×100
1.2.3 小鼠腹腔巨噬细胞分离培养及分组 每只
小鼠腹腔注射 0.3%巯基乙醇钠 0.6mL , 3d后脱颈
椎处死 ,浸于 75%酒精中消毒 。然后用注射器吸取
PBS 液 4.0mL 注入小鼠腹腔 ,轻揉小鼠腹部 ,用无
菌吸管吸取腹腔 PBS 液 ,重复 3 次后离心 ,所得细
胞重悬于 RPM I-1640培养基中 ,对细胞进行记数并
调整浓度至 2×106个/mL。台盼蓝染色证实细胞
存活率达 95%以上 ,然后接种于 12 孔板 ,每孔加细
胞悬液 1.0mL[ 4-6] 。分为正常组 、金樱根组和空白
对照组 ,每组 3个复孔 ,金樱根组每孔加入金樱根注
射液和脂多糖(LPS ,100μg/mL)各 0.1mL ,对照组
每孔加入 LPS(100μg/mL)和 PBS各 0.1mL ,正常
组每孔加入 PBS 0.2mL。置 37℃, 5%CO 2培养箱
中孵育 。采用 G riess法测定 NO 的稳定代谢产物
NaNO 2来反应 NO 的浓度[ 7-8] ,操作按试剂盒说明
书进行 。
2 结果与分析
2.1 抑制小鼠耳廓肿胀试验
二甲苯具有较强致炎作用 ,涂抹在小鼠的耳廓
可引起耳部皮肤毛细血管扩张 ,通透性增高 ,引起耳
部肿胀 。从表 1可以看出 ,金樱根注射液对二甲苯
引起的小鼠耳廓肿胀有一定的抑制作用 ,抑制率达
9.86%。
表 1 不同处理对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用
Table 1　I nhibition effect o f different trea tments on mouse auricle swe lling caused by dimethy l benzene
组别
T reatment
动物/只
Number o f mouse
给药剂量/(mL/10g)
Dosage
增重平均值/mg
Mean weight increment
肿胀抑制率/ %
Sw elling inhibition ra te
对照组 10 0 7.10±0.50 0　
金樱根组 10 0.2 6.50±0.30 ＊ 9.86
2%水杨酸钠组 10 0.2 6.20±0.20 ＊ 12.68
　注:＊表示与对照组相比 , 差异显著(P<0.05)(下同)。
　No te:＊ indicate the significant level a t 5% compared with CK , the same below .
表 2 不同处理对琼脂致小鼠肉芽组织增生的抑制作用
Table 2　 Inhibition effect o f diffe rent treatments on mouse g ranulation hype rblastosis caused by aga r
组别
T reatment
动物/只
No.of mouse
给药剂量/(mL/ 10g)
Dosage
增重平均值/mg
Mean weight increment
肿胀抑制率/ %
Sw elling inhibition ra te
对照组 10 0 439.1±56.9 0
金樱根组 10 0.2 340.8±55.0 ＊ 22.39
2%水杨酸钠组 10 0.2 358.3±41.5 ＊ 18.40
表 3 不同处理对巨噬细胞分泌 NO 的影响
Table 3　Effect o f different treatments on NO re lease o f macrophage
组别
T reatment
金樱根注射液/ mL
Dosage
LPS/
(100μg/m L)
PBS/
mL
NO 含量/(mmol/ L)
Content of NO
正常组 0 0 0.2 0.040±0.009
金樱根组 0.1 0.1 0 0.056±0.013 ＊
对照组 0 0.1 0.1 0.142±0.021
2.2 小鼠琼脂肉芽组织增生试验
琼脂注射到小鼠皮下后 ,因其体积较大 ,无法被
巨噬细胞吞噬 ,从而使巨噬细胞形成多核巨细胞 ,附
着于异物颗粒上形成肉芽肿。从表 2看出 ,金樱根
对琼脂引起的小鼠肉芽组织增生有很强的抑制作
用 ,肿胀抑制率可达 22.39%,明显优于 2%水杨酸
钠组 。
2.3 对巨噬细胞分泌 NO 的影响
巨噬细胞经 LPS刺激后 ,会释放出大量的炎性
因子 NO 。从表 3 看出 ,对照组释放的 NO 浓度为
0.142mmo l/L , 金樱根组 释放的 NO 浓度 为
0.056mmol/L ,与对照组相比差异显著(P<0.05)。
　　培养巨噬细胞时分别在 2 h 、6 h 、12h 测定培养
基中的 NO含量。从图示可知 ,正常组在 2 h时 NO
含量为 0.016mmo l/L , 6 h 时含量为 0.017mmol/
L , 12 h 时含量为 0.020mmol/L;对照组在 2 h 时
NO含量为 0.039mmol/L ,6h时含量为 0.059mmol/
L ,12h 时含量达 0.065mmol/L , NO 含量上升趋势
比较明显 。而金樱根组的 NO 含量介于两者之间 ,
说明 ,金樱根对巨噬细胞分泌炎性细胞因子 NO 有
较好的抑制作用。
图示 不同处理对巨噬细胞分泌 NO 的影响
　　Fig.　Effect of different trea tments on NO release
of macr ophage
·149·　第 2 期 邹堂斌 等　金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放 NO 的影响
3 小结与讨论
炎症是机体对组织损伤或致病因子侵入的一种
防御反应 ,其作用在于杀灭病原微生物 ,清除凋亡细
胞和异物 ,以防止损伤扩大并促进损伤组织修复 。
炎症过程涉及许多炎症介质 ,如丙二醛 、白介素 、一
氧化氮 、缓激肽等[ 9-10] 。
NO是一种具有广泛生物学效应的小分子化合
物 ,可直接参与和炎症有关的细胞因子的调节 ,在免
疫调控方面具有重要作用[ 11] 。研究证实 , NO 与炎
症存在密切关系 ,它在机体内的生物化学过程主要
包括 3 个基本反应:1)与可溶性鸟苷酸环化酶
(sGC)的亚铁血红素基团结合 ,激活 sGC 产生和释
放 cGMP;2)被氧合血红蛋白灭活 ,生成正铁血红
蛋白和亚硝酸盐;3)与超氧离子反应生成有毒的强
氧化物(ONOO)。在炎症反应过程中 ,因损伤因子
的作用 ,部分组织遭到破坏 ,出现血管扩张 、局部血
量增多 ,而且血浆和白细胞从血管渗出增多。接着
发生修复 ,受损伤的组织得以愈合 。由此可见 ,炎症
反应与修复过程有着紧密联系 ,炎症反应具有潜在
的危害性 ,过度的炎症反应会造成机体严重损伤 。
血管反应是炎症反应的中心环节但不是唯一环节 ,
免疫系统 、血液凝固系统和纤维蛋白溶解系统以及
细胞因子都是炎症反应的必要因素 ,而 NO 不仅在
血管反应中起主要作用 ,而且还参与免疫系统反应
和血小板的调节反应 ,并且作为细胞因子在炎症反
应中扮演了重要角色[ 12] 。
研究结果表明 ,金樱根对急慢性炎症均有较好
的抑制作用 ,能够有效抑制炎症反应过程中的组织
增生及炎症因子 NO的形成 ,表明 ,金樱根对由炎症
引起的相关疾病具有一定的防治作用 。因此 ,鉴于
许多化学合成抗炎药物具有较强毒副作用的情况
下 ,应加强推广该药物在临床上的应用 。
[ 参 考 文 献]
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(责任编辑:冯　卫)
·150· 　　　　　　　　　　　　 　　　　　贵 州 农 业 科 学 2010 , 39卷