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荔枝壳多糖的超声波提取及其抗氧化活性研究



全 文 :荔枝壳多糖的超声波提取及其抗氧化活性研究
赵丹丹,陈盛余* ,凌绍明,史兵方,张金磊,李 丽
(广西高校桂西生态环境分析和污染控制重点实验室,百色学院,广西百色 533000)
摘要 [目的]优化荔枝壳多糖的超声提取工艺,并研究其抗氧化活性。[方法]通过单因素试验和正交试验研究提取温度、提取时间、
提取功率和料液比对荔枝壳多糖提取率的影响,确定最佳提取工艺;采用总抗氧化活性评价荔枝壳多糖的抗氧化活性。[结果]荔枝壳
多糖的最佳提取工艺为提取温度 80 ℃,提取时间 2. 5 h,超声功率 180 W,料液比为 1∶ 25 g /mL;荔枝壳多糖总抗氧化活性随多糖浓度增
大而提高。[结论]该提取工艺简单、高效,荔枝壳多糖提取率高,提取的多糖具有抗氧化活性。
关键词 荔枝壳多糖;超声波提取;抗氧化活性
中图分类号 S667. 1 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2016)04 -123 -03
The Ultrasonic Extraction of Litchi Pericarp Polysaccharides and Study on Its Antioxidant Activity
ZHAO Dan-dan,CHEN Sheng-yu* ,LING Shao-ming et al (Key Laboratory of Ecological Environmental Analysis and Pollution Control
of Universities in Guangxi,Baise University,Baise,Guangxi 533000)
Abstract [Objective]The aim was to optimize ultrasonic extraction conditions and study antioxidant activities of litchi pericarp polysaccha-
rides. [Method]The effects of extraction temperature,time,ultrasonic power,solid-to-liquid ratio on polysaccharides yield were investigated
by single-factor experiments and orthogonal experiment to obtain optimum extraction conditions;the antioxidant activities of litchi pericarp pol-
ysaccharides were evaluated by the total antioxidant activity. [Result]Optimum extraction process were extraction temperature of 80 ℃,ex-
traction time of 2. 5 hours,ultrasonic power of 180 W,solid-liquid ratio of 1∶ 25 g /mL;the total antioxidant activity was increased with the in-
creasing concentration of polysaccharides. [Conclusion]The extraction process is simple and efficient. The extraction rate of litchi pericarp
polysaccharides with antioxidant activities is high.
Key words Litchi pericarp polysaccharides;Ultrasonic extraction;Antioxidant activity
基金项目 广西高等学校优势特色专业建设项目(桂教高教[2014]52
号)。
作者简介 赵丹丹(1985 - ) ,女,吉林通化人,讲师,硕士,从事天然产
物化学和电分析化学研究。* 通讯作者,讲师,硕士,从事
有机合成与天然产物化学研究。
收稿日期 2016-01-08
荔枝的果肉鲜美、味甜,并含有多种活性成分[1],深受人
们喜爱。人们对荔枝果实进行利用时往往只保留果肉而将
荔枝壳丢弃,因此产生大量荔枝壳废弃物,如果处理不当会
进一步污染环境。荔枝壳虽然属于农作物废弃物,但壳内含
多种功能成分,具多种保健功效。研究表明,荔枝壳含有多
糖物质,具有抗氧化活性[2],对高血压、肿瘤等有良好的辅助
疗效[3],潜在利用价值巨大。所以将荔枝壳进行开发利用已
经成为荔枝深加工的趋势,其多糖的提取利用也成为研究热
点之一。
目前对荔枝壳多糖的提取研究已有报道,比如采用传统
水提法对荔枝壳多糖进行提取[4],但是该方法提取率较低,
提取工艺还有待改进。还有研究表明,采用超声波提取荔枝
果肉多糖效率较高[5],但在荔枝壳的提取中却极少报道。因
此,笔者采用超声波提取法对荔枝壳进行提取,旨在改进荔
枝壳多糖的提取工艺,为荔枝壳的资源化再利用提供科学
依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 原料及试剂。原料:荔枝壳,从百色市右江区金三角
市场购买新鲜黑叶荔枝,把荔枝壳取下洗干净,自然晒干后
粉碎过 60目筛,干燥保存。主要试剂:新蒸苯酚;葡萄糖、浓
硫酸、无水乙醇、双氧水、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)
等,购自国药集团化学试剂有限公司,均为分析纯;试验用水
为一次蒸馏水。
1. 1. 2 主要仪器。KQ5200 型超声波清洗仪,DHG-907A 型
电热鼓风烘箱,TGL-16M 型湘仪台式离心机,UV-2700 型岛
津紫外可见分光光度计,BSA124S型赛多利斯分析天平。
1. 2 方法
1. 2. 1 标准溶液配制。精密称取0. 016 2 g干燥至恒重的无
水葡萄糖,定容于 100 mL的容量瓶中,即得 162 μg /mL的葡
萄糖溶液。
1. 2. 2 荔枝壳多糖的测定方法。依据以葡萄糖为标准品的
硫酸 -苯酚比色法进行测定[5]。
1. 2. 3 标准曲线绘制。分别精密吸取 0. 20、0. 40、0. 60、
0. 80、1. 00 mL葡萄糖溶液置于 5支具塞试管中,然后各加入
蒸馏水补至 2. 00 mL,再依次各加入 1. 00 mL的 6%苯酚,摇
均匀后也依次各加入 10. 00 mL的浓硫酸,另外以不加葡萄
糖的相同试剂做空白,放置 5 min后转到沸水中加热 15 min,
再转移到冷水中冷却,30 min 后在波长 490 nm 处测定吸光
度[6]。以质量浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标做线
性回归,得到线性方程:A =0. 005 9C +0. 005 5,r =0. 999 5。
1. 2. 4 供试品溶液制备。称取荔枝壳粉末样品 5. 00 g放入
250 mL具塞锥形瓶中,按照比例加入蒸馏水,在一定超声功
率、温度、时间内进行提取,提取结束后抽滤,滤液浓缩后定
容于 100 mL容量瓶中。移取上述溶液 10. 00 mL,加 4 倍无
水乙醇置于 4 ℃的冰箱中醇沉 12 h,在 8 000 r /min 中离心
10 min,得到醇沉物,再用水将醇沉物定容于 25 mL容量瓶中
即为试品溶液。
1. 2. 5 供试品溶液测定。按照“1. 2. 3”标准溶液的测定方
法测定样品液,通过测定样品液吸光度,可以从标准曲线查
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2016,44(4) :123 - 125 责任编辑 李菲菲 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.04.041
出含量,并计算多糖提取率。
多糖提取率 = (提取的多糖量 /提取荔枝壳质量)×
100%
1. 2. 6 多糖抗氧化活性研究。按照“1. 2. 4”处理得到的醇
沉物为荔枝壳粗多糖,将干燥粗多糖配成不同浓度进行抗氧
化活性研究。根据文献方法,考察了荔枝壳多糖对超氧阴离
子自由基、羟基自由基和 DPPH自由基的清除作用[7 -12]。
2 结果与分析
2. 1 单因素试验
2. 1. 1 超声波功率对多糖提取率的影响。在提取温度为
70 ℃、提取时间为 0. 5 h、提取料液比为 1∶ 20 g /mL条件下,
分别考察了超声功率为 120、140、160、180、200 W对荔枝壳多
糖提取率的影响。由图 1可以看出,当超声功率从 120 W增
大到 200 W时,提取率先增大后减小,在 180 W时提取率最
大。所以,以多糖提取率为指标应该选择 180 W 的超声
功率。
图 1 超声波功率对多糖提取率的影响
Fig. 1 Effects of ultrasonic power on polysaccharide extraction
rate
2. 1. 2 提取温度对多糖提取率的影响。在超声功率为
180 W、提取时间为 0. 5 h、提取料液比为 1∶ 20 g /mL条件下,
分别考察了提取温度为 40、50、60、70、80 ℃时对荔枝壳多糖
提取率的影响。由图 2 可知,多糖提取率随温度增大而增
大,主要是因为温度越高多糖从荔枝壳扩散出来的速度越
快,所以在温度高时提取率较高;但是当温度超过 80 ℃后,
水浴的水蒸发较快,不利于提取。所以,选择 80 ℃为提取
温度。
2. 1. 3 提取时间对多糖提取率的影响。在超声功率为
180 W、提取温度为 80 ℃、提取料液比为 1∶ 20 g /mL条件下,
分别考察了提取时间为 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 h对荔枝壳多
糖提取率的影响。由图 3可知,在提取时间为 2. 0 h处,荔枝
壳多糖的提取率有最大值,所以选择提取时间为 2. 0 h。
2. 1. 4 料液比对多糖提取率的影响。在超声功率为 180 W、
提取温度为 80 ℃、提取时间为 2. 0 h条件下,分别考察了料
液比为 1∶ 15、1∶ 20、1∶ 25、1∶ 30、1∶ 35 g /mL对荔枝壳多糖提取
率的影响。由图 4 可以看出,当料液比从 1∶ 15 g /mL 变到
1∶ 25 g /mL时提取率有明显增大趋势,当料液比从 1 ∶ 25
g /mL变到 1∶ 35 g /mL时,提取率增大趋势不明显,主要是因
为在 1∶ 25 g /mL的比例下已经有大部分多糖被提取出来,继
图 2 提取温度对多糖提取率的影响
Fig. 2 Effects of temperature on polysaccharide extraction rate
图 3 提取时间对多糖提取率的影响
Fig. 3 Effects of time on polysaccharide extraction rate
续增加溶剂,多糖的溶出量也很有限。所以从节能出发,选
择 1∶ 25 g /mL的料液比比较合适。
图 4 料液比对多糖提取率的影响
Fig. 4 Effects of solid-liquid ratio on polysaccharide extraction
rate
2. 2 正交试验 在上述单因素试验基础上选择提取时间、
超声功率、提取温度、料液比为影响因素,以多糖提取率为指
标,进行 4因素 3水平 L9(3
4)正交试验,试验因素水平和结
果分别见表 1和表 2。
由极差分析可知,RC > RB > RA > RD,所以对荔枝壳多糖
提取影响最大的因素为提取温度,其次为超声功率,再次为
提取时间,最后是料液比。由均值比较得知,最佳工艺组合
为 A3B2C3D2,即最佳提取工艺参数为提取时间2. 5 h、超声功
率 180 W,提取温度 80 ℃,料液比为 1∶ 25 g /mL。
2. 3 最佳工艺验证 在最佳工艺条件下对荔枝壳进行提
421 安徽农业科学 2016 年
表 1 荔枝壳多糖提取正交试验因素水平设计
Table 1 Design of orthogonal test for extraction of litchi pericarp pol-
ysaccharides
水平
Level
因素 Factors
时间(A)
Time∥h
功率(B)
Power∥W
温度(C)
Temperature

料液比(D)
Solid-liquid
ratio∥g /mL
1 1. 5 160 70 1∶ 20
2 2. 0 180 75 1∶ 25
3 2. 5 200 80 1∶ 30
表 2 荔枝壳多糖提取 L9(3
4)正交试验分析结果
Table 2 The analysis results of L9(3
4)orthogonal test for extraction of
litchi pericarp polysaccharides
试验号
Test No.
因素 Factors
A B C D
提取率
Extraction rate∥%
1 1 1 1 1 0. 601
2 1 2 2 2 0. 976
3 1 3 3 3 1. 176
4 2 1 2 3 0. 930
5 2 2 3 1 1. 412
6 2 3 1 2 0. 721
7 3 1 3 2 1. 306
8 3 2 1 3 0. 824
9 3 3 2 1 0. 935
K1 0. 918 0. 946 0. 715 0. 983
K2 1. 021 1. 071 0. 947 1. 001
K3 1. 022 0. 944 1. 298 0. 977
R 0. 104 0. 127 0. 583 0. 024
取,并测定含量,平行进行 5次,结果得到荔枝壳多糖平均提
取率为 1. 45%,RSD为 1. 92%,所以该工艺属于最佳工艺。
2. 4 荔枝壳粗多糖抗氧化性研究 由表 3 可知,荔枝壳粗
多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基和 DPPH自由基均有
一定的清除能力。当多糖用量从 25 μg增大到 100 μg时,其
表 3 粗多糖的自由基清除能力
Table 3 Free radical scavenging activity of crude polysaccharides
样品
Samples
用量
Dosage
μg
清除能力 Scavenging ability ∥%
超氧阴离子自由基
Superoxide anion
radical
羟基自由基
Hydroxyl free
radical
DPPH自由基
DPPH free
radical
粗多糖 25 11. 3 9. 8 8. 7
Crude 50 23. 8 23. 1 18. 5
polysaccharides 100 32. 1 28. 9 24. 2
清除能力也随之增强。由此可见,荔枝壳多糖具有抗氧化作
用,与相关文献报道相符[2,13]。
3 结论与讨论
该研究得出,荔枝壳多糖的最佳提取工艺为提取时间
2. 5 h,超声功率 180 W,提取温度 80 ℃,料液比为 1 ∶ 25
g /mL,在最佳工艺下,荔枝壳多糖的提取率达到 1. 45%。荔
枝壳多糖在用量为 25 ~100 μg的范围表现出不同程度的清
除超氧阴离子自由基、羟基自由基和 DPPH 自由基的能力,
具有良好的抗氧化活性。荔枝壳多糖采用超声波提取的提
取率比传统水提法高[4],主要是因为超声波能够加速多糖分
子从荔枝壳中溶出。荔枝壳的活性成分溶出量受到料液比、
超声波功率、提取时间和提取温度的影响,各因素间的溶出
机理有待进一步研究。
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52144 卷 4 期 赵丹丹等 荔枝壳多糖的超声波提取及其抗氧化活性研究