全 文 ：党参等中药 , 加以土茯苓等解毒药共用起到抗癌扶正的作用 , 化
积颗粒是在益气 、活血 、解毒治则下选药组方 ,协同化疗体现明确
的抑瘤作用达 42. 3%。以往的研究结果提示 , 化积颗粒明确具
有抑瘤作用 , 并影响 S
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小鼠 P53和 PCNA表达 , 为了进一步说明
益气活血解毒治则的正确性 , 本研究就原复方中分别体现益气 、
活血 、解毒的药味进行分组 , 即形成拆方 1(益气组 ), 拆方 2(益
气解毒组),拆方 3(益气活血解毒组), 通过抑瘤率比较说明 , 无
论单纯中药还是中药合用化疗药物 CTX, 均显示原方和益气活血
解毒组的抑瘤效果优于益气和益气解毒组;本实验研究结果证明
化积颗粒的抑瘤作用 ,通过拆方研究表明:益气组和解毒组的抑
瘤作用均小于益气解毒组和原处方组;化积颗粒合并化疗药结果
也显示同样的作用结果 ,由此亦说明中医治则指导下的化积颗粒
临床疗效明确。
中药各组与化疗药物合用 , 均有提高 NK细胞活性的作用 ,
而在 NK活性方面未能显示与抑瘤率类同结果和趋势 , 这也是今
后需详细研究的内容。由此提示 , 一方面益气活血解毒治则的正
确性及其指导下复方治疗肿瘤的明确疗效;另一方面在复方中体
现某一类功效的有效部位群和有效成分研究是目前亟待解决的
问题。
参考文献:
[ 1 ] 　孙　燕 ,余桂清.中西医结合防治肿瘤 [M ] .北京:北京医科大学中
国协和医科大学联合出版社 , 1995:56.
收稿日期:2006-09-07;　修订日期:2006-12-20
作者简介:陈燕祥(1962-),男(汉族),湖北武汉人 ,现任武汉市第七医院
副主任中药师 ,学士学位 ,主要从事中药制剂开发及质量标准研究工作.
高效液相色谱法测定断血流
胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量
陈燕祥
(湖北省武汉市第七医院　430022)
摘要:目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳ b的含量。方法 采用反相高效液相色谱法 ,
色谱柱为 H ype rsil BDS-C
18
(4. 6 mm ×200 mm , 5 μm), 流动相为甲醇 -水(80∶20), 检测波长为 250 nm ,流速为 1 m l
m in- 1。结果 醉鱼草皂苷Ⅳ b在 3. 17 ～ 31. 7 μg /m l范围内峰面积与其浓度呈良好的线性关系 , 平均回收率为 99. 4%
(RSD =1. 2%)。结论 此法简便 、准确 ,可作为断血流胶囊含量测定的方法。
关键词:断血流胶囊;　醉鱼草皂苷Ⅳ b;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)04-0867-02
HPLC Determ ination of BuddlejasaponinsⅣ b in Duan Xueliu Capsules
CHEN Y an-x iang
(The Seventh Hospital ofWuhan ,Wuhan 430022, China)
Abstract:Objec tive To establish a me thod of HPLC fo r de term ina tion o f Budd le ja saponinsⅣ b in Duan Xueliu Capsu les. Meth-
ods The RP-HPLC me thod was used. The S im-pack was Hype rsilBDS-C18(4. 6 mm ×200 mm , 5μm). Them ob ile phase was me tha-
no l-wa te r(80∶20) and the de tection w ave length was 250 nm. The flow rate w as 1. 0 m l m in- 1. R esu lts The calibration curves
w ere linear in the range of 3. 17～ 31. 7μg /m l fo rBudd le jasaponinsⅣb. The average recove ry o f Buddle jasaponinsⅣ b was 9 9. 4%
(RSD =1. 2%). Conc lusion The me thod is sim ple , accura te and can be used fo r determ ination o f Duan Xue liu Capsu le s.
Key words:Duan Xue L iu Capsu le s;　Budd le jasaponinsⅣ b;　H PLC
　　醉鱼草皂苷Ⅳ b又名断血流皂苷 A, 断血流胶囊原质量标准
中采用薄层扫描法测定其在制剂中含量 [ 1] , 此法由于杂质干扰 ,
薄层色带颜色深 , 结果重现性差 [ 2] 。本文作者尝试采用文献方
法 [ 2～ 4]测定断血流胶囊中的醉鱼皂苷Ⅳ b的含量 , 并进行方法学
验证。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪 (岛津 LC-10AT, 检测器 SPD-10A, 浙大 N-
2000软件), 数控超声波清洗器 (KQ-300DE型 , 昆山市超声仪器
有限公司),分析天平(德国塞多利斯 GEN IUS210型);断血流胶
囊(江苏晨牌药业有限公司生产 , 规格:0. 35 g /粒 , 批号 050529,
050610;自制 ,规格:0. 35 g /粒 , 批号 050901, 050902, 050903),醉
鱼草皂苷Ⅳ b . (断血流皂苷 A)对照品(中国药品生物制品检定
所提供 , 含量测定用 ,批号 110782-200301), 甲醇 (色谱纯), 其他
试剂均为分析纯。水为重蒸水 。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱为 C18(大连依利特 H ype rsil BDS C18 , 4. 6
mm ×200 mm , 5 μm);流动相为甲醇 -水(80∶20);检测波长为
250 nm;流速 1 m l /m in;柱温为室温;灵敏度 0. 04 AUFS。
2. 2　系统适用性实验 在上述色谱条件下 , 精密吸取醉鱼草皂苷
Ⅳ b对照品溶液及供试品溶液各 20μl,分别注入液相色谱仪 , 记
录色谱图(见图 1 ～ 2)。在该色谱条件下 , 供试品色谱中在与醉
鱼草皂苷Ⅳb对照品色谱相应的保留时间位置上有相应的色谱
峰 , 理论板数按醉鱼草皂苷Ⅳ b峰计算 ,对照品为 2619, 供试品为
4737,主峰和杂峰之间的分离度均大于 1. 5, 符合《中国药典》要
求 , 规定理论板数按醉鱼草皂苷Ⅳ b峰计算不得低于 2000。
在上述色谱条件下 ,精密吸取线性验证中序号为 4的对照品
溶液 20μl,注入液相色谱仪 , 连续进样操作 5次 ,醉鱼草皂苷Ⅳ b
峰面积 RSD 值 1. 9%, 对照品进样重复性符合《中国药典》要求。
2. 3　专属性验证 按照工艺 , 制成不含断血流的阴性样品 , 同供
试品溶液制备法制备得阴性样溶液。在上述色谱条件下 ,精密吸
取阴性样品溶液 20 μl, 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 (见图 3)。
在该色谱条件下 ,在与醉鱼草皂苷Ⅳ b保留时间相同的位置未出
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LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007VOL. 18NO. 4 时珍国医国药 2007年第 18卷第 4期
现色谱峰 , 表明其它成分对醉鱼草皂苷Ⅳ b的测定无干扰 , 方法
的专属性符合要求。
图 1　醉鱼草皂苷Ⅳ b对照品液相色谱图
2. 4　线性验证 精密称取醉鱼草皂苷Ⅳ b对照品 3. 17 mg, 置 50
m l量瓶中 ,加甲醇至刻度 , 使溶解 , 摇匀 , 精密量取 0. 5, 1, 2, 4, 5
m l, 分置 10 m l量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀。吸取上述 5种浓度的
溶液各 20μl注入液相色谱仪 , 以醉鱼草皂苷Ⅳ b峰面积为纵坐
标 , 浓度为横坐标 , 得线性方程为:Y =7621. 5X ～ 2317. 2, r=
0. 999 8。表明醉鱼草皂苷Ⅳb浓度在 3. 17 ～ 31. 7 μg /m l范围内
峰面积线性关系良好 。
2. 5　重复性实验 取同一批号的供试品 (050901), 按供试品含
量测定项下方法测定 6次 , 结果醉鱼草皂苷Ⅳ b平均含量为 2. 2
m g /粒 , RSD 值为 1. 4%。
图 2　供试品液相色谱图
图 3　缺断血流阴性样品液相色谱图
2. 6　稳定性实验 精密吸取断血流胶囊供试品(050901)溶液 20
μl,分别在 0, 4, 8, 24, 28 h测定 ,结果醉鱼草皂苷Ⅳ b峰面积平均
值为 117154. 4, RSD 值为 1. 0%。 供试品溶液 28 h内稳定性良
好 , 可满足测定时间的要求。
2. 7　加样回收率实验 精密称取已知含量的样品(050901)6份 ,
分别精密加入不同浓度醉鱼草皂苷Ⅳ b对照品溶液 10 m l, 按供
试品含量测定项下的方法进行操作 ,测定并计算样品中醉鱼草皂
Ⅳ b的回收率。结果见表 1。
表 1　醉鱼草皂苷Ⅳ b加样回收率实验结果
已知量
m /μg
含量
m /μg
测得量
m /μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
820. 29 790. 0 1 609. 11 99. 9
815. 26 790. 0 1 583. 52 97. 2
1 022. 69 1 147. 0 2 165. 24 99. 6 99. 4 1. 2
1 071. 09 1 147. 0 2 229. 29 101. 0
1 343. 89 1 589. 0 2 924. 11 99. 4
1 359. 60 1 589. 0 2 937. 22 99. 3
2. 8　供试品的含量测定
2. 8. 1　对照品溶液的制备 精密称取醉鱼草皂苷Ⅳ b对照品适
量 , 用甲醇制成每毫升含 15 μg的溶液 , 作为对照品溶液。
2. 8. 2　供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物 , 混
匀 , 研细 , 取 0. 3 g, 用 75%乙醇 50 m l分别超声提取 (300W , 40
kH z)2次 , 15 m in /次 , 滤过 ,滤液置 100 m l量瓶中 , 加 75%乙醇至
刻度 , 摇匀 ,用微孔滤膜(0. 45μm)滤过 , 取续滤液 ,即得。
2. 8. 3　测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20 μl, 在
上述色谱条件下注入液相色谱仪 ,测定 , 即得。
2. 8. 4　5批样品含量测定 结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
批号 每粒中醉鱼皂苷Ⅳb含量 m /mg RSD(%)
050901 2. 22 1. 4
050902 1. 61 0. 8
050903 2. 25 1. 3
050529 1. 68 1. 9
050610 1. 68 1. 23
3　讨论
用高效液相色谱法测定断血流中醉鱼草皂苷Ⅳ b含量 ,经线
性 、精密度(重复性实验 、稳定性实验)、准确度 (加样回收率实
验)、专属性等方法学验证 , 证明其符合定量分析的要求 , 且简
便 、快速 ,适于作为断血流胶囊的含量测定方法。故将已有标准
中含量测定的方法由薄层扫描法修改为高效液相色谱法是可
行的。
3. 1　检测波长的选择 取醉鱼草皂苷Ⅳ b对照品适量 , 加甲醇溶
解制成每毫升含 0. 01 m g的溶液 , 结果在 250 nm 处有较强的吸
收 , 与文献 [ 2 ～ 4]记载一致 ,故选择 250 nm处作为检测波长。
3. 2　供试品溶液制备方法的选择 将用 3种方法制备的同一批
号的供试品溶液注入色谱仪 , 测定。结果醉鱼草皂苷Ⅳ b含量 ,
方法 1(按断血流片标准 [ 4]中的方法)为 1. 48 mg /粒 , 方法 2(按
文献 [ 3]方法)为 2. 04 m g /粒 , 方法 3(溶剂改为甲醇 ,余同方法 2)
为 1. 92 mg /粒。 3种制备方法测得的醉鱼草皂苷Ⅳ b含量以方
法 1最低 , 方法 2最高 ,且方法 2操作的简便性 、环保性也较好 ,
故供试品制备方法选择方法 2为宜。
参考文献:
[ 1 ] 　卫生部药品标准 新药转正标准 ,第 27册 [ S] . 2000:53.
[ 2 ] 　徐国兵 ,方晓明 ,樊和平.高效液相色谱测定断血流颗粒中断血流
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[ 3 ] 　杨　絮 ,余世春 ,王有胜 ,等. HPLC法测定断血流片中断血流皂苷
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[ 4 ] 　国家药典委员会 , 中国药典 , Ⅰ 部. [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:608.
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 4期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M ED ICA RESEARCH 2007VOL. 18 NO. 4