全 文 ：1 3 1 6 一 药物分析杂志 C hin J P ha r m An a l 2 0 0 8 , 28 ( 8 )
S P E 一 H P L C 测定断血流胶囊中醉鱼草皂普 VI b 的含量
何兵 , 田吉 , 李春红 , 艾洪兵
(沪州医学院药学院药物研究所 , 沪州 64 600 )
摘要 目的 :建立固相萃取 一 高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂昔W b 的含量 。 方法 : 色谱柱 : iD k m a rK o m as il C 18柱
( 5 卜m , 250 m m x 4 . 6 m m ) ; 流动相 : 甲醇 一 水 ( 50 “ 2 0 ) ;流速 : 0 . 8 n oL · : n i n 一 ’ ;检测波长 : 2 50 n m : 柱温 : 4 0 ℃ 。 结果 :醉鱼草皂
营 W b 在 0 . 1 5 一 1. 2 协g 范围内具有 良好的线性关系 ( r = 0 . 9 999 ) , 总平均加样回收率为 98 . 8 % ( 。 = 9 ) 。 结论 :该方法简便 、快
速 、有效 、 灵敏 、准确 ,具有良好的重复性和回收率 , 可作为该制剂的定量分析方法 「_
关键词 : S P ;E H P L C ; 断血流胶囊 ;醉鱼草皂曹 W b ;含量测定
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 254 一 17 9 3 ( 200 8 )08 一 131 6 一 03
S P E 一 H P L C d e t e r m i n a t i o n o f b u d d lej a s a P o n i n s
VI b i n D u a n x u e l iu c a P s u l e s
H E B i n g
,
T IA N Ji
,
L l C h u n 一 h o n g , A l H o n g 一 b i n g
( I
n 、 1 1一u 一e ( ,1 M a 一。 , i。 M o d i o a o f L u z l i` ) t; M e o li。
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A b s t r a c t O bj e e t i v e : T o e s 一a b l i s ll a m e r h o d fo r th e e o n t e n r d e *e r m i n a t io n o f b u d d lej a s a P o n i n s VI b i n Du a n x u e l i u
e a p s u l e
s
b y S P E 一 H P L C
.
M e t h o d s : T卜l e s e p a r a t i o n w a s e a r r i e d o u t o n a D i km a K ro m a s i l C 【、 e o lu m n ( 5 林m , 2 5 0
m n 、 x 4
.
6 m ; n )
.
hT
e n l o b i l e p h a
s e w a s m e t h a n o l 一 、 a le r ( 80 : 2 0 )
.
T h e fl o w : a te w a s o
.
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T h e d e re e t i
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w a v e l e n g th w a s s e t a t 2 5 0
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a , l g e ` ,「0 . 15 一 1 . 2 卜g ( r = 0 . 9 9 9 9 ) . ` r ll e a v e r a g e r e e o v e l · y w a s 9 8 . 8% ( n = 9 ) . C o n c lu s i o n : T h i s
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x℃p r o d u e i b l e , i t e a n b e u s e (1 a s a q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s
盯一e r l一o d (o r t圣一i s P比 p a r a ri o r z .
K e y w o r d s
:
S PE : H P LC ; D u a n
x u e l i u e a p s u l e s ; b u d d lej a s a P
o n i n s VI b ;
(: o ; , t e n t d e t e
r
m i n a ti o n
断血流胶囊是由断血流干浸膏制成的胶囊剂 ,
具有凉血止血之功效 ,主要用于功能性子宫出血 、 月
经过多 、 产后 出血 、 子宫肌瘤出血 、尿血 、便血 、 吐血 、
鼻此 、单纯性紫瘫 、原发性血小板减少性紫疲等 L’」。
本文采用 固相萃取法纯化断血流胶囊的供试品溶
液 ,再用 H PL c 法测定胶囊中有效成分醉鱼草皂昔
W b 的含量 。 该方法简单快速 ,具有 良好 的重复性
和回收率 , 可用于该制剂的质量控制 。
1 仪器与试药
戴安高效液相色谱仪 ( 既 80 A 四元低压 梯度
泵 , P D A 一 10 0 二极管阵列检测器 , T C C 一 10 柱温
箱 , C h or , n e l e o , 1 色谱工作站 ) ; H S E 一 12 固相萃取装
置 (天津恒奥科技发展有限公司 ) ; 固相萃取小柱
( B e
s e p s P E c o一u m n , c , 8 , 5 0 0 m g · 6 m L 一 ’ ) ; 瑞士
P ,
,
e 〔、 ,、 a 电子天平 ( X R 2 0 5 SM 一 D R ) : CQX 2 5 一 0 6 超
声波清洗器 (上 海 必 能 信超 声 有 限 公 司 , 功 率
2 50 W
,频率 2 5 k H z ) 。
醉鱼草皂昔 W I ) ( 1 10 7 8 2 一 2 0 0 3 0 1 ) , r于, 国药品
生物制品检定所提供 。 在选定色谱条件分离后按面
积归一化法 计算含量为 98 . 76 % , 符合含量 限度要
求 ,故含量以 10 0% 计算 。
甲醇为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯 ;水为重蒸
馏水 。
断血流胶囊 , 四川科瑞德制药有限公司 , 规格 :
0
.
3 5 9
· 粒 一 ’ ,批号 : 0 6 0 5 0 1 , 0 6 0 7 10 , 0 6 0 5 0 3 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱 条件 色谱柱 : D i km a K r o m a s i l C .: ( 5
林m , 2 5 0 m m x 4 . 6 m m ) ;流动相 : 甲醇 一 水 ( 8 0 : 2 0 ) ;
检测波长 : 2 5 0 n m ; 柱 温 : 4 0 ℃ ; 流速 : 0 . 8 m L ·
m i。 一 ’ :进样量 : 10 林 L 。
第一作者 『 l’ 。 l : 1 39 8 2 7 7 0 72 1 ; E 一 n , a i l : ly h h2 0 OS@ 12 6 . e o m
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 08. 013
药物分析杂志 h Ci n J Ph a r m A n a l 20 0 8, 28 ( 8 ) 一 1 3 1 7 一
2
.
2 溶液的制备
2
.
2
.
1 对照品溶液 取经五氧化二磷减压干燥至
恒重的醉鱼草皂昔 W b 对照品适量 ,精密称定 , 加流
动相制成每 1 m L 含醉鱼草皂昔 W b o . 0 6 m g 的溶
液 , 即得 。
2
.
2
.
2 供试品溶液 精密称取内容物约 0 . 2 9 , 置
具塞锥形瓶中 , 精密加人 50 % 甲醇 25 m L , 超声 5
m in
,使其溶解 ,离心 , 过滤 ,取滤液通过预处理好的
C
, 8固相萃取小柱 (甲醇 10 m L 活化 ,水 5 m L 平衡 ) ,
用 甲醇 5 m L 洗脱 , 收集洗脱液 , 用 甲醇定容到 25
m L
,摇匀 , 以 0 . 45 林m 的滤膜过滤 , 即得 。
2
.
2
.
3 阴性对照溶液 取按处方比例及制备工艺
制得不含断血流浸膏的阴性样品 , 按 “ 2 . 2 . 2 ” 项下
方法制成阴性对照溶液 。
2
.
3 系统适应性试验 分别精密吸取对照品溶液 、
供试品溶液 、 阴性对照溶液各 10 林L , 注人高效液相
色谱仪 , 记录色谱图 ,结果见图 l 。 从图 l 可见 , 醉
鱼草皂昔 W b 的保留时间约为 10 . 2 Iin n , 与相邻色
谱峰的分离度大于 1 . 5 ,拖尾因子为 0 . 9 ,理论塔板
数以醉鱼草皂昔W b 峰计为 8 7 62 。 阴性对照在醉鱼
草皂昔 W b 峰处无 干扰 , 即本试验条件下醉鱼草皂
昔W b 与其他组分分离完全 。
2
.
4 线性关系考察 分别精密吸取醉鱼草皂昔 W b
对照品溶液 ( 0 . 0 6 m g · m L 一 ’ ) 2 . 5 , 5 , 10 , 15 , 2 0 林 L ,
注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,
以峰面积 A 对进样量 C ( 林g )进行回归 , 得 回归方
程 :
A = 39
.
6 C + 0
.
0 3 5 2 r = 0
.
9 9 9 9
结果表明 , 醉鱼草皂 普 VI b 在 。 . 巧 一 1 . 2 林g 范 围
内 , 山条面积与进样量有良好的线性关系 。
2
.
5 精密度试验 精密吸取 “ 2 . 2 . 2 ” 项下的同一
供试品溶液 10 林L ,按上述色谱条件连续进样 5 次 ,
测得醉鱼草皂昔 W b 的峰面积的 R s D 为 0 . 26 % ( n
二 5 )
。 表明仪器精密度良好 。
2
.
6 重 复 性 试 验 取 同一 批号 样 品 ( 批 号 :
0 6 0 5 01 )
, 照 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方法 ,制备 5 份供试品溶
液 , 分别精密进样 10 林L ,测得醉鱼草皂昔 W b 的平
均含量为 6 . 0 7 8 5 n l g · g 一 ` , n s D 为 0 . 6 5% ( n = 5 ) 。
表明本方法重复性良好 。
2
.
7 稳定性试验 取 “ 2 , 2 . 2 ” 项下 的供试品溶液 ,
分别于制备后 O , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 12 , 2 4 h 精密进样 10
林L ,测得醉鱼草皂昔 W b 的峰面积的 R S D 为 0 . 89 %
( n 二 8 )
。 表明供试品溶液在 24 h 内稳定 。
2
.
8 加样回收试验 精密称取已知含 量 的本 品
『一 一 一刁「一 一一一飞 — l — ,0 1 0 2 0
「- - - - 一 , - — 〕厂一一一 — !0 10 2 0
「- - 一 — 一刁「一 — .0 10 2 0 之 /田 I n
图 l 对照 .钻 ( A ) 、供试品 ( )B 和阴性对照 ( C ) H IP .C 色谱图
F 19 1 H P L C
c
h
r o
m a l
o g r a m s 。) f er 介 : e , l e e s u b、 ran c e ( A ) , s a m r , l e ( B ) a n d
n e g a t i v
e
( C )
1
. 醉 f自草皂廿 VI I, ( b u d d lej a s a p o n i n s VI b )
(批号 : 0 6 0 5 0 1 , 含量 : 6 . 0 7 8 5 m g · g 一 ` )细粉 9 份 ,每
份约 0 . 2 9 , 分成 3 组 ,每组 3 份 ,分别精密添加浓度
为 0 . 4 0 2 m g · m I J 一 ’ 的醉鱼草皂昔 W h 对 照品溶液
2
,
3
,
4 m I
J ,照 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方法制备供试品溶液 ,分
别按上述色谱条件测定 , 测得低 、 中 、高 3 组浓度下
的平均加样回收率分别为 98 . 8% , 98 . 9% , 98 . 8% ;
R SD 分别为 0 . 2 9% , 0 . 4 8% , 0 . 3 5% ( , z = 3 ) 。 总平
均加样 回收率为 9 8 . 8% , R S D 为 0 . 34 % ( n = 9 ) 。
试验结果表明 , 本法具有 良好的回收率 。
2
.
9 样品测定 分别精密量取对照品溶液和供试
品溶液 10 拜 L ,按 _ [ 述色谱条件测定并计算醉鱼草
皂昔 W b 的含量 , 3 批测得结果分别为 2 . 13 , 2 . 32 ,
2
.
2 4 m g
· 粒 一 ’ , R s D 为 0 . 5 6 , o , 7 2% , 0 . 9 5% 。
3 讨论
3
.
1 样品前处理方法的选择 断血流药材及其制
剂中 ,醉鱼草皂普 VI b 的纯化方法 ,文献报道的有液
一 液萃取 L’ 一 3 、 中性氧化铝叫 、大孔树脂 L’ 〕等 , 实验
中曾分别考察了这 几种方法 , 液 一 液萃取 (水饱和
正丁醇萃取 ) 、 中性氧化铝 、 大孔树脂 、 固相萃取处
理样品 ( 批 号 : 0 6 0 5 01 ) , 测 得 含量分别 为 5 . 86 ,
一 13 18 一 药物分析杂志 Ch in J Ph arm A n al 2 00 8 , 2 8 ( 8 )
.5 7 1
,
5
.
7 8
,
6
.
0 8 m g
·
g
一 ’ 。 可见由于固相萃取避免
了烦琐的操作 , 损失明显 比液 一 液萃取 、 中性氧化
铝 、大孔树脂要少 。 而从四者色谱峰峰形来判断除
杂效果 , 固相萃取最好 ,其次为中性氧化铝 、 大孔树
脂和液 一 液萃取 。
3
.
2 固相萃取洗脱溶剂的选择 实验 中曾考察上
样溶液及洗脱溶液的 甲醇浓度 。 经实验得知 , 采用
50 % 甲醇溶液未能将醉鱼草皂昔 W b 洗脱下来 , 而
5 5% 甲醇溶液能将部分的醉鱼草皂昔 W b 洗脱下
来 , 80 % 甲醇溶液则可将剩余的醉鱼草皂昔 W b 完
全洗脱下来 , 90 % 的甲醇洗脱液中已没有醉鱼草皂
昔 W b (。 但为保证完全洗脱 , 避免对下一样品干扰 ,
实验采用纯甲醇洗脱 。 同时上样溶液甲醇浓度应控
制在 50 % 以内 ,避免醉鱼草皂普 W b 无保留 ,直接过
柱 。
3
.
3 提取条件的选择 实验曾考察水 、 20 % 甲醇 、
30 % 甲醇 、 40 % 甲醇 、 50 % 甲醇提取供试品 ,测 出含
量无 明显差别 。 为简化实验过程 ,用 50 % 甲醇作为
提取溶剂 , 以此溶液直接 _ L柱 ,此时杂质在小柱上无
保留 ,直接过柱 ,再用纯甲醇洗脱即可将醉鱼草皂昔
W b 完全洗脱下来 。
3
.
4 本文采用 S PE 一 H PI 尤 测定断血流胶囊中主要
有效成分醉鱼草皂昔 W b 的含量 , 结果准确可靠 , 精
密度 、重复性好 ,可用于该制剂质量控制 。
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(本文于 2 0 07 年 7 月 31 日修改回 )