全 文 ：第 32 卷 第 1 期 吉 林 化 工 学 院 学 报 Vol． 32 No． 1
2015 年 1 月 JOUＲNAL OF JILIN INSTITUTE OF CHEMICAL TECHNOLOGY Jan． 2015
收稿日期:2014-12-22
基金项目:重庆市教委科研项目(No． KJ1401220) ;长江师范学院大学生创新创业训练计划(No． 2013dcxm45)
作者简介:谢林红(1990-) ，男，四川巴中人，长江师范学院本科生，主要从事化学工程与工艺方面的研究．
* 通信作者:谭建红，E-mail:tanjianhongtan@ 126． com
文章编号:1007-2853(2015)01-0016-04
鱼胆草总苷类物质提取工艺的优化
谢林红，杨富强，孙国成，谭建红*
(长江师范学院 化学化工学院，重庆 408100)
摘要:采用紫外-可见分光光度法，通过 L9(3
4)正交试验对鱼胆草中总苷类的提取工艺进行优化，选择
波长为 235 nm，线性范围为 10 ～ 23 μg /mL，相关系数为 0． 995 9．通过实验研究确定最佳提取工艺条件
为:提取时间 120 min，料液比 1 20 g /mL，提取温度 60 ℃，乙醇体积分数 80%，平均含量 2． 199% ．在优
化后的提取条件下，苷类的提取率高，为研究和开发鱼胆草的有效成分提供了参考．
关 键 词:鱼胆草;总苷类;紫外 /可见分光光度法;正交试验
中图分类号:O 175． 8 文献标志码:A DOI:10． 16039 / j． cnki． cn22 － 1249． 2015． 01． 005
鱼胆草(Swertia davidi Franch)系龙胆科獐芽
菜属植物，又名水灵芝、川东獐芽菜．以全草入药，
性寒、味苦，具有利胆健脾、清热解毒等功效［1］;
是湘西土家族苗族自治州民间常用于治疗肝炎、
胆囊炎、结膜炎、痢疾等疾病的草药［2］． 苷类又称
配糖体，是糖或糖的衍生物．其中非糖部分称为苷
元或配基，其连接的键则称为苷键，很多植物中都
含有苷类化合物，由于苷元结构不同，不同苷类物
质有不同的提取方法［3］． 獐芽菜苦苷(swertiama-
rin)是鱼胆草植物中主要有效成分之一［2］．目前，
对于鱼胆草的化学成分研究国内有报道［4-5］，对
苷类化合物分离纯化方法有高速逆流色谱法、高
效液相色谱法、大孔树脂法、凝胶柱色谱法等．本
文采用紫外-可见分光光度法测定鱼胆草植物体
中提取物总苷类含量．
1 实验仪器与试药
1． 1 仪 器
日立 U-4100 紫外 /可见 /近红外光谱仪(日
本日立高新科技公司) ，EL104 电子分析天平(特
梅勒-托利多(上海)有限公司) ，FZ102 型微型植
物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司) ，HK-2A
型超级恒温水浴箱(南京南大万和科技有限公
司) ，移液枪．
1． 2 试 剂
獐芽菜苦苷对照品(批号:17388-39-5，HPLC
＞ 98%，购于 Chengdu PureChem-Standard co．，
Ltd．) ;鱼胆草(购于贵州水灵芝专业种植基地) ;
无水乙醇等试剂均为国产分析纯．
2 方法与结果
2． 1 鱼胆草提取液的制备
鱼胆草干草用植物粉碎机进行粉碎成粉末
状，用电子天平准确称取 9 份鱼胆草干草粉末
2． 000 g盛于 9 个相同规格的锥形瓶中，并按表 1
所示的不同提取条件进行提取． 将提取液进行减
压过滤，去除残渣获得滤液．将滤液用相应体积分
数的乙醇提取，然后将乙醇提取过后的滤液再用
相应体积分数的乙醇定容得到 9 份鱼胆草提纯液
作为样品试液．
2． 2 正交试验
用 L9(3
4)正交试验［6-7］对提取时间、料液比、
乙醇体积分数、提取温度等因素进行试验，研究它
们对鱼胆草苷类化合物提取率的影响．
表 1 正交试验因素水平表
因素
水平
A
提取时间
/min
B
提取温度
/℃
C
料液比
/(g·mL －1)
D
乙醇体积
分数 /%
1 30 28 1 5 70
2 60 45 1 10 80
3 120 60 1 20 95
2． 3 测定波长的选择:
精密称取獐芽菜苦苷标准品 10． 00 mg，置于
100 mL 容量瓶中，用无水乙醇定容配制成
100 μg /mL的溶液，充分摇匀，作为标准液． 取标
准液适量两份置于 A1、A2 两个相同规格的 10 mL
比色管中，定容稀释成两份不同浓度的标准品溶
液，以无水乙醇为空白对照，将标准溶液盛于比色
皿中，置于比色池中在 200 ～ 800 nm波长段扫描．
结果表明鱼胆草提取物中总苷类在 235 nm 处有
最大吸收峰，如图 1 所示，故选 235 nm 作为鱼胆
草提取物中总苷类的测定波长．
波长 /nm
图 1 标准液吸收波长扫描
2． 4 标准曲线的绘制
用移液枪吸取标准液 1． 00、2． 00、4． 00、6． 00 mL
置于 4 个 10 mL 相同规格的比色管中，加入无水
乙醇定容至刻度，摇匀，以无水乙醇作为空白．在
235 nm处测吸光度，见表 2，经方程回归分析，得
吸光度值 A 与标准液浓度 C 之间的直线关系:
A = 0． 0288C － 0． 0610，如图 2 所示在标准液浓度
为 10 ～ 23 μg /mL范围内线性关系良好，相关系数
Ｒ2 = 0． 995 9．
表 2 标准溶液含量及其吸光度关系
标准液含量
/(μg·mL －1)
10 20 40 60
吸光度 /A 0． 254 66 0． 506 52 1． 034 66 1． 698 87
标准液含量 /(μg·mL －1)
图 2 獐芽菜苦苷标准曲线
2． 5 样品溶液的测定
用移液枪吸取试品样液，无水乙醇定容、摇
匀，用无水乙醇作空白对照．将样品试液盛于比色
皿中，置于比色池中，于 235 nm 处测定不同提取
液的吸光度．
2． 6 苷类含量的测定
采用紫外-可见分光光度法测定总苷类化合
物的含量［8-9］，用移液枪吸取 0． 100 mL试品样液，
置于 10 mL比色管中，加入无水乙醇稀释至刻度，
充分摇匀，用无水乙醇作空白对照．将样品试液盛
于比色皿中，置于比色池中，在 235 nm 处测定样
品试液的吸光度． 再根据对照品的标准曲线方程
计算提取液中的总苷类质量，然后推算出鱼胆草
中总苷类化合物的质量(以獐芽菜苦苷计，见表
3)．鱼胆草植物体中总苷类的提取率 =［试品样
液中的总苷类化合物含量(mg)/鱼胆草干草粉末
质量(g) ］× 100% ．
表 3 鱼胆草总苷类的含量测定结果(紫外 /可见分光光度法)/%
1 2 3 4 5 6 7 8 9 平均含量
2． 037 2． 307 2． 500 1． 678 2． 046 2． 229 2． 310 2． 052 2． 635 2． 199
3 结果与讨论
对苷类化合物提取的正交试验结果直观分
析，如表 4 所示:提取时间、提取温度、料液比、乙
醇体积分数的极差大小关系;提取温度 ＞提取时
间 ＞乙醇体积分数 ＞料液比，因此其主要影响因
素 B ＞ A ＞ D ＞ C．
表 4 苷类物质提取的正交试验结果表
因素
试验
序号
A
提取时
间 /min
B
提取
温度 /℃
C
料液比
/(g·mL－1)
D
乙醇体积
分数 /%
提取率
/(mg·
g －1)
1 30 28 1 5 70 20． 368
2 30 45 1 10 80 23． 065
3 30 60 1 20 95 24． 970
4 60 28 1 10 95 16． 780
5 60 45 1 20 70 20． 462
6 60 60 1 5 80 22． 291
7 120 28 1 20 80 23． 102
8 120 45 1 5 95 20． 523
9 120 60 1 10 70 26． 353
S1 22． 801 20． 084 21． 061 22． 395
S2 19． 884 21． 350 22． 066 22． 819
S3 23． 326 24． 538 22． 845 20． 758
Ｒ 3． 482 4． 454 1． 784 2． 061
71第 1 期 谢林红，等:鱼胆草总苷类物质提取工艺的优化
正交试验效应曲线如下:
提取时间 /min
图 3 提取时间对鱼胆草苷类物质提取的影响
提取温度 /℃
图 4 提取温度对鱼胆草苷类物质提取的影响
料液比 /(g·mL －1)
图 5 料液比对鱼胆草苷类物质提取的影响
乙醇体积分数 /%
图 6 乙醇体积分数对鱼胆草苷类物质提取的影响
对正交试验结果中效应曲线图分析可知:如
图 3所示．随提取时间的延长，苷类化合物提取率
先下降后升高再稍微有所下降．因为乙醇具有较强
挥发性，乙醇挥发一定程度后，此时的乙醇浓度有
利于苷类化合物的提取，故确定提取时间 120 min
为最佳．如图 4 所示．随温度的升高苷类化合物的
提取率先缓慢升高后快速升高再趋于平稳． 因为
温度越高可增大物质的溶解度和扩散速度，对鱼
胆草植物体内物质的浸出有利，考虑到能源的节
约和温度对獐芽菜苦苷稳定性的影响［10］，故选取
提取温度 60 ℃为最佳．如图 5 所示．苷类化合物
的提取率先随料液比的增大而增大再稍下降． 因
为乙醇体积用量与鱼胆草植物体内的物质浸出量
成线性关系(正相关) ，尤其是苷类化合物，故试
验确定最佳的料液比为 1 20 g /mL．如图 6 所示．
随乙醇体积分数的增大，苷类化合物的提取率先
缓慢升高后下降，不同体积分数的乙醇有相应的
极性，极性适中有利于苷类化合物的浸出，另外考
虑到高浓度的乙醇对植物细胞内部结构的影响如
细胞蛋白质结构变化、细胞渗透压等和苷类物质
提取的最大化，试验确定最佳乙醇体积分数
为 80% ．
4 结 论
本实验通过正交试验法对鱼胆草苷类化合物
的提取工艺条件优化，结果表明鱼胆草苷类化合
物提取的最优工艺条件为:提取时间 120 min、提
取温度 60 ℃、料液比 1 20 g /mL、乙醇体积分数
80% ．在试验优化后的提取条件下，苷类化合物的
提取率高，为研究和开发鱼胆草的有效成分提供
参考．
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Optimization for Extracting Process of Fish Guts
Grass Glycosides Substances
XIE Lin-hong，YANG Fu-qiang，SUN Guo-cheng，TAN Jian-hong
(College of Chemistry＆Chemical Engineering，Yangtze Normal University，Chongqing City 408100，China)
Abstract:The extraction process of fish guts grass glycosides was optimized through L9(3
4)orthogonal test by
UV-visible spectrophotometry． The wavelength is 235 nm，linearity range is 10 ～ 23 μg·mL －1，the relative
coefficient is 0． 995 9． The optimum extraction conditions were determined:the extraction time is 120 min，the
extraction temperature is 60 mL，ethanol concentration is 80%，the average content is 2． 199% ． The extraction
rate of glycosides after optimization is high which provide references for further research and exploit on effective
components of swertia davidi franch．
Key words:swertia davidi franch;glycosides;ultraviolet-visible spectrophotometry;orthogonal tests
91第 1 期 谢林红，等:鱼胆草总苷类物质提取工艺的优化