全 文 :·!#· $%&’()(*+&, -.(+/0/ 1%23 4/0/&%5. 6 -,(+(5&, 7.&%8&5*,*39: ;<<# =/>)/8?/%: @*,A BC D*A E
鱼胆草是龙胆科獐牙菜属多枝组植物。在 《中药大
辞典》和 《全国中草药汇编》均有记载 F B G。鱼胆草全草
入药,性寒,味苦,具有清热解毒、利胆健胃、杀虫之
功效,是我国的一种珍稀药材。用于急性结膜炎、急性
咽喉炎、扁桃体炎、黄疸性肝炎、胆囊炎、胃肠炎、菌
痢、泌尿道感染等。我们参照 《中药新药药效学研究指
南》 F ; G的要求,对其解热抑菌抗炎作用进行研究,所获
结果报道如下。
! 实验材料
! ! 动物和仪器 清洁级昆明种小鼠,雌雄兼用;=1
大鼠,雌雄兼用,体重 B#< H BI< 3;日本大耳白兔,体
重 ;A < H ;A E J3,均由湖南省药品检验所动物房提供,动
物合格证号:=KLM (湘);<! # 药物 鱼胆草,由湖南省吉首大学天然药物研究中
心提供;肠康片, ;<<提供;冰醋酸,<油,南京皮肤病研究所提供;角叉菜 O EIP N <#< Q,
=(38&公司出品;细菌内毒素国家标准品 (RIB),中国
药品生物制品检定所提供;阿斯匹林片,;<<海亚太药业有限公司生产。营养琼脂 O <<;;I Q、营养肉
汤 O # 方法和结果
# ! 药物配制及动物分组 鱼胆草先用水煎煮两次,制
成 B 3生药 S 8T的混悬液供试验。试验时分别用蒸馏水
配成 IA C 和 BCA E 3 S B<< 8T,供小鼠用,给药体积 8T S ;< 3,剂量分别为 ;A BI和 A !# 3 S J3 (按体表面积
折算相当人用量的 ;倍和 倍);鱼胆草分别用蒸馏水
配成 BEA B 和 !8T S J3,剂量分别为 BA EB和 !A <; 3 S J3 (按体表面积折
算相当人用量的 ;倍和 倍);鱼胆草分别用蒸馏水配
成 BRA # 和 !RA ; 3 S B<< 8T供家兔用, 给药体积 E 8T S
J3,剂量分别为 相当人用量的 ;A E 倍和 E 倍)。肠康片分别用蒸馏水
配成 ;RA E 和 BCA ; 3 S B<< 8T,供大鼠和小鼠用,剂量
相当人用量按体表面积折算为 倍量。
# # 对细菌内毒素发热家兔的解热作用 $% & 取日本大耳
白家兔,体重 ;A < H ;A E J3,雌雄兼用,按中国药典二
部附录预测家兔体温,选择符合要求的家兔 <只供试
验。均分成 组,每组 B< 只,于实验当日先测正常体
温 ;次,然后按 ;A B 法的剂量灌胃给药 O E 8T S J3 Q,给
药后 !< 8(+,按家兔体重自耳静脉注射细菌内毒素 !E
UV S J3,开始每 !< 8(+测家兔肛温 B次,共测 次;; .
后,B .测家兔肛温 B次,共测 R次。记录家兔体温和计
算升温值,并用 !检验进行统计分析,结果见表B。
表 B结果表明,鱼胆草高、低剂量组和阿斯匹林组
在不同时间对细菌内毒素发热家兔均有非常明显的解热
作用。
# % 抗炎作用 $’ &
# % ! 对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响:取小鼠 <
只,雄性,体重 ;E H ;I 3,随机均分成 组 O W B< Q,
按 ;A B法给药,每天 B次,共 E ’,于末次给药后 B .,
每只小鼠左耳涂 ; X巴豆油 O含 ; X巴豆油、;< X无水
乙醇、E X蒸馏水和 C! X乙醚 Q 继续给药 B次,涂巴豆油 .后,将动物颈椎脱臼处死
剪下双耳,用 I 88的打孔器打下耳廓并称重,计算每
组小鼠肿胀度 (以左耳重 N右耳重 W肿胀度),并进行
!检验,结果见表 ;。
鱼胆草的解热抑菌消炎作用研究
田 洪,潘善庆 (湖南省药品检验所,长沙市 B<<摘要:目的 研究鱼胆草的清热降温、抑菌消炎作用。方法 采用细菌内毒素致热造模研究鱼胆草的降温作用;采
用体内、体外实验法研究其抗菌作用,角叉菜胶致大鼠足跖肿胀,巴豆油致小鼠耳肿胀方法研究其消炎作用。结果
鱼胆草能明显降低细菌内毒素致热家兔的体温,抑制角叉菜所致大鼠足跖肿胀及巴豆油所致小鼠耳肿胀,对大肠杆
菌感染小鼠具有一定的保护作用,并对所试菌均有抑制作用。结论 鱼胆草具有较好的解热抗炎作用,在体内外均
有明显的抑菌作用。
关键词:鱼胆草;解热;抗炎;抑菌
中图分类号:4;IEA E 文献标识码:Y 文章编号:B<收稿日期:;<<# N 作者简介:田洪 (BR#I N),女,苗族,硕士,副主任药师,研究方向:中药新药的药理毒理研究。$/,:
·!#·中药新药与临床药理 !#年 $月第 %& 卷第 ’期
表 ! 鱼胆草对细菌内毒素发热家兔体温的影响 $ ! #, $ % &’ (
升温值 ) *
组 别
模型组
阿斯匹林
鱼胆草
鱼胆草
剂量 ) +·,+ - &
等体积水
’. /
’. 01
&. 02
正常体温
) *
!1. 0 3 ’. !
!0. & 3 ’. /
!0. / 3 ’. !
!0. & 3 ’. /
’. 4 5
’. #2 3 ’. &4
’. /4 3 ’. &&!!!
’. / 3 ’. ’#!!!
’. /1 3 ’. ’0!!!
& 5
&. /2 3 ’. !2
’. 2 3 ’. &!!!
’. #4 3 ’. /!!!!
’. 2 3 ’. &4!!!
&. 4 5
&. /4 3 ’. !!
’. 2’ 3 ’. &/!!!
’. #/ 3 ’. /#!!!
’. 1/ 3 ’. &1!!!
/ 5
&. / 3 ’. !/
’. 4/ 3 ’. &!!!!
’. 4& 3 ’. /1!!!
’. 2 3 ’. &4!!!
! 5
’. 10 3 ’. !!
’. / 3 ’. &&!!!
’. !/ 3 ’. /!!!
’. !1 3 ’. &2!!!
5
’. 2 3 ’. /2
’. !’ 3 ’. &’!!!
’. /’ 3 ’. !!!
’. /’ 3 ’. &4!!!
4 5
’. 4! 3 ’. /1
’. // 3 ’. ’2!!!
’. & 3 ’. &!!!
’. &4 3 ’. &!!!!
2 5
’. !0 3 ’. /
’. &/ 3 ’. ’2!!!
’. ’# 3 ’. &&!!!
’. ’# 3 ’. ’1!!!
1 5
’. /2 3 ’. /4
’. ’2 3 ’. ’4!!
’. ’/ 3 ’. ’2!!
’. ’! 3 ’. ’4!!
注:与模型组比较,!!% 6 ’. ’4,!!!% 6 ’. ’&。
组 别
对照组
肠康片组
鱼胆草
鱼胆草
剂量 ) +·,+ - &
等体积水
. /1
/. &1
. !2
左耳重 ) 7+
2&. ! 3 &&. /
4. ! 3 &&. 0
4/. / 3 2. #
4&. & 3 &&. 4
右耳重 ) 7+
/. & 3 .
/0. 2 3 &’. !
/. 0 3 . 2
/#. # 3 #. 2
肿胀度
!#. & 3 1. 1
/. 1 3 #. #!!!
/#. / 3 #. !!
/!. 3 2. 2!!!
抑制率 ) 8
!!. /
!!. /
/2. #
!2. 0
组 别
对照组
鱼胆草组
剂量 ) +·,+ - &
/. /
动物数 ) $
&’
&’
死亡数 ) $
&’
4
死亡率 ) 8
&’’
4’!!
表 鱼胆草对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响 $ ! #9 $ % &’ (
注:与对照组比较 ,!!% 6 ’. ’4,!!!% 6 ’. ’&。
表 /结果表明,鱼胆草高、低剂量组和肠康片组分别
与对照组比较,均能明显抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀。
! # ! 对角叉菜所致大鼠足跖肿胀的影响:取 :;大鼠
’ 只,雄性,体重 &2’ < &1’ +,随机均分成 组 $ $ %
&’ (,按 /. &法给药,每天 &次,共 4 =,末次给药后 &
5,于大鼠足跖底部皮下注射 &8角叉菜 ’. & 7> )只致
炎,致炎后 / 5再给药 &次,用皮尺测量致炎前正常大
鼠足跖大小,致炎后每隔 & 5测 &次足跖大小,共测 2
次,计算肿胀度,并进行 &检验,结果见表 !。
表 # 鱼胆草体外抑菌试验结果 $?@A (
菌 株
大肠杆菌
福氏痢疾杆菌
志贺氏痢疾杆菌
表皮葡萄球菌
伤寒杆菌
副伤寒杆菌
沙门氏菌
产气肠杆菌
粪链球菌
株数
&
&!
&’
&’
2
2
#
细菌浓度 ) ABC·7D-&
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
&’4 < &’2
肠炎清 ?@A范围 ) 7+·7>-&
&/. 4 < &’’. ’
!. &/ < /4. ’
&/. 4 < 4’. ’
!. &/ < &/. 4
2. /4 < 4’. ’
/4. ’ < 4’. ’
2. /4 < 4’. ’
&/. 4 < 4’. ’
&/. 4 < 4’. ’
表 !结果表明,鱼胆草高、低剂量组分别与对照组
比较, 在不同的测量时间,均能明显抑制角叉菜所致
大鼠足跖肿胀,而肠康片组仅在 &9 !9 5显示作用。
! $ 体外抑菌试验 %& ’
! $ ( 菌种 菌种来源于 /’’年 1月 <&/月临床分离的
致病菌,并经细菌学鉴定。大肠杆菌 &株,福氏痢疾杆
菌 &!株,志贺氏痢疾杆菌 株,表皮葡萄球菌 &’株,伤
寒杆菌 &’株,副伤寒杆菌 2株,沙门氏菌 2株,产气肠
杆菌 株,粪链球菌 #株。均来自湖南医科大学湘雅医
院、附三医院和湖南省中医附一院临床检验科细菌室。
! $ ! 样品的配制:鱼胆草经提取配成浓度为 ’. / +浸
膏 ) 7>的溶液,过滤,高压灭菌 !’ 7EF,供试验用,样
品采用营养肉汤双倍稀释法,每株菌做 #个浓度梯度。
! $ # 体外抑菌试验 -试管法测 ?@AG 取无菌小试管 #
支,用相应的培养基双倍法稀释药物,每管装培养基
&’ 7>,然后再加入菌液 ’. & 7>$菌液浓度用比浊管比
浊,并调整浓度为 &’4 < &’2 ABH ) 7>(,置 !# *培养 &1
5后9 观察有无细菌生长,以不生长细菌管的浓度为最
低抑菌浓度 $?@A(。结果见表 。
表 结果表明,鱼胆草对大肠杆菌等 0种细菌共计
# 株均有较强的抗菌作用,其 ?@A 为 !. &/ 7+ < &’’. ’
7+ ) 7>$浸膏 (。
! & 对小鼠感染大肠杆菌的保护作用 取清洁级昆明种
小鼠 ’ 只,雌雄兼用,体重 /’ < // +,均分成 / 组
$ $ % /’ (,一组为对照组,灌胃生理盐水;另一组灌胃
鱼胆草,剂量为 /. / + ) ,+。给药体积均为 ’. 4 7> )
/’+,每天灌胃给药 & 次,连续给药 4 天。在末次给药
后 & 5, 每只小鼠腹腔注射 ’. 4 7> 大肠杆菌 $ & I &’0 )
7>( (小鼠预试该浓度 ’. 4 7> )只,可使小鼠 &’’ 8死
亡)肉汤培养液,观察小鼠 / 5 内的反应情况,记录
动物死亡数。结果进行 !/检验,见表 4。
表 $ 鱼胆草对大肠杆菌感染小鼠的保护作用 $ / 5 (
注:与对照组比较,!!% 6 ’. ’4。
注 G与对照组比较, !!% 6 ’. ’4 ,!!!% 6 ’. ’&。
致炎后肿胀度
表 % 鱼胆草对角叉菜所致足跖肿胀的影响 $ ! #9 J79 $ % &’ (
组 别
对照组
肠康片组
鱼胆草
鱼胆草
剂 量 ) +·,+ - &
等体积水
/. 04
&. 4&
!. ’/
实验前足跖大小
/. && 3 ’. ’#
/. && 3 ’. ’#
/. &! 3 ’. ’2
/. &! 3 ’. ’1
& 5
’. # 3 ’. ’#
’. /1 3 ’. ’1!!!
’. /1 3 ’. &/!!!
’. !! 3 ’. ’2!!!
/ 5
’. 4! 3 ’. &!
’. 2 3 ’. &&
’. !/ 3 ’. &/!!!
’. !! 3 ’. ’#!!!
! 5
’. #& 3 ’. &
’. 41 3 ’. &!!!
’. 4/ 3 ’. &!!!!
’. 4& 3 ’. ’0!!!
5
’. #4 3 ’.
’. 40 3 ’. &’!!
’. 4! 3 ’. &’!!!
’. 42 3 ’. &4!!
4 5
’. 2# 3 ’. &
’. 44 3 ’. &2
’. 4 3 ’. ’#!!
’. 4’ 3 ’. &&!!
2 5
’. 40 3 ’. ’1
’. 4’ 3 ’. &/
’. 2 3 ’. ’2!!!
’. 2 3 ’. ’0!!!
$下转第 !4’ 页 (
·!#· $%&’()(*+&, -.(+/0/ 1%23 4/0/&%5. 6 -,(+(5&, 7.&%8&5*,*39: ;##< =/>)/8?/%: @*,A BC D*A
! # 提取回收率 取 B#,##,B### +3·8E F B 的
低、中、高 ! 个浓度的质控样品各 份:按 “BA < 血
浆样品的处理”操作,以提取后各浓度染料木素的色
谱峰面积与未经提取直接进样的对照品色谱峰面积进
行比较 : 分别计算低、中、高 ! 种浓度的提取回收
率 G H。结果染料木素低、中、高 !种浓度的提取回收
率 分 别 为 I CJA !; K JA ! LM : IC;A NB K ;A BO LM :
I
低、中、高 !个浓度的质控样品各 份:分别在 F NJP
保存 ;A 个月、室温下放置 N .及经 !个冷冻 F解冻
循环,然后按 “BA <血浆样品的处理”后上机测定。
将血浆样品制备好的待测液在 F ;# P冰箱中放置 ;J
.及自动进样器上放置 < .后测定,测定值与真实值
进行比较,其偏差均Q OA NCM。结果表明R染料木素
血浆样品在以上条件下均稳定性良好。
% 讨论
为保证临床大量生物样品分析的专属性和特异
性 : 鉴于 S7E- T U= T U= 法选择性及灵敏度高,具有
二次分离作用的优势,本文研究并首次建立了人血浆
中染料木素高效液相色谱 F串联质谱检测方法。该方
法对染料木素及其内标物同时进行 U4U 方式检测
(8 T V ;CBA #);J!A # 和 8 T V
血浆样品的处理,简便、易行,制得的样品干净,有
效去除质谱分析中常见的基质效应,能满足 S7E- T
U= T U=测定的要求。在固相萃取法处理过程中,用
M甲醇进行第二次洗涤,有利于减少杂质峰的干
扰。并将洗脱液进一步用样品浓缩法处理,可提高检
测的灵敏度。在进样量的选择上,当进样量为 ;# !E
和 B# !E 时,内标物的峰形拖尾,而进样量为 !E
时,内标物的峰形对称,故选择进样量为 !E进行
S7E- T U= T U= 分析。染料木素的保留时间为 ;A N
8(+,内标物的保留时间为 ;A #! 8(+,样品分析时间
仅需 !A 8(+。该方法通过确证,各项方法学指标均
达到生物样品定量分析的要求,可满足临床大量样本
血药浓度的测定及药物动力学研究。
参考文献:
G B H U/00(+& UA U*’/%+ &>>,(5&)(*+0 *W &+ &+5(/+) ?/&+R =*9?/&+0 &+’ )./
>%/X/+)(*+ &+’ )%/&)8/+) *W 5.%*+(5 ’(0/&0/ G Y H A Y D2)%: BOO: B;R
U/’: BOOC: ;OR OA
G ! H U/00(+& U: 7/%0]9 @: =/)5./,, ^14: /) &,A =*9 (+)&]/ &+’ 5&+5/% %(0]R
Z %/X(/\ *W )./ (+ X()%* &+’ (+ X(X* ’&)& G Y H A D2) -&+5/%: BOOJ: ;BR
BB!A
G J H王剑波,郭萍,赵小兵,等 A 47 F S7E- 法测定槐角提取物中染料
木素的含量 G Y H A 中草药,;##J,! (J):J#; F J#!A
G H冯怡,孙静,邓远辉,等 A E- T U= T U= 测定龙胆苦苷的尿药浓度
G Y H A 中药新药与临床药理,;##,B< (<):J!# F J!;A
I编辑:梁进权 L
**************************************************
表 结果表明:鱼胆草组在 ;J .对大肠杆菌感染的
小鼠具有显著保护作用。
% 讨论
鱼胆草是龙胆科獐牙菜属植物的全草,是湘西土家
族苗族自治州民间常用于治疗肝炎、胆囊炎、痢疾等疾
病的草药。据文献报道 G < H鱼胆草中分离的獐牙菜苦苷具
有显著的镇痛、镇静作用;其中的黄酮类化合物具有抗
菌消炎等作用。
本试验表明,鱼胆草对细菌内毒素引起的家兔体
温升高具有明显的解热作用;对巴豆油所致小鼠耳肿
胀和角叉菜所致大鼠足跖肿胀均 具有一定的抑制作
用;体外抑菌试验表明对大肠杆菌等 O 种细菌,U_-
为 !A B; ‘ B##A # 83 T 8E I浸膏 L;体内抗菌试验结果表
明对感染大肠杆菌的小鼠具有一定的保护作用。因
此: 开发鱼胆草具有较好的临床应用前景。
参考文献R
G B H黄衡宇 : 李鹂 : 陈义光 A 鱼胆草的自然资源初步研究 G Y H A 中草药 :
;##;,!! I L R J<< F J
NOA
G ! H 国家药典委员会 A 中华人民共和国药典 ;## 年版 I二部 L GU H A 北
京:化学工业出版社,;##R附录 NA
G J H 徐叔云:卞如濂:陈修 A 药理实验方法学 GU H A 第三版 A 北京:人民
卫生出版社: ;##;R O#A
G H张志国:邢少军:张宝安:等 A 解热冲剂体内外抑菌试验研究 G Y H A 现
代预防医学: ;###: ;C I! L R !;O F !!#A
G < H彭晓春:王辉宪:陈仕国:等 A 鱼胆草药用的有效化学成分 G Y H A 吉首
大学学报 I自然科学版 L : ;##B: ;; I! L R O F <#A
I编辑:邓响潮 L
I上接第 !JC 页 L