全 文 ：紫外分光光度法测定鱼胆草中总黄酮含量
马海霞1，何 珺2* ，杨富茗1 (1．贵州大学药学院，贵州贵阳 550025;2．贵州省生化工程中心，贵州贵阳 550025)
摘要 ［目的］研究鱼胆草及其不同部位中总黄酮含量分布情况。［方法］采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品，三氯化铝显色后在波
长 420 nm处测定鱼胆草中总黄酮含量。［结果］芦丁浓度在 0． 005 ～0． 025 mg /ml范围内与吸光度线性关系良好(r = 0． 999 3)，平均回
收率为 101． 69%，ＲSD为 2． 21%(n =6)，鱼胆草中总黄酮的含量为 2． 510%。其中，鱼胆草不同部位根、茎、叶中，叶子总黄酮的含量最
高，为 2． 542%。［结论］采用紫外分光光度法测定鱼胆草中总黄酮含量操作简便、准确可靠、稳定性好。
关键词 鱼胆草;总黄酮;不同部位;含量测定;紫外分光光度法
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)17 －093 －02
Determination of Total Flavonoids Content in Swertia davidii Franch by UV Spectrophotometry Method
MA Hai-xia1，HE Jun2* ，YANG Fu-ming3 (1． College of Pharmacy，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025;2． Ｒesearch Center of
Biochemistry Engineering of Guizhou Province，Guiyang，Guizhou 550025)
Abstract ［Objective］To establish the method for determining total flavonoids content in Swertia davidii Franch．［Method］UV spectrophotom-
etry was adopted to determine the content of total flavonoids，using the AlCl3 coloration method with rutin reference to measure at 420 nm wave-
lengths．［Ｒesult］The results showed that in the rage of 0． 005 － 0． 025 mg /ml，the excellent liner relationship was obtained with coefficient of
0． 999 3，the average recovery rate of 101． 69%，the ＲSD of 2． 21%，and the total flavonoids content in Swertia davidii Franch was 2． 510% ． The
total flavonoids content in the leaf of the Swertia davidii Franch was 2． 542% ．［Conclusion］Ultraviolet spectrophotometry is simple，accurate and
reliable for determining total flavonoids content in Swertia davidii Franch．
Key words Swertia davidii Franch;Total flavonoids;Different parts;Content determination;Ultraviolet spectrophotometry
基金项目 贵州大学研究生创新基金(研农 2015019)。
作者简介 马海霞(1989 － ) ，女，山东菏泽人，硕士研究生，研究方向:
天然药物成分及生理活性。* 通讯作者，副教授，硕士，硕
士生导师，从事中药活性成分研究。
收稿日期 2015-04-23
鱼胆草系龙胆科獐牙菜属植物，学名川东獐牙菜 Swertia
davivdii Franch，以全草入药，性寒、味苦，是湘西、鄂西、川东
边区土家族苗族自治州民间常用于治疗肝炎、胆囊炎、结膜
炎、痢疾等疾病的草药［1 －2］。在《中药大辞典》和《全国中草
药汇编》均有记载［3］，鱼胆草中富含的主要活性成分为黄酮
类物质，其具有降血脂、降血糖、保护心肌、降压、抗心律失
常、抗凝血、镇痛、抗炎、抗肿瘤、防治骨质疏松、抗氧化和延
缓衰老等药理作用［4 －6］。
迄今为止约有 40 余种獐牙菜属植物有文献报道，从这
些植物中已分离出 100多种不同类型的化合物，按化学架构
其主要含四大类化合物［7］:三萜及其苷类，这类化合物含抗
肝炎、降 GPT 的有效成分，有代表性的化合物为 Oleanolic
acid、1β，3β-poxy-hop-16-ene、三萜酸葡萄糖酯苷;环烯醚萜及
其苷类，此类化合物中的有效成分对子宫平滑肌有较明显的
解痉作用，同时还有镇静作用，獐牙菜苦苷和龙胆苦苷是其
代表性的化合物;口山酮及其苷类，有强心、利胆、利尿、保肝
等作用，对中枢神经有兴奋作用，且是抗真菌的主要成分，如
8-O-β-D-葡萄糖-1，3，5-三羟基口山酮、芒果苷、1，3，5，8-四羟
基口山酮;黄酮及其苷类，该类化合物含有治疗心血管系统
疾病、急慢性肝炎、肝硬化、抗菌消炎的有效成分，代表性的
结构为 4、5-二羟基-7-甲氧基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷、
3，4，5，7-四羟基黄酮-6-C-D-吡喃葡萄糖苷、异当药黄素。
而目前国内外还没有对鱼胆草中总黄酮含量测定的报道，采
用 1%三氯化铝对鱼胆草提取液显色，360 nm紫外灯下有明
显的鲜黄色荧光，因此该研究以芦丁作为对照品，1%三氯化
铝显色，紫外分光光度法对鱼胆草中总黄酮进行了含量测
定，并对鱼胆草不同部位即其根、茎、叶中总黄酮含量进行了
初步探索，为鱼胆草中黄酮类物质的研究与开发提供了理论
参考依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试材。鱼胆草，2013年秋季采收晒干全草，由贵州大
学农学院任明见教授提供并鉴定。并按全草、根、茎、叶分别
分类 80 ℃烘 12 h，进行粉碎过 80目筛，分别密封保存备用。
1． 1． 2 仪器。紫外可见分光光度计(UV-2550，日本岛津公
司) ;电子天平(BAS124S，赛多利斯科学仪器有限公司) ;冰
箱(BCD-205，TCL集团有限公司) ;电热恒温水浴锅(HH ﹒
SY21-Ni6，北 京 长 源 实 验 设 备 厂) ;超 声 波 清 洗 器
(SG2200HE，上海冠特超声仪器公司) ;电热鼓风干燥箱
(GZX-9140MBE，上海博讯实业有限公司医疗设备厂) ;其他
为一般常规仪器。
1． 1． 3 试药。无水三氯化铝，AＲ，天津市大茂化学试剂厂;
纯化水，贵州省生化工程中心自制;芦丁为对照品(批号 Ｒ-
5143，纯度 ＞95%) ，购自 Sigma公司;其他试剂均为 AＲ。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液的制备。精密称取芦丁对照品 4 mg，加
入至 10 ml的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至 10 ml，摇匀，配
成芦丁含量 0． 4 mg /ml的对照品溶液，备用。
1． 2． 2 供试品溶液的制备。
1． 2． 2． 1 样液制备。精密称取 0． 10 g 鱼胆草样粉，加入
90%乙醇 10 ml，密封后于 70 ℃水浴加热提取 2 h，取出冷却
后过滤，即得。
1． 2． 2． 2 空白对照液制备。精密吸取 90%乙醇 0． 5 ml，置
于 10 ml 的容量瓶中，用 1% AlCl3 溶液定容，摇匀显色后
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(17) :93 － 94，141 责任编辑 黄小燕 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.17.066
备用。
1． 2． 3 方法学考察。
1． 2． 3． 1 线性关系考察。分别精密吸取对照品溶液 0． 125、
0． 250、0． 375、0． 500、0． 625 ml，置 10 ml 的容量瓶，并用 1%
AlCl3 溶液定容，摇匀，放置 10 min后，以 1% AlCl3 溶液为空
白，采用紫外-可见分光光度法，在 420 nm 波长处测定吸光
度。以芦丁对照品浓度为横坐标(X)、溶液吸光度值为纵坐
标(Y)绘制标准曲线，计算线性回归方程。
1． 2． 3． 2 精密度试验。精密量取芦丁对照品溶液 0． 25 ml，
按“1． 2． 1”方法制备对照品溶液，于 420 nm 处连续测定 6
次，并计算吸光度的 ＲSD。
1． 2． 3． 3 稳定性试验。精密吸取样品溶液 0． 5 ml，按
“1． 2． 2． 1”方法制备供试液，分别在 420 nm 处于 0、10、20、
30、40、50、90、120 min时测定吸光度，并计算吸光度的 ＲSD。
1． 2． 3． 4 重复性试验。取同一批样品粉末 0． 10 g，按
“1． 2． 2． 1”方法制备供试液，平行制备 6份，按样品测定方法
平行测定，计算总黄酮平均含量和 ＲSD。
1． 2． 3． 5 加样回收试验。精密量取“1． 2． 2． 1”供试品 6 份，
分别量取 1． 0 ml，分别加入芦丁对照品溶液 0． 16、0． 20、0． 24
ml，按标准曲线绘制的测定方法，分别在 420 nm处测定吸光
度值，计算加样回收率和 ＲSD。
1． 2． 4 样品的含量测定。将供试液于紫外分光光度仪 420
nm处测定吸光度值，根据标准曲线，计算所取样品溶液中总
黄酮的百分含量。计算公式为:样品中总黄酮的含量 =(样
品黄酮浓度 ×提取液总体积)/样品重量 ×100%。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察
2． 1． 1 线性关系的考察。按“1． 2． 3． 1”方法操作，记录吸光
度值，以样品浓度 X(mg /ml)为横坐标、吸光度 Y为纵坐标绘
制标准曲线，计算得线性回归方程为 Y = 35． 16X + 0． 014 3(r
=0． 999 3) ，表明芦丁对照品溶液在 0． 005 ～ 0． 025 mg /ml范
围与溶液的吸光度之间呈良好的线性关系。
2． 1． 2 精密度试验。按“1． 2． 3． 2”方法操作，芦丁对照品溶
液 ＲSD =0． 390%(n =6) ，表明在此试验条件下精密度良好。
2． 1． 3 稳定性试验。按“1． 2． 3． 3”方法操作，计算得出供试
品溶液吸光度 ＲSD =0． 430%(n =6) ，表明供试品溶液在 120
min内基本稳定。
2． 1． 4 重复性试验。按“1． 2． 3． 4”方法操作，计算得鱼胆草
中总黄酮平均含量为 2． 662%，ＲSD =1． 500%，表明该方法测
定样品重复性良好。
2． 1． 5 加样回收试验。由表 1 可见，样品平均回收率为
101． 69%，ＲSD =2． 21%(n =6) ，表明该方法准确、可靠，符合
相关要求，可用于鱼胆草中总黄酮的含量测定。
2． 2 鱼胆草中总黄酮含量 经测定，鱼胆草中总黄酮平均
含量为 2． 510%，ＲSD =0． 054%。
2． 3 鱼胆草不同部位中总黄酮含量 精确称取鱼胆草根、
茎、叶样按“1． 2． 2． 1”方法制备供试液，进行测定，结果显示，
鱼胆草根、茎、叶中总黄酮含量分布为叶 ＞根 ＞茎，即叶子中
总黄酮含量最高，为 2． 542%。
表 1 加样回收率试验结果(n =6)
序号
样品含量
mg /ml
加入量
ml
测得量
mg /ml
回收率
%
平均回收
率∥%
ＲSD
%
1 0． 081 0． 160 0． 146 100． 691 101． 69 2． 21
2 0． 081 0． 160 0． 143 98． 612
3 0． 081 0． 200 0． 158 98． 104
4 0． 081 0． 200 0． 166 103． 101
5 0． 081 0． 240 0． 181 102． 804
6 0． 081 0． 240 0． 181 102． 804
3 结论与讨论
3． 1 提取方法的筛选 精密称取约 0． 10 g 鱼胆草样粉 10
份，每平行 2份分别加入水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、
90%乙醇 10 ml，按“1． 2． 2． 1”方法制备供试液，并于紫外分
光光度仪 420 nm处测定吸光度值，并计算其黄酮含量。由
图 1可知，提取液分别为水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、
90%乙醇时，测得的总黄酮含量呈递增趋势，其中以 90%乙
醇为提取液时，总黄酮含量最高(2． 25%) ，但其含量仍低于
加热提取的方法，故供试品采用了一定梯度乙醇超声及 70
℃加热 2 h的提取方法。
图 1 不同提取溶剂对鱼胆草中总黄酮的提取效果
3． 2 显色时间的确定 精密称取 0． 10 g 鱼胆草样粉，加入
90%乙醇 10 ml，密封后于 70 ℃水浴加热提取 2 h，取出冷却
后过滤，精密吸取样液0． 5 ml，置于10 ml的容量瓶中，用1%
AlCl3 溶液定容，摇匀分别显色 15、30、45、60 min 后测定其
420 nm吸光度值。由表 2可知，鱼胆草供试液样品于 60 min
显色时间内稳定性良好。
表 2 不同显色时间对鱼胆草总黄酮含量的影响(n =3) %
显色时间∥min 1 2 3 4 5 6
0 0． 533 0． 519 0． 704 0． 559 0． 483 0． 476
15 0． 534 0． 520 0． 704 0． 549 0． 482 0． 476
30 0． 532 0． 520 0． 702 0． 552 0． 482 0． 477
45 0． 529 0． 521 0． 701 0． 552 0． 483 0． 476
60 0． 527 0． 516 0． 699 0． 556 0． 484 0． 467
平均值∥% 0． 531 0． 519 0． 702 0． 553 0． 482 0． 474
ＲSD∥% 0． 291 0． 192 0． 212 0． 391 0． 083 0． 415
3． 3 显色剂的选择 用 AlCl3 溶液作为黄酮类比色测定的，
主要是黄酮母核中含有碱性氧原子，一般又多带酚羟基，能
和铝离子产生鲜黄色络合物，显色反应比较稳定。
(下转第 141页)
49 安徽农业科学 2015 年
图 4 阿特拉津不同浓度下MDA含量的响应
生长、扩大植物有效吸收面积来抵抗逆境对其的影响。
在共生体系受到阿特拉津胁迫时，通常首先表现出对逆
境的应激反应，当污染超过该体系的抗逆承受能力时，植株
会出现死亡的现象。不接菌时植物可在 0 ～ 0． 5 mg /L 的阈
值范围内进行有效的生理调节，接种丛枝菌根真菌时，植物
可在 0 ～3． 0 mg /L阈值范围内进行生理调节，植株的抗逆生
理指标通常在阿特拉津浓度为 0． 5 ～ 3． 0 mg /L时达到最高，
表示低于该浓度的阿特拉津存在时，共生体系可以有效发挥
作用提高植物的抗逆性，超出该范围时，共生体系便无法承
受，会导致植株受损甚至死亡，为农业生产中阿特拉津的安
全施加量提供了依据。
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1992．
(上接第 94页)
3． 4 结论 该研究结果表明，采用紫外分光光度法测定鱼
胆草中总黄酮含量，在 0． 005 ～0． 025 mg /ml范围内与溶液的
吸光度之间呈良好的线性关系(r = 0． 999 3) ，平均回收率为
101． 69%，ＲSD为 2． 21%(n = 6) ，鱼胆草中总黄酮的含量为
2． 510%;鱼胆草的不同部位根、茎、叶中，叶子中总黄酮的含
量最高。该研究建立的测定鱼胆草中总黄酮含量的方法简
单快捷、分离度好。
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