全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１４（０３）：８８～９１
第一作者简介：覃屏生（１９７６－），男，广西环江人，硕士，讲师，现主
要从事植物分子生物学等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｐｓ＠ｍａｉｌｂｏｘ．ｇｘｎｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ．
责任作者：秦新民（１９５６－），男，广西灵川人，教授，现主要从事植物
分子生物学等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｍｑｉｎ＠ｍａｉｌｂｏｘ．ｇｘｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１３６０４７７）；广西科技厅科
研资助项目（２０１３ＹＢ０３６）。
收稿日期：２０１３－１０－３０
沙田柚花柱蛋白对其花粉萌发及生长的影响
覃 屏 生，张 瑜，侯 丽 霞，杨 孝 文，秦 新 民
（广西师范大学 生命科学学院，广西 桂林５４１００４）
摘 要：以沙田柚花粉为试材，研究比较了自交和异交花柱提取蛋白对花粉萌发和花粉管生
长的影响。结果表明：添加沙田柚自交、异交花柱蛋白后，花粉的萌发未受影响。但花粉管的生
长情况在二者之间有明显差异，添加异交花柱蛋白对花粉管的生长没有影响，而添加自交花柱蛋
白的花粉管的生长受到明显抑制。ＰＡＧＥ电泳显示自交花柱蛋白处理的花粉管出现了１条特异
蛋白带（Ｒｆ值＝０．８１）；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测到自交花柱蛋白处理的花粉管出现了相对分子量为
３５．０ｋＤ和３７．５ｋＤ的２条特异蛋白带；ＩＥＦ－ＰＡＧＥ电泳的结果表明，在自交花柱蛋白处理的花粉
管蛋白中出现了等电点为５．８５和６．２０的２条的特异蛋白谱带。
关键词：沙田柚；花粉萌发；花粉管长度；花柱蛋白；电泳
中图分类号：Ｓ ６６６．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）０３－００８８－０４
沙田柚（Ｃｉｔｒｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ ｖａｒ．ｓｈａｔｉｎｙｕ Ｈｏｒｔ．）原产于
广西容县沙田乡，因其口感好、营养丰富而深受广大消
费者欢迎，是南方果树中较重要的树种之一，在我国广
东省、广西省的栽培面积较大。然而在生产中，沙田柚
存在着严重的自交不亲和现象，在自然授粉情况下坐果
率极低，产量很少，通过人工授粉（亲和花粉）虽然能提
高坐果率，但需耗费大量的人力和物力，增加生产成本。
因而研究沙田柚的自交不亲和机理具有重要的生产实
践价值和理论意义［１］。
关于沙田柚配子体自交不亲和现象，薛妙男等［２］对
沙田柚自交不亲和性的细胞学基础和生化基础进行了
一系列较为深入的研究，确定了沙田柚属于配子体型自
交不亲和类型；花粉管在花柱中的生长途径以及花粉管
在花柱的１／２部位生长受阻［３］；同时，还用免疫胶体金标
技术对花柱Ｓ糖蛋白进行了组织化学定位［４］。杨继华
等［５］采用亲和层析和电泳相结合的方法，分离纯化了沙
田柚花柱特异糖蛋白，并对其生物学活性及生化性质进
行了分析。而有关沙田柚花粉的研究报道不多。现已
证明植物配子体自交不亲和性受１个具有复等位基因
的Ｓ－位点控制，Ｓ－位点至少包括２个基因，１个在花柱中
特异性表达，称花柱Ｓ－基因；另１个在花粉中特异表达，
称花粉Ｓ－基因，自交不亲和的拒斥反应即是花柱Ｓ－基因
和花粉Ｓ－基因互作的结果。因此配子体自交不亲和涉
及到花粉和花柱中相关基因的表达和相互作用。该试
验研究了沙田柚自交和异交花柱蛋白对自身花粉萌发
和花粉管生长的影响，并比较了自交和异交花柱蛋白处
理条件下花粉管蛋白的差异，以期为克服沙田柚自交不
亲和提供参考依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试花粉采自１０ａ生沙田柚结果树。
１．２ 试验方法
当天开花的花药置于电热吹风干燥箱中，２５℃恒温
２ｈ，吹干表面水分，再置于２５℃恒温房中自然晾干至花
药完全散开、花药壁翻转，使花药含水量在１１．８％～
１５．５％范围内。
１．２．１ 自交、异交花柱蛋白的提取 分别取沙田柚自
交、异交（酸柚×沙田柚）后３ｄ花柱，切取１／２花柱段，
参照杨继华等［６］的方法提取花柱蛋白，紫外分光光度计
测定蛋白质浓度后置于－２０℃备用。
１．２．２ 花粉管的培养与收集 基本培养基在Ｂｒｅｗｂａｋｅｒ
等［７］的基础上加以改良：１５％蔗糖，０．０２％硫酸镁，
０．０１％硝酸钾，０．０３％硝酸钙，０．０１％硼酸，２０％ ＰＥＧ
４０００，ｐＨ ５．６，在培养液中分别加入自交、异交花柱识别
蛋白提取物，并使蛋白质终浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ。选择有
凹槽的载玻片进行花粉培养，把配制好的液体培养基滴
在载玻片的凹槽内，每个凹面皿加１．５ｍＬ培养液，然后
用毛笔均匀撒播适量花粉，再将载玻片放在垫有湿滤纸
的培养皿中，加盖后置于２８℃恒温箱内培养，每个处理
重复３次。培养２４ｈ后，检测花粉的萌发及花粉管生
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北方园艺２０１４（０３）：８８～９１ ·生物技术·
长状况。同时，将培养好的２种花粉管（即分别添加自
交、异交花柱蛋白培养的沙田柚花粉管）培养液分别装
入５０ｍＬ离心管中，５ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清，沉
淀用蒸馏水清洗３次，吸干水分后置－２０℃冰箱中备用。
１．２．３ 花粉管蛋白的提取 自交和异交花柱处理后的
花粉管收集后，按文献［６］的方法提取花粉管蛋白。
１．２．４ 花粉管蛋白的电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
（ＰＡＧＥ）参考文献［８］方法进行。浓缩胶４％，分离胶
１０％，电极缓冲液系统为Ｔｒｉｓ－甘氨酸（ｐＨ ８．３），浓缩胶
恒压７０Ｖ，分离胶恒压１５０Ｖ至电泳结束。取出凝胶
板，进行考马斯亮蓝Ｒ２５０染色３０ｍｉｎ，脱色至背景清晰，
拍照、保存。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）参
考文献［８］方法进行。浓缩胶４％，分离胶１０％，电极
缓冲液系统为Ｔｒｉｓ－甘氨酸（ｐＨ ８．３），含０．１％ＳＤＳ，浓
缩胶恒压７０Ｖ，分离胶恒压１５０Ｖ至电泳结束。取出凝
胶板，进行考马斯亮蓝Ｒ２５０染色１８０ｍｉｎ，脱色至背景清
晰，拍照、保存。载体两性电解质ｐＨ 梯度等电聚焦
（ＩＥＦ－ＰＡＧＥ）参考 Ｖｅｓｔｅｒｂｅｒｇ［９］和郭尧君［８］等方法进
行。预电泳为２００Ｖ１０ｍｉｎ，３００Ｖ３０ｍｉｎ，４００Ｖ
３０ｍｉｎ。预电泳结束，小心吸取胶面上液体，每管上样
１５μＬ（其中有２管为空白对照，用来测ｐＨ值），再依次
加入２０μＬ样品覆盖液防止样品与电极液直接接触，覆
盖液上加满负极液。电极液为：上槽（负极）０．０２ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＯＨ，下槽（正极）０．０１ｍｏｌ／Ｌ Ｈ３ＰＯ４，在室温下，按
４００Ｖ１ｈ，６００Ｖ１２ｈ，８００Ｖ１ｈ的程序进行聚焦电泳。
２ 结果与分析
２．１ 花柱蛋白提取液对花粉萌发的影响
花粉培养２４ｈ后进行镜检，每个培养皿随机观察
３０个视野。以花粉管长度等于或大于花粉粒直径（１／２）
以上者为萌发标准［１０－１１］，统计花粉萌发率。结果表明，
花粉在含自交花柱蛋白的培养基中的萌发率为８０．１％，
而在含异交花柱蛋白的培养基中花粉萌发率为８１．６％，
在不添加任何花柱蛋白的培养基中，花粉的萌发率为
８３．０％。三者之间差异不大。
２．２ 花柱蛋白提取液对花粉管生长的影响
不同浓度的自交花柱蛋白对花粉管生长均有抑制作
用，当自花授粉花柱蛋白达到０．５ｍｇ／ｍＬ时，其抑制作用
明显。花粉在分别添加０．５ｍｇ／ｍＬ自交和异交花柱蛋
白的培养基中，每隔２ｈ对花粉管的生长情况观察１次。
结果发现，在添加自交花柱蛋白的培养基中，花粉管的
生长从培养的４ｈ开始受到抑制，４～１０ｈ内发生明显的
抑制作用，１０ｈ后花粉管不再继续生长，其平均长度
（２４０．１μｍ）仅为添加异交蛋白花粉管平均长度
（７２８．０μｍ）的１／３左右；添加异交蛋白培养液中的花粉
管平均长度与未添加任何花柱蛋白的花粉管的平均长
度相比（７３６．２μｍ），在生长状况上没有明显差异。
２．３ ＰＡＧＥ电泳结果
添加自交、异交花柱蛋白培养的花粉管可溶性蛋白
经ＰＡＧＥ电泳分离结果显示，２种花粉管可溶性蛋白图
谱所显示蛋白条带比较均匀，分布差异不明显，仅在Ｒｆ
值＝０．８１（比移Ｒｆ＝条带泳动距离／指示剂泳动距离）
处，自交花柱蛋白处理的花粉管的蛋白图谱显示出１条
特异蛋白带（图１箭头ａ所示）。
图１ 自交、异交花粉管蛋白的ＰＡＧＥ电泳结果与模式
Ｆｉｇ．１ ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ
ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ
２．４ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果
分别添加自交、异交花柱蛋白培养的２种沙田柚花
粉管可溶性蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果显示，各种蛋白
分子量集中在１００ｋＤ内，在每条泳道高、中、低分子量区
域比较均匀地分布了约５０条蛋白带，蛋白条带数目明
显地比普通电泳即ＰＡＧＥ电泳结果（图１）增加，这说明
构成花粉管可溶性蛋白的亚基种类较多。２种花粉管可
溶性蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱基本相似，仅在自交柱
蛋白处理的花粉管可溶性蛋白图谱中发现２条相对分
子量分别约为３５．０ｋＤ和３７．５ｋＤ的蛋白特异带（图２
箭头ａ、ｂ所示），在异交柱蛋白处理的花粉管可溶性蛋白
提取物中未发现蛋白特异带。
图２ 自交、异交花粉管蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果与模式
Ｆｉｇ．２ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ
ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ
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·生物技术· 北方园艺２０１４（０３）：８８～９１
２．５ ＩＥＦ－ＰＡＧＥ电泳结果
分别添加自交、异交花柱蛋白培养的２种花粉管可
溶性蛋白等电聚焦电泳分离结果显示，蛋白质等电点主要
集中在ｐＨ ４．５～７．８；２种处理方式花粉管蛋白电泳图谱
差异不大，但在自交花粉管蛋白的电泳图谱上发现了２条
特异蛋白带，等电点分别为６．２０和５．８５（图３中ａ、ｂ）。
图３ 自交、异交花粉管蛋白ＩＥＦ－ＰＡＧＥ电泳结果与模式
Ｆｉｇ．３ ＩＥＦ－ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ
ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ
３ 讨论
薛妙男等［１－３］对沙田柚自花授粉和异花授粉（沙田
柚×酸柚）过程中，花粉的萌发、花粉管的生长，以及受
精过程进行了研究，发现无论是自花授粉还是异花授
粉，花粉在柱头上均能萌发，并且花粉管能通过柱头乳
突细胞间隙进入柱头。但自花授粉和异花授粉的花粉
管在柱头中的生长情况完全不同，自花授粉的花粉管伸
长到花柱１／４～１／２时，自、异交的花粉管生长速度出现
差异，自交花粉管在花柱１／２左右处停止生长，而异交
花粉管生长正常进入胚囊受精。至于自、异交花粉管在
花柱中的这种生长差异的原因，杨继华等［１２］认为沙田柚
花柱在自花授粉后诱导能够产生具有核酸酶活性的
Ｓ－糖蛋白，这种Ｓ－糖蛋白可对花粉管的生长产生抑制作
用，而在异花授粉的花柱中没有发现Ｓ－糖蛋白的产生。
这种现象在烟草［１３－１４］、矮牵牛［１５］、秘鲁番茄［１６］和苹果［１７］
等植物中也有报道。该试验在沙田柚花粉的离体萌发
过程中，通过添加自交和异交花柱蛋白，发现沙田柚花
粉的萌发没有受到影响，但在随后花粉管的生长中，自
交花柱蛋白对花粉管的生长有明显抑制作用，培养４ｈ
开始花粉管的生长速度降低，１０ｈ后不再生长，２４ｈ时
其长度仅为添加异交花柱蛋白花粉管的１／３。结果与沙
田柚栽培条件下自交、异交时花粉的萌发和花粉管的生
长情况相吻合。
通过对自交、异交花柱蛋白处理的沙田柚花粉管可
溶性蛋白质进行电泳分析比较，发现在添加了自交花柱
蛋白的花粉管中出现了一些特异蛋白质，特异蛋白亚基
分子量分别大约为３５．０ｋＤ和３７．５ｋＤ，特异蛋白的等
电点分别为５．８５和６．２０。但其理化特性、生活学活性、
与花柱Ｓ－核酸酶的相互作用，以及在自交不亲和中的作
用等还有待今后进一步深入细致的研究。
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ＱＩＮ Ｐｉｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ，ＨＯＵ Ｌｉ－ｘｉａ，ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｗｅｎ，ＱＩＮ Ｘｉｎ－ｍｉｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４１００４）
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北方园艺２０１４（０３）：９１～９６ ·生物技术·
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ ｏｆ Ｃｉｔｒｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ ｖａｒ．ｓｈａｔｉｎｙｕ Ｈｏｒｔ．ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ａｎｄ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｎ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ ｇｒｏｗｔｈ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｎａｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｂｕｔ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ．Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ ｉｎ ｔｈｏｓｅ ｍｅｄｉａ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｅｌｆ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗａｓ ｒｅｓｔｒａｉｎｅｄ，ｗｉｔｈ ｃｒｏｓｓ－ｐｏｌｉｎａｔｅｄ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗａｓ ｕｎａｆｅｃｔｅｄ．ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｌｅｎ
ｔｕｂｅ ｓｅｌｆ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ １ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄｓ（Ｒｆ＝０．８１）；ｔｕｂｅ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｏ ｓｅｌｆ
ｓｔｙｌｅｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｐｐｅａｒｅｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ２ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ３５ｋＤ ａｎｄ ３７．５ｋＤ ｂａｎｄ；ＩＥＦ－ＰＡＧＥ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｌｆ ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔｓ ｏｆ ５．８５
ａｎｄ ６．２０ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｎｄｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｉｔｒｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ ｖａｒ．ｓｈａｔｉｎｙｕ Ｈｏｒｔ．；ｐｏｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｐｏｌｅｎ ｔｕｂｅ ｌｅｎｇｔｈ；ｓｔｙｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
第一作者简介：许瑞瑞（１９８２－），女，博士，讲师，研究方向为植物逆
境基因表达调控。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｒｕｉｒｕｉ２００６＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：曹慧（１９６６－），女，博士，教授，硕士生导师，研究方向为
果树逆境生理。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｉ５２３２＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：山东省自然科学基金资助项目（Ｙ２００７Ｄ６０）；潍坊市科
学技术发展计划资助项目（２０１２１３０５，２０１２０９８）；生物化学与分子
生物学山东省高校重点实验室（潍坊学院）开放课题资助项目
（２０１２ＳＷＫＦ０１）。
收稿日期：２０１３－１０－２２
两个苹果ＲＮＡ解旋酶基因的基本特征与表达分析
许 瑞 瑞１，张 世 忠２，曹 慧１，刘 慧 莲１，王 建 波１
（１．潍坊学院，山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室，山东 潍坊２６１０６１；
２．山东农业大学 国家苹果工程技术研究中心，山东 泰安２７１０１８）
摘 要：利用生物信息学方法对２个苹果ＲＮＡ解旋酶基因染色体定位、系统进化关系和氨
基酸序列基本特征等进行了预测，分析了基因在果实成熟期和砧穗互作中的表达差异；利用
ＰｌａｎｔＣＡＲＥ软件对二者的启动子序列中所包含的响应元件进行了预测和分析；利用ｑＲＴ－ＰＣＲ方
法分析了２个苹果ＲＮＡ解旋酶基因的组织表达模式。结果表明：“金冠”苹果基因组中鉴定了２
个ＲＮＡ解旋酶基因，命名为Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ１、Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ２，分别分布在苹果第６、１７条染色体上；表达
谱芯片分析发现，在苹果果实成熟时期和砧木接穗互作过程中，Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ１和Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ２基因
的表达有不同程度的变化；２个基因的启动子区域存在多个胁迫响应元件，如 ＭＢＳ、ＨＳＥｓ、ＴＣ－
ｒｉｃｈ ｒｅｐｅｎｔ、ＡＲＥｓ、ＡＢＲＥｓ、ＧＡＲＥ ｍｏｔｉｆ、Ｐ ｂｏｘ、ＣＧＴＣＡ ｍｏｔｉｆ、ＴＧＡＣＥ ｍｏｔｉｆ、Ｌｉｇｈｔ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ
ｅｌｅｍｏｎｔｓ等。Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ１、Ｍｄｈｅｌｉｃａｓｅ２在“平邑甜茶”茎、叶、花、果实中都有表达，二者分别在茎和
叶中的表达量最高。
关键词：苹果；ＲＮＡ解旋酶；基因特征；启动子序列分析；表达分析
中图分类号：Ｓ ６６１．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）０３－００９１－０６
ＲＮＡ解旋酶是一类参与ＲＮＡ结构调控并影响
ＲＮＡ合成、复制、翻译启始、剪接、ｒＲＮＡ加工、核糖体组
装、核ｍＲＮＡ输出及ｍＲＮＡ稳定化与降解的蛋白质新
家族［１－２］。植物细胞中ＲＮＡ解旋酶参与多种代谢过程，
具有广泛的生理意义并且对逆境的适应具有重要作
用［３］。植物中的ＲＮＡ解旋酶已成为该领域的研究热
点，越来越多的植物基因组中的ＲＮＡ解旋酶基因被克
隆鉴定，包括拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）［４－８］、水稻
（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）［９］、大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）［１０］、烟草
（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）［１１］等。
２００１年，Ｓｅｋｉ等［４］在拟南芥中，通过对１ ３００个基因
的ｃＤＮＡ进行微阵列（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）分析技术，首次发现
冷害诱导型ＤＥＡＤ－ｂｏｘ解旋酶基因ＡＢ０５０５７４，这一发
现表明解旋酶在植物胁迫应答过程中具有一定的作用，
研究还发现拟南芥的ＦＬ２５Ａ４基因能够忍耐４℃的低
温；Ｇｏｎｇ等［５］利用图位克隆的方法从有较强的耐寒能
力的拟南芥突变体中得到ＣＲＹＯＰＨＹＴＥ／ＬＯＳ４基因，
试验结果显示该基因编码定位于核膜上的ＤＥＡＤ－ｂｏｘ
ＲＮＡ解旋酶，对于ｍＲＮＡ的输出和植株的生长发育以
及逆境响应具有重要的作用；大麦中的ＲＮＡ解旋酶基
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