全 文 ：·!·中药新药与临床药理 !#年 $月第 $% 卷第 $期
收稿日期：#$$% & $’ & ((
作者简介：王少军 （()*) &），男，硕士研究生，从事天然产物化学及中药质量标准研究。+,-： （$*)(）*(().(，/012-：3145678 797:; <=0。
茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓 （!#$% &&’ ( )&*+, >
?=-@）的菌核黑色外皮，性平，味甘、淡，归心、
肺、脾、肾经 A( B。茯苓皮常于 * C )月采挖，是一味常
用的利水消肿药，主要含有多糖、三萜酸类如茯苓酸
等有效成分 A# & % B。传统认为云南是茯苓的地道产区，习
称云苓。现在仍以云苓为主，但发展人工栽培以来，
安徽、湖北等省也成为茯苓主产区，华东及辽宁、天
津、陕西等省也有分布，并有栽培与野生 #类品种，
加之市场上不断出现伪劣茯苓皮药材，故有必要对茯
苓皮建立较全面的质量控制方法。本文对茯苓皮中三
萜酸类成分进行了初步的 DEFG 指纹图谱方法学研
究，以期建立茯苓皮药材三萜酸类成分的指纹图谱，
探讨控制其内在质量的科学方法。
! 仪器与试药
H52-,4: (($$型液相色谱仪，I?J检测器，含在
线真空脱气机、四元梯度泵、柱温箱；色谱数据的采集
与处理由 H52-,4:化学工作站完成；超声波清洗仪。甲
醇、磷酸、乙腈均为分析纯；水为超纯水。茯苓皮药
材由本课题组采集，经本院鉴定教研室鉴定为药典规
定的多孔菌科真菌茯苓 （!#$% &&’ K )&*+; > ?=-@）
的菌核黑色外皮，共 ($批，详细资料见表 (。
表 ! 茯苓皮药材样品资料
编号
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)
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样品产地
湖北罗田县九资河镇九资河村 （村南朝北山坡）
湖北罗田县九资河镇九资河村 （东面山坡）
湖北罗田县九资河镇九资河村 （朝南坐北山坡）
湖北罗田县九资河镇烂泥畈村
云南武定县万德乡马德坪村 （北山坡）
云南武定县万德乡马德坪村 （南山坡）
云南武定县万德乡马德坪村 （东山坡）
安徽金寨县桃岭乡桐岗村 （东山坡）
安徽金寨县桃岭乡桐岗村 （西山坡）
安徽金寨县桃岭乡桐岗村 （南山坡）
采收时间
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茯苓皮中三萜酸类成分 DEFG指纹图谱的方法学研究
王少军 (，段 启 #，曹 君 #，杨世林 (，龚千锋 #，张继华 ( （(; 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌
$$$.；#; 江西中医学院，南昌 $$$%）
摘要：目的 建立茯苓皮药材中三萜酸类成分的 DEFG指纹图谱。方法 采用 DEFG法，以甲醇超声法提取样品，
流动相：乙腈 & $; ! L磷酸水溶液 （梯度洗脱）；检测波长：#%# 40；柱温：$ M；流速：(; $ 0F N 024。分析了
($批不同产地的茯苓皮药材，采用计算机辅助相似性评价系统进行了评价，建立共有模式，计算 ($批样品的指纹图
谱与其共有模式的相似度值。结果 不同产地、不同批次的茯苓皮药材其成分含量存在较大差异。结论 所建立的
指纹图谱具有稳定、重现性好的特点，该研究将有助于茯苓皮药材的标准化种植、质量控制。
关键词：茯苓皮；三萜酸类成分；DEFG；指纹图谱
中图分类号：O#’%; ( 文献标识码：H 文章编号：($$ & )*’ K#$$! >$( & $$! & $
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·!· 中药新药与临床药理 !#年 $ 月第 $%卷第 $ 期
! 方法与结果
! # 色谱分析条件 色谱柱：#$%&’()* +,- ./0 柱
（122 3 4 5 66，! !6）；流动相：乙腈 （7） 8 24 !
9磷酸水 （:）梯度洗脱 （2 ; <5 ; !2 6)=， 0! ; >! 97； !/ ; !! 6)=， >! ; /22 9
7； !5 ; 52 6)=， /22 ; !2 97）；检测波长： 11
=6；柱温：<2 ?；流速为 /4 2 6@·6)= 8 /；进样量：
12 !@；记录时间：52 6)=；分析柱死体积：< 6@。
! ! 供试品溶液的制备 茯苓皮药材均匀粉碎，过
52 目筛，精密称取 24 1! A 茯苓皮药材粉末于 1! 6@
容量瓶中，用甲醇定容至刻度，称定重量，超声提取
<2 6)=，再次称重，用甲醇补足减失的重量，分析前
用 24 ! !6微孔滤膜滤过即得。
! $ 方法学考察 稳定性试验：同一供试品溶液 （编
号 /2），1 B内连续进样 C次，记录各共有色谱峰保
留时间，供试品溶液通过 #D@.分析，1 B内共有峰的
相对保留时间相当一致，E-,值均小于 <4 2 9，结果
表明常温下供试品溶液在 1 B 内保持稳定。精密度
试验：同一供试品溶液 （编号 /2），连续进样 5
次，共有峰的相对保留时间一致，E-,值均小于 <4 2
9，表明仪器精密度良好。重现性试验：取编号为
/2 的样品 5 份，按上述方法制备供试品溶液并进行
检测，考察各色谱峰相对保留时间比值的一致性，结
果所考察的共有峰的相对保留时间具有较好的重现
性，其 E-,值均小于 <4 2 9。
! % 茯苓皮药材三萜酸类成分 &’()指纹图谱分析
! % # 指纹图谱特征峰的标定 根据 /2 批供试品
#D@.图谱所给出的相关参数，茯苓皮原药材的三萜
酸类成分的色谱峰在 52 6)=之内全部出现，共标示出
C个特征峰，从指纹图谱中可以看出 5号峰 （保留时
间)/4 2CC6)=，峰面积百分比)1C 9）相对峰面积
比较大，比较稳定，故选择 5号峰为参照峰，见图 /。
相对保留时间 （特征峰号）：24 1C20 （/）、
24 <252 （1） 、 24 <
峰面积均值 （特征峰号）：24 /1/< （/）、24 （1）、24 1/1 （!）、
/4 2222 （-，5）、24 512 （C）。不同产地茯苓皮药材
指纹图谱极为相似，不仅仅是特征指纹峰，而是几乎
所有峰相似。由于指纹峰相对峰面积相差较大，故以
/2批特征指纹峰相对峰面积的均值列出。
! % ! 特征指纹峰相对保留时间及相对峰面积
进行 /2 批样品分析，以 5 号峰作为参照峰，各指
纹峰的峰面积及相对峰面积、保留时间及相对保留时
间均具有较好的重现性。特征峰的相对保留时间基本
符合 《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 （暂
行）》中关于药材部分的要求，E-,值均低于 /4 29。
但指纹峰的峰面积及相对峰面积相差较大 （E-,大于
< 9），可能是不同产地的药材成分含量不同所致。
·!!·中药新药与临床药理 !#年 $月第 $% 卷第 $期
特征指纹峰
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编号
表 ! * 批茯苓皮药材主要特征峰相对保留时间
! # $ 指纹图谱相似度评价 采用国家药典委员会推
荐的计算机辅助相似性评价系统 1中南大学中药现代化
研究中心梁逸曾等研制 2对 *批样品进行数据处理，
分别得到了用均值 （相关系数）和中位数 （相合系
数）计算的指纹图谱共有模式 （见图 $），*批样品
的指纹图谱与其共有模式的相似度值分别为：*0 )’、
*0 )!、 *0 )&、 *0 )(、 *0 ))、 *0 )(、 *0 )’、 *0 )!、
*0 )&、 *0 )) （相关系数）； *0 )&、 *0 )(、 *0 )’、
*0 )’、*0 )(、*0 ))、*0 )’、*0 )&、*0 )’、*0 )) （相合
系数）。据此，我们制定了真伪鉴别相似度值的标
准，即相关系数用均值和中位数表示均不低于 *0 )!；
相合系数用均值和中位数表示均不低于 *0 )&。
$ 讨论
$ % 样品提取溶剂、时间和方法的选择 考察了甲
醇、乙腈、氯仿 $种试剂的提取效果，结果发现甲醇
的提取效果最好。考察了超声提取法、加热回流法、
索式提取法 $种提取方法的提取效果，结果表明超声
提取法效果最好。考察了甲醇超声提取 ! 345、$*
345、%! 345的提取效果，分析比较后发现超声 $* 345
为好。茯苓三萜酸类成分紫外吸收较弱，样品溶液需
要较高的浓度 6! 7，结果采用 #0 #项下方法提取 $* 345
即可达到平衡，提取液不需要浓缩即可直接进样。
$ ! 色谱条件的选择 （）色谱柱的初步选择：我
们对两根 89:;<=4>色谱柱的重现性进行了初步考察，
结果同一样品在两根 89:;<=4>色谱柱上的色谱行为有
较好的一致性。 （#）检测波长的选择：考察了茯苓
皮药材提取物的紫外最大吸收波长，结果茯苓皮药材
在 #* 53和 #%# 53在这两种检测波长下，8?@A 图
谱中均有多个色谱峰，检测波长为 #%#53 时色谱峰
较多且峰形较好，综合考虑，选择 #%# 53为测定波
长。 （$）检测时间的考察：在此梯度条件下考察了
&* 345、’! 345、(* 345 和 #* 345 图谱，结果表
明，所有的指纹峰在 &* 345 内出现，故确定时间为
&* 345。 （%）柱温的选择：根据对柱温在 #* B、#!
B、$* B的色谱图进行比较，发现没有明显差异，
但考虑到本地气温较高，故选 $* B。 （!）进样量的
选择：分别进样 ! !@、* !@、#* !@，由于茯苓三
萜类成分紫外吸收较弱， 进样 ! !@、* !@ 峰面积
太低，进样 #* !@基本可以满足要求。 （&）柱流速
选择：结合文献 6 ! 7考察了流速 *0 ( !@ . 345 和 0 *
!@ . 345，发现流速 0 * !@ . 345 为好。 （’）流动相
的选择：我们曾研究过等度洗脱的可行性，结果分离
度、峰形等均不如梯度洗脱理想，因此选用梯度洗
脱。本文的流动相先后考察了 $* 多个不同梯度洗
脱，结果本文所用的梯度最佳。
$ $ 色谱指纹图谱鉴别 茯苓皮分布广泛，但 )*/
的产量分布在云南、湖北和安徽三省，不同来源的茯
苓皮中三萜类成分含量差异较大 6 $，% 7。从我们收集的
* 个样品来看，尽管各样品中三萜类成分含量差异
较大，但相对保留时间一致，几乎所有的峰都是共有
峰，这就提示我们在茯苓皮的品种真伪鉴别中，不用
考虑成分含量的大小，只通过相对保留时间的对比，
就可以做到准确鉴别。
本课题仅仅初步研究了茯苓皮三萜酸类成分的指
纹图谱，要满足对茯苓皮的全面质量管理，需要建立
能够反映茯苓皮内在质量的、全面的色谱指纹谱，尚
需进行大量样本分析和药效比较研究。
参考文献：
6 7凌一揆，颜正华 0 中药学 6C 7 0 上海：上海科学技术出版社，
)(%0 )!0
6 # 7国家中医药管理局 《中华本草》编委会 0 中华本草上册 6C 7 0 上
海：上海科学技术出版社，)))0 !!%0
6 $ 7仲兆金，刘浚 0 茯苓有效成分三萜的研究进展 6 D 7 0 中成药，
#**，#$ 1 2：!(0
6 % 7仲兆金，许先栋 0 茯苓三萜化学成分及其光谱特征研究进展 6 D 7 0
中国药物化学杂志，))’，’ 1 2：’0
6 ! 7丁岗，王振中，章晨峰，等 0 茯苓中三萜酸类 8?@A 指纹图谱的
初步研究 6 D 7 0 中国中药杂志，#**#，* 1* 2：#’0
1编辑：邹元平 2