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茯苓和茯苓皮水和乙醇提取物的利尿作用及其活性成分的分离鉴定



全 文 :书茯苓和茯苓皮水和乙醇提取物的利尿作用及其活性成分的分离鉴定
田 婷,陈 华,殷 璐,陈丹倩,冯亚龙,赵英永
(西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,陕西 西安 710069)
摘要:目的 采用化学成分的提取分离与利尿活性评价相结合方法,寻找茯苓和茯苓皮利尿活性部位
并确定活性部位的主要化学成分。方法 口服给予生理盐水负荷正常大鼠不同剂量的茯苓和茯苓皮的水或
乙醇提取物,记录 6 h尿量,测定尿液的 pH值及电解质 Na +,K +和 Cl -的含量,并采用色谱分离法对活性
部位进行化学成分分离,用 NMR法对分离的化学成分进行结构鉴定。结果 与对照组相比,口服茯苓皮乙
醇提取物 150,300 和 600 mg·kg -1大鼠尿量分别增加 29%,21%和 42% ( P <0. 01) ,K +排泄量分别减少
18%,22%和 27% ( P <0. 01) ,各组 Na + /K +比值均升高; 600 mg·kg -1组大鼠尿液 Na +排泄量显著增加
14% ( P <0. 05) ; 茯苓水提取物 50,100 和 200 mg·kg -1,茯苓乙醇提取物 62. 5,125 和 250 mg·kg -1及茯
苓皮水提取物 75,150 和 300 mg·kg -1无利尿作用。化学成分提取与分离结果显示,茯苓皮乙醇提取物主
要包含四环三萜类化合物茯苓酸、猪苓酸 C、去氢土莫酸、3-表去氢土莫酸、去氢齿孔酸、齿孔酸和去氢齿孔
酮酸等。结论 茯苓皮乙醇提取物具有显著的利尿作用,其主要化学成分为四环三萜类化合物。
关键词:茯苓; 茯苓皮; 四环三萜; 利尿; 电解质
中图分类号:R983,R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1000-3002(2014)01-0057-06
DOI:10. 3867 / j. issn. 1000-3002. 2014. 01. 009
茯苓〔Poria cocos (Schw.)Wolf.〕是多孔菌
科(polyporaceae)卧孔属(Poria)的干燥真菌菌核,
主产于云南、安徽和湖北省等地,其性平,味甘、淡,
具有利水渗湿、健脾和胃及宁心安神的作用,主要用
于治疗小便不利、水肿、脾胃气虚、食少便溏、体倦乏
力以及心神不宁、惊悸和失眠等症[1],为多种方剂
和中成药的原料,有“十药九茯苓”一说。而它的外
皮即茯苓皮(Cortex Poriae),性平,味甘、淡,归心、
肺、脾、肾经,功专利水消肿[2]。从茯苓中分离得到
的化学成分主要为三萜类、多糖类和甾体类等[3 -7],
而茯苓皮中则主要为三萜类和多糖类等[2,8]。有文
献报道,茯苓皮在我国是一味常用的利水消肿药,但
在日本被当做下脚料弃掉,造成资源的巨大损
失[8]。随着西药利尿药不良反应报道的逐渐增
多[9 -11],寻找具有良好作用的中药利尿药变得越来
越重要。长期以来,人们对茯苓皮的研究主要集中
于抗肿瘤、抗炎和抗菌等活性,却忽略了它传统的利
基金项目:国家自然科学基金项目 (81001622);长江
学者和创新团队发展计划资助(IRT1174);教育部“新世纪
优秀人才支持计划”项目(NCET-13-0954);国家创新训练
计划项目(20130697004)
作者简介:田 婷 (1990 -),女,硕士研究生,主要从
事中药药理学和代谢组学研究。
通迅作者:赵英永,E-mail:zyy@nwu. edu. cn,Tel:
(029)88304569
尿活性。本研究对茯苓和茯苓皮的利尿活性进行了
初步研究,为进一步阐明其利尿活性部位和化学成
分提供实验基础。
1 材料与方法
1. 1 实验动物
雄性 SD大鼠,体质量180 ~200 g,购自第四军医
大学实验动物中心,动物许可证号:SYXK 2010-004。
实验前 1 周在实验室饲养。
1. 2 实验仪器和层析材料
衡新 ACS系列电子天平,中山市衡新电子有限
公司;旋转蒸发仪(DE52CS),上海亚荣生化仪器
厂;恒温水浴锅(B-220),海亚荣生化仪器厂;循环
水式多用真空泵 SHB-Ⅲ,郑州长城科工贸有限公
司;低温冷却液循环泵 DLSB-5 /10,郑州长城科工
贸有限公司;大小鼠代谢笼 ZH-B6,淮北正华生物
仪器有限公司;IR100 Spectrometer 红外光谱仪,
Thermo 公司;DRX-500 超导核磁共振仪,瑞士
Bruker公司。
柱层析材料为青岛海洋化工厂生产的 100 ~
200,200 ~300,300 ~ 400 目硅胶;薄层层析材料
为青岛海洋化工厂生产的硅胶 G 和 GF254 型硅
胶;Sephadex LH-20 为 Pharmacia 公司产品。呋
塞米 (furosemide,规格:每片 20 mg,批号:
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010730)购自江苏林海药业有限公司。
1. 3 茯苓和茯苓皮提取物的制备
茯苓和茯苓皮药材均购自陕西药材采购供应
站,产地安徽,经西北大学王亚洲教授鉴定为多孔菌
科卧孔属真菌 P. cocos的菌核及其菌核外皮,茯苓
(编号:F120301)和茯苓皮(编号:F120302)药材
标本存放在西北大学生命科学学院。
茯苓皮 1. 5 kg,加 3 倍体积 95%乙醇超声波提
取 30 min,取滤液,药渣加 95%乙醇重复提取 2 次,
合并 3 次滤液,于 60℃恒温水浴蒸干,得茯苓皮乙
醇提取物 279 g,提取率为 18. 6%,冰箱保存备用。
茯苓皮 2. 5 kg,加 3 倍体积水煎煮 3 次,第一次
1 h,后两次各 30 min,合并滤液,旋转蒸发浓缩至
干,得茯苓皮水提取物75. 7 g,提取率为3. 03%,冷
藏备用。茯苓乙醇提取物和水提取物制备方法同茯
苓皮。茯苓乙醇提取物得率为 2. 5%,茯苓水提取
物得率为 1. 8%。
1. 4 动物分组和给药
取 SD大鼠 112 只,随机分为 14 组,每组 8 只。
一组为正常对照组,一组为阳性呋塞米对照组。实
验前禁食不禁水 12 h。每组按 50 mL·kg -1生理盐
水灌胃,造成大鼠体内水钠潴留。30 min 后,正常
对照组按10 mg·kg -1的自来水灌胃,阳性对照组给
予20 mg·kg -1的呋塞米溶液,其他12 组,分别给予
茯苓水提取物 50,100 和 200 mg·kg -1(分别相当
于生药量 2. 5,5 和 10 g·kg -1) ,茯苓乙醇提取物
62. 5,125 和 250 mg·kg -1(分别相当于生药量
2. 5,5 和 10 g·kg -1) ,茯苓皮水提取物 75,150 和
300 mg·kg -1 (分别相当于生药量 2. 5,5 和
10 g·kg -1)以及茯苓皮乙醇提取物 150,300 和
600 mg·kg -1(分别相当于生药量 0. 85,1. 7 和
3. 4 g·kg -1)。给药后,立即将大鼠放入代谢笼中,
每笼1 只,在代谢笼下面放置带刻度的试管,每小时
记录尿液 1 次,连续收集 6 h。测定尿液的 pH值以
及 Na +,K +和 Cl -的含量。
1. 5 茯苓皮乙醇提取物化学成分的分离和鉴定
应用色谱分离法分离茯苓皮的化学成分、波谱
分析技术鉴定化学成分的结构。取茯苓皮乙醇提取
物 150 g,将其悬浮于水中依次用石油醚、乙酸乙酯
和正丁醇萃取,得石油醚萃取物 12. 24 g,乙酸乙酯
萃取物 105. 98 g,正丁醇萃取物 11. 48 g。取乙酸
乙酯萃取物 50 g,将其溶于甲醇,按样品 ∶ 硅胶 =
1∶ 2的比列伴样,挥干甲醇后上至硅胶柱(3 kg) ,以
氯仿∶丙酮(9∶ 1)展开,按其色带分为 Fr. 1 ~ Fr. 7
组分。组分 Fr. 1 经反复硅胶常压柱层析、减压柱层
析和、中压柱层析、RP-18 反相柱层析和 Sephadex
LH-20凝胶层析等,得到化合物 1(28. 5 mg)和化合
物2(31.4 mg) ;用同样的方法从 Fr.2分离得到化合
物 3(50.5 mg)和化合物 4(13. 5 g) ;从 Fr. 3 分离
得到化合物 5 (20. 9 mg) ;Fr. 4 分离得到 6
(26.5 mg) ;Fr.6分离得到化合物 7(35. 9 mg)。随
后用 NMR等技术对分离的化合物进行结构鉴定。
1. 6 统计学分析
实验结果数据均以x ± s 表示,数据采用 SPSS
16. 0 软件处理,组间比较采用 t 检验,P < 0. 05 认
为有统计学意义。
2 结果
2. 1 茯苓和茯苓皮提取物对大鼠尿量的影响
在给药后 6 h 内,茯苓水提取物各组大鼠尿量
与水对照组相比无明显变化(图 1A)。茯苓乙醇提
取物250 mg·kg -1组在给药后第5 和第6 小时才开
始出现利尿作用,尿量比正常对照明显增加(P <
0. 05,P <0. 01) ,50 和 100 mg·kg -1组无明显变
化(图 1B)。
Fig. 1 Diuretic activities of aqueous extract(A)and ethanol ex-
tract(B)ofP. cocos in rats. The aqueous extract,ethanol ex-
tract and furosemide(20 mg·kg -1)were ig administered to rats.
The volume of excreted urine was measured at 1,2,3,4,5 and 6 h
after drug administration. x ±s,n =8. * P <0.05,**P <0. 01,com-
pared with control group at the same time.
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茯苓皮水提取物 75 和 300 mg·kg -1组利尿作
用出现在给药后第 5 和第 6 小时(P <0. 05) ,尿量
与对照组相比分别增加 21%和 14%(图 2A)。乙
醇提取物 150,300 和 600 mg·kg -1组尿量增加非
常显著(P < 0. 01) ,分别增加 29%,21%和 42%,
其利尿作用分布均匀,在 1 ~6 h内均有较好的作用
(图 2B)。呋塞米的利尿作用非常明显(P <0. 01)。
2. 2 茯苓和茯苓皮提取物对尿液电解质和 pH值
的影响
由表 1 可见,茯苓能够增加尿液 Na +和 Cl -排
出,减少 K +排泄,使尿液 Na + /K +比值升高。水提
物50 mg·kg -1组 K + 排泄减少显著(P < 0. 01) ,
Na + /K +比值明显升高(P < 0. 05) ;100 mg·kg -1
组 Na + 排出明显增加(P < 0. 05)。乙醇提取物
125 mg·kg -1组 Na +排泄显著增加(P <0. 05) ;其
他各组无明显变化。茯苓水提取物和乙醇提取物对
尿液 pH值无明显影响。
茯苓皮水提物和乙醇提取物对尿液电解质的影
响差异较大。水提物对 Na +,Cl -和 K +排出无影
响;而乙醇提取物 600 mg·kg -1增加 Na + 排泄
(14%) (P <0. 05) ,各组均能显著减少 K +和 Cl -
排出 (P <0. 01) ,量 效 关 系 明 显。水 提 取 物
150 mg·kg -1和乙醇提取物各组尿液 Na + /K +比值
显著升高(P <0. 05,P <0. 01)。茯苓皮可以升高
尿液的 pH 值,乙醇提取物各组及水提取物
300 mg·kg -1组增加明显。呋塞米增加 Na +和 Cl -
排出(P <0. 01) ,升高 Na + /K +值(P <0. 01) ,对尿
液 pH值无明显影响。
Fig. 2 Diuretic activities of aqueous extract(A)and ethanol extract(B)of Cortex Poriae in rats. See Fig. 1 for the rat treatment. x ± s,
n =8. * P <0. 05,**P <0. 01,compared with control group at the same time.
Tab.1 Effect of extracts ofP. cocos and Cortex Poriae on urinary electrolyte excretion
Group Dose /mg·kg -1 pH K + /mmol·L -1 Na + /mmol·L -1 Cl - /mmol·L -1 Na + /K +
Control 0 6. 8 ±0. 1 45. 4 ±1. 6 89. 1 ±4. 1 103. 9 ±4. 1 2. 0 ±0. 1
AEP 50 6. 6 ±0. 2 37. 1 ±2. 3** 97. 1 ±2. 9 101. 9 ±1. 3 2. 7 ±0. 2*
100 6. 5 ±0. 1 46. 6 ±2. 5 99. 1 ±4. 1* 113. 1 ±3. 6 2. 2 ±0. 2
200 6. 7 ±0. 1 42. 4 ±2. 9 95. 8 ±2. 5 107. 1 ±2. 2 2. 3 ±0. 2
EEP 62. 5 6. 9 ±0. 1 44. 9 ±1. 7 94. 9 ±3. 5 106. 6 ±1. 7 2. 2 ±0. 2
125 6. 6 ±0. 1 42. 9 ±2. 1 95. 2 ±3. 5* 110. 5 ±3. 9 2. 3 ±0. 2
250 7. 0 ±0. 2 41. 5 ±2. 1 93. 1 ±2. 2 107. 4 ±3. 7 2. 3 ±0. 2
AECP 75 7. 1 ±0. 1 50. 2 ±3. 1 89. 4 ±2. 4 103. 3 ±4. 3 1. 8 ±0. 1
150 6. 9 ±0. 1 40. 2 ±2. 1 93. 2 ±2. 9 105. 9 ±3. 6 2. 4 ±0. 1*
300 7. 3 ±0. 1* 44. 4 ±3. 0 95. 4 ±3. 0 107. 3 ±2. 2 2. 2 ±0. 2
EECP 150 7. 9 ±0. 1** 37. 1 ±2. 1** 89. 8 ±2. 5 80. 2 ±2. 5** 2. 5 ±0. 2*
300 7. 4 ±0. 2* 35. 6 ±2. 2** 92. 9 ±3. 9 80. 8 ±3. 7** 2. 7 ±0. 2*
600 7. 9 ±0. 1** 33. 2 ±2. 2** 101. 6 ±3. 1* 86. 6 ±3. 7** 3. 2 ±0. 2**
Furosemide 20 6. 6 ±0. 2 31. 4 ±2. 3** 108. 3 ±4. 2** 108. 6 ±6. 0** 3. 5 ±0. 2**
See Fig. 1 for the rat treatment. AEP:aqueous extract of P. cocos;EEP:ethanol extract of P. cocos;AECP:aqueous extract of Cortex
Poriae;EECP:ethanol extract of Cortex Poriae. x ± s,n =8. * P <0. 05,**P <0. 01,compared with control group.
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2. 3 茯苓皮乙醇提取物化学成分的结构鉴定
利用 NMR等对分离的化合物进行结构表征,化
合物 1 ~7分别为:茯苓酸、猪苓酸 C、去氢土莫酸、3-
表去氢土莫酸、去氢齿孔酸、齿孔酸和去氢齿孔酮酸。
化合物 1:白色针晶。1H-NMR:δ0. 71(3H,
s,H-18) ,0. 83(3H,s,H-28) ,0. 85(3H,s,
H-29) ,0. 92 (3H, s, H-19) ,0. 94,0. 95
(ea. 3H,d,J =6. 4 Hz,H-26 and H-27) ,1. 06
(3H,s,H-30) ,1. 97(3H,s,CH3CO) ,2. 20
(1H,m,H-25),1. 77(1H,dd,J =11. 0,5. 5 Hz,
H-17) ,2. 35 (1H,m,H-20) ,3. 99 (1H, t,
J =6. 4 Hz,H-16) ,4. 40(1H,m,H-3) ,4. 68
(1H,s,H-31) ,4. 72(1H,s,H-31)。以上数据
与文献[12]对照,确定为茯苓酸。
化合物 2:白色针状结晶。 1H-NMR:δ5. 62
(1H,d,J =7.0 Hz,H-7),5.45(1H,d,J =6.0 Hz,
H-11) ,5. 07(1H,s,H-31a) ,4. 88(1H,s,
H-31b) ,4. 61(1H,t,J = 6. 5 Hz,H-16) ,1. 38
(3H,s,H-30) ,1. 27(3H,s,H-29) ,1. 17(3H,
s,H-19) ,1. 11(6H,s,H-18,H-28) ,1. 07(3H,
d,J =6. 5 Hz,H-26) ,1. 01(3H,d,J =6. 5 Hz,
H-27)。以上数据与文献[13]对照,确定为猪苓酸C。
化合物 3:白色针状结晶。 1H-NMR:δ1. 05
(3H,s,H-28) ,1. 12(3H,s,H-29) ,1. 15(3H,
s,H-19) ,1. 01,1. 02(ea. 3H,d,J = 6. 4 Hz,
H-26,H-27) ,1. 23(3H,s,H-18) ,1. 52(3H,s,
H-30) ,2. 29(1H,m,H-25) ,2. 74(1H,m,
H-17) ,2. 93(1H,m,H-20) ,4. 62(1H,t,J =
7. 2 Hz,H-16) ,3. 52(1H,m,H-3) ,4. 86(1H,
s,H-31) ,4. 99(1H,s,H-31) ,5. 42(1H,br. s,
J =5. 7 Hz,H-11) ,5. 67(1H,br. s,H-7)。以上
数据与文献[12]对照,确定为去氢土莫酸。
化合物 4:白色针状结晶。 1H-NMR:δ1. 21
(3H,s,H-28) ,1. 01(3H,s,H-29) ,1. 11(3H,
s,H-19) ,1. 01,1. 03(ea. 3H,d,J = 6. 5 Hz,
H-26,H-27) ,1. 09(3H,s,H-18) ,1. 44(3H,s,
H-30) ,2. 32(1H,m,H-25) ,2. 91(1H,m,
H-17) ,2. 97(1H,m,H-20) ,4. 50(1H,t,J =6.
8 Hz,H-16) ,3. 65(1H,br. s,H-3) ,4. 85(1H,
s,H-31) ,5. 01(1H,s,H-31) ,5. 49(1H,d,J =
6. 0 Hz,H-11) ,5. 66(1H,br. s,H-7)。以上数
据与文献[12]对照,确定为 3-表去氢土莫酸。
化合物 5:白色针状结晶。 1H-NMR:δ1. 05
(3H,s,H-18) ,1. 06,1. 07(ea. 3H,d,J = 7
Hz,H-26,H-27) ,1. 08,1. 09(ea. 3H,s,H-19,
H-30) ,1. 16 (3H,s,H-29) ,1. 25 (3H,s,
H-28) ,2. 33(1H,m,H-25) ,2. 69(1H,m,
H-20) ,3. 47(1H,t,J = 8 Hz,H-3) ,4. 94(2H,
s,H-31) ,5. 40(1H,d,J = 6 Hz,H-11) ,5. 63
(1H,d,J =5 Hz,H-7)。以上数据与文献[14]对
照,确定为去氢齿孔酸。
化合物 6:白色粉末。1H-NMR:δ3. 48(1H,t,
H-3) ,1. 66(1H,m,H-5) ,2. 35,2. 70(2H,m,
H-12) ,1. 95,2. 38(2H,m,H-15) ,1. 09(3H,
s,H-18) ,1. 12(3H,s,H-19) ,1. 06(3H,dd,
J =5. 5 Hz,H-26) ,1. 03(3H,dd,J = 5. 5 Hz,
H-27) ,1. 23 (3H,s,H-28) ,1. 25 (3H,s,
H-29) ,1. 27(3H,s,H-30) ,4. 97,4. 84(2H,s,
H-31)。以上数据与文献[14]对照,确定为齿孔酸。
化合物 7:白色针状结晶。 1H-NMR:δ0. 92
(3H,s,H-28) ,1. 02(3H,s,H-29) ,1. 04(3H,
s,H-19) ,1. 01,1. 03(ea. 3H,d,H-26,H-27) ,
1. 08(3H,s,H-30) ,2. 07(3H,s,H-COCH3) ,
2. 32(1H,m,H-25) ,2. 93(1H,dd,H-17) ,
2. 96(1H,m,H-20) ,4. 58(1H,t,H-16) ,4. 68
(1H,dd,H-3) ,4. 89,5. 02(ea. 2H,H-31) ,
5. 36(1H,d,H-11) ,5. 63(1H,d,H-7)。以上数
据与文献[13]对照,确定为去氢齿孔酮酸。
3 讨论
茯苓和茯苓皮是我国传统中药,可以与多种药
物配伍(如五苓散、猪苓汤、真武汤和五皮饮等) ,被
广泛用于治疗各种水肿症。
本研究采用称重法和代谢笼法[15]观察茯苓和
茯苓皮口服一次给药后对生理盐水负荷大鼠 6 h内
尿量的影响。研究结果表明,茯苓皮乙醇提取物的
利尿作用显著,茯苓水提取物无利尿作用,茯苓乙醇
提取物和茯苓皮水提取物的作用微弱,给药后
第 5 小时才开始有作用。呋塞米为髓袢利尿药,通
过抑制髓袢升支粗段 Na + -K + -2Cl -共同转运体,从
而影响尿液的稀释和浓缩,产生快速强大的利尿作
用,并且利尿的同时扩张全身小动脉,降低外周阻
力,增加肾血流量而不降低肾小球滤过率,是目前作
用最强的利尿药。而茯苓皮乙醇提取物的利尿作用
缓和持久,分布在 1 ~6 h。
茯苓皮乙醇提取物在利尿的同时能够增加电解
质 Na +的排出,减少 K +的排出,使尿液中 Na + /K +
比值升高,表明茯苓皮乙醇提取物是排 Na +利尿,
其机制可能是抑制了肾远曲小管和集合管 Na + -K +
交换,产生了类似于低效利尿药螺内酯的保钾排钠
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作用。本研究对茯苓皮乙醇提取物的化学成分进行
分离和结构鉴定,结果表明,茯苓皮乙醇提取物主要
含有茯苓酸、猪苓酸 C、去氢土莫酸、3-表去氢土莫
酸、去氢齿孔酸、齿孔酸和去氢齿孔酮酸等四环三萜
类化合物。这些化合物的结构与醛固酮的化学结构
相似。醛固酮是由肾上腺皮质球状带细胞合成和分
泌的一种盐皮质素。主要作用于肾远曲小管和肾皮
质集合管,增加对 Na +的重吸收和促进 K +的排泄,
也作用于髓质集合管,促进 H +的排泄,酸化尿液。
茯苓皮乙醇提取物可能通过拮抗醛固酮而发挥利尿
作用。此外,茯苓素(poriatin,一组多组分的四环
三萜类化合物)具有和醛固酮相似的化学结构,其
不仅体外能够结合到肾细胞膜醛固酮受体上,而且
在大鼠体内也具有拮抗醛固酮活性,茯苓素不但可
以提高尿中 Na + /K +比值,并且具有量效关系,因此
茯苓素是一组潜在性醛固酮受体拮抗剂[16]。所以
推测,茯苓皮的利尿作用可能是由于其所含的四环
三萜类化学成分抑制了肾小管对 Na +的重吸收和
K +的排泄。
至于茯苓乙醇提取物的利尿作用弱于茯苓皮的
原因尚不清楚。文献报道,四环三萜类化合物是茯
苓的主要化学成分[5 -7,17 -18]。《中华人民共和国药
典》规定茯苓和茯苓皮的醇提取率分别为不低于 2.
5%和6. 0%,茯苓皮醇提物的含量是茯苓醇提取物
的 2. 4 倍。文献也报道,茯苓皮中四环三萜去氢土
莫酸、猪苓酸 C、3-表去氢土莫酸、去氢齿孔酮酸和
茯苓酸的含量分别是茯苓中含量的 6. 48,11. 43,
3. 19,3. 00 和2. 95倍[19]。从这个结果可知,茯苓
皮中四环三萜类化合物的含量远高于茯苓。这与茯
苓皮的利尿作用强于茯苓的结果一致。并且从另一
个角度提示,茯苓皮利尿作用的活性成分可能为其
中所含有的四环三萜类化合物。
本研究初步观察了茯苓和茯苓皮的利尿活性。
本课题组将进一步采用不同极性的有机溶剂对茯苓
和茯苓皮乙醇提取物萃取,比较不同部位的利尿活
性,确定茯苓和茯苓皮活性部位。期望在活性的导
向下明确茯苓和茯苓皮利尿和治疗慢性肾病的活性
部位及其活性成分,阐明茯苓和茯苓皮利尿和治疗
慢性肾病的药效物质基础及其作用机制,并为茯苓
和茯苓皮的含量测定等相关质量标准的制定提供参
考依据。
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Diuretic activity of aqueous and ethanol extracts fromPoria cocos
and Cortex Poriae and active component identification
TIAN Ting,CHEN Hua,YIN Lu,CHEN Dan-qian,FENG Ya-long,ZHAO Ying-yong
(Ministry of Education Key Laboratory of Resource Biology and Biotechnology in Western China,
College of Life Sciences,Northwest University,Xian 710069,China)
Abstract:OBJECTIVE:To evaluate the main chemical components in active fractions and diuretic activi-
ties of Poria cocos and Cortex Poriae in saline-loaded rats through chemical component extraction and
separation. METHODS The extracts were orally administered to rats at different doses. Urinary volume,
pH and electrolyte excretion were measured in the urine of saline-loaded rats in 6 h. The chemical com-
ponents were isolated from the active fractions and their structures were identified using different chroma-
tographic and spectroscopic techniques. RESULTS The urine output of the ethanol extract of Cortex Pori-
ae 150,300 and 600 mg·kg -1 groups was increased by 29%,21% and 42% respectively (P <0. 01) ,
which had a remarkable effect on K + retention (18%,22% and 27% respectively,P <0. 01) ,but in-
duced notable excretion of Na + . Each Na + /K + ratio was also enhanced by the ethanol extract of Cortex
Poriae. The aqueous extracts of P. cocos (50,100 and 200 mg·kg -1)and Cortex Poriae (75,150 and
300 mg·kg -1)as well as the ethanol extract of P. cocos (62. 5,125 and 250 mg·kg -1)showed no diu-
retic activity. The separation experiment results showed that tetracyclic triterpenoid components,such as
pachymic acid,polyporenic acid C,dehydroeburicoic acid,3-epidehydrotumulosic acid,dehydrotumu-
losic acid,eburicoic acid and dehydroeburiconic acid were the main components of the ethanol extract of
Cortex Poriae. CONCLUSION The ethanol extract of Cortex Poriae displays remarkable diuretic activity and
its main components are the tetracyclic triterpenoid compounds.
Key words:Poria cocos;Cortex Poriae;tetracyclic triterpenoid diuresis;electrolyte
Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China (81001622) ;Changjiang
Scholars and Innovative Research Team in Universities (IRT1174) ;Program for New Century Excellent Talents in
Universities (NCET-13-0954) ;and National Innovation Training Plan Program(201310697004)
Corresponding author:ZHAO Ying-yong,E-mail:zyy@nwu. edu. cn,Tel: (029)88304569
(收稿日期:2013-07-18 接受日期:2013-12-20)
(本文编辑:齐春会)
·26· 中国药理学与毒理学杂志 2014 年 2 月第 28 卷第 1 期 Chin J Pharmacol Toxicol,Vol 28,No 1,Feb 2014