全 文 ：枸 橘 药 材 质 量 标 准 的 研 究
欧德銮 ,张　振(厦门特宝生物工程股份有限公司 厦门 361022)
摘要:目的　制定枸橘药材的质量标准 ,以利于中药使用的规范化 ,使枸橘药材能够更为广泛的应用于医疗事业。方法　采用 T LC法对枸橘
药材进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定柚皮苷的含量。结果　在 TLC色谱中枸橘药材柚皮苷斑点清晰;柚皮苷在 20～ 100μg 范围内呈良
好的线性关系 , r=0.9993;平均回收率为 99.8%, RSD=1.53%。结论　所建立的方法可准确地进行定性 、定量检测 , 可用于枸橘药材的质量
控制。
关键词:枸橘;质量标准;柚皮苷
中图分类号:R927.11　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2009)-07-0074-03
作者简介:欧德銮, 男(1978.10-)。毕业于福建卫生学校。职称:药
师。联系电话:0592-6889152
Study on quality standards of GouJu Herbs
OU De-luan ,ZHANGZheng(Xiamen Amoytop Biotech Co.,Ltd.Xiamen 361022 ,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To develop GouJu medicinal herbs quali ty standards and facilitate the standardiza-
tion of t raditional and herbal drugs , so as to make GouJu medicinal herbs more w idely used in medical re-
gion.METHOD　The TLC and HPLC methods w ere used for identification and quanti tative determination of
naringin.RESULT　GouJu could be identified by T LC.Naringin show ed a good linear relationship in the range of
20 ～ 100μg , r=0.9993.The average recovery w as 99.8%, and RSD was 1.53%.CONCLUSION　The methods
can be used for the quality cont rol of GouJu.
KEY WORDS:GouJu;Quality standards;Naringin
　　中草药用于治疗和防治疾病已经有几千年历史 , 是我国
的民族瑰宝之一 ,中医药的产生和发展与悠久的中华民族的
文化传统有着密切的关系。进入 21 世纪 , 全球性的绿色消费
意识兴起 ,使天然药物在消费者心目中的地位不断的提升 ,中
药以其确切的疗效和副作用小越来越受到青睐 , 随着科学技
术的发展 ,我国中药的发展正面临着前所未有的机遇和挑战。
因此 ,继承和发展传统中药 , 实现中药现代化 ,中药科学化 ,将
具有重大的意义和价值。
作为传统中药的枸橘具有疏肝 、和胃 、理气 、止痛等功效。
在中国各大古药方中比较常见 , 所以很有必要为其制定质量
标准。根据药典中各中药材标准项下的各项内容对枸橘药材
进行检查和分析。利用各种物理和化学分析的方法对枸橘药
材的性状 、鉴别 、检查项 、浸出物 、含量测定等方面进行研究和
考察 ,最后综合各个方面的因素制定一个具有良好的可行性
和实用性的枸橘药材的质量标准。
1　仪器与试药
1.1　仪器　高效液相色谱仪(SPD-10AVP , 日本岛津), 分析
天平(TG328B , 上海天平仪器厂), 薄层喷雾气压泵(BPQ-Ⅱ ,
重庆市南岸贝尔德仪器技术厂), 旋转蒸发仪(巩义市英峪予
化仪器厂), 智能崩解仪(ZB-ID ,天津市鑫洲科技有限公司)。
1.2　试药　甲醇 、乙腈为色谱纯 , 其他试剂均为分析纯;水为
双蒸水;橙皮苷 、柚皮苷 、辛弗林对照品由中国药品生物制品
检定所提供。长安枸橘 、周至枸橘药材均由当地药材市场提
供。
2　显微鉴别
取本品粉末制成切片在显微镜下观察 , 可见本品粉末呈
黄白色或棕黄色。中果皮细胞类圆形或形状不规则 , 壁大多
呈不均匀增厚。果皮表皮细胞表面观多角形 、类方形或长方
形 , 气孔近环式 ,直径 16～ 34μm ,副卫细胞 5～ 9 个;侧面观外
被角质层。汁囊组织淡黄色或无色 ,薄膜状 , 表面观表皮细胞
狭长 、皱缩 ,并与下层细胞交错排列。草酸钙方晶存在于果皮
和汁囊细胞中 , 呈斜方形 、多面体形或双锥形 ,直径 3 ～ 30μm。
螺纹 、网纹导管和管胞细小。
3　薄层鉴别
取枸橘药材少许 , 研细 , 过 60 目筛 , 称取两份 , 各 1g , 置
于具塞锥形瓶中 ,各加甲醇 20mL , 超声 30min , 滤过 , 滤液蒸
干(60℃), 残渣加甲醇 1m L使溶解 , 作为供试品溶液 1#和 2
#。另取柚皮苷对照品 , 加甲醇制成每 1m L 含 0.5mg 的溶
液 , 取橙皮苷对照品少许 , 制成饱和溶液 ,取辛弗林对照品加
甲醇制成每 1mL 含 0.5mg 的溶液 , 作为对照品溶液。照薄
层色谱法(中国药典 2005 年版一部附录Ⅵ B)〔1〕试验:吸取两
种供试品溶液和橙皮苷对照品及柚皮苷对照品溶液各 5μL ,
分别点于同一用 0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板
上 , 以醋酸乙酯-甲醇-水(30∶5∶4)为展开剂 , 展开约 5cm , 取
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海峡药学　2009年　第 21卷 第 7期
出 ,晾干 ,再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层溶
液为展开剂 ,展至约 15cm ,取出 , 晾干 ,喷以三氯化铝试液 ,置
紫外光灯(365nm)下检视。结果(见图 1), 发现供试品色谱
中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 , 显相同颜色的荧光斑
点 ,但色谱中供试品与对照品的主斑点离基线太近。通过调
整展开距离 , Rf值符合要求 , 但橙皮苷对照品和柚皮苷对照
品的分离度太小 ,故需要更换展开剂。方法调整至以硅胶 G
薄层板为展开介质 ,以乙酸乙脂∶甲酸∶水-10∶2∶3的上层液为
展开剂展开时效果较好 ,结果(见图 2),可以明显的看到柚皮
苷对照品所显示的点与药材对应良好 , 而橙皮苷对照品所显
示的点无法与药材所显示的点对应。故可以初步判断枸橘中
只含有柚皮苷而不含有橙皮苷。
吸取上述两种溶液及辛弗林对照溶液各 5μL , 分别点于
同一以含 0.5%氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的
硅胶 G薄层板上 , 以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)的上层溶液为
展开剂 ,展开 , 取出 ,晾干 , 喷以 2%茚三酮乙醇溶液 ,在 105℃
加热至斑点显色清晰。结果显示对照品色谱显色清晰 , 而供
试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 , 斑点不明显 , 加
大点样量以后结果(见图 3), 斑点仍不清晰 , 故可初步判断枸
橘药材中不含有辛弗林。
图 1　1 、4为柚皮苷对照 , 2 、
3为 1#样 , 5 、6为 2#样
图 2　1 、2、3为 1#样 , 10 、11、
12为 2#样, 4 、5、6为柚皮苷
对照 ,7 、8、9为橙皮苷对照
图 3　1 、5 、9为辛弗林对照 , 2 、3 、
4为周至产药材的提取物(超声
提取 30min), 6 、7 、8为长安产药
材的提取物(超声提取 30min),
10 、11 、12为周至产药材的提取
物(回流提取 30min)
4　含量测定　照高效液相色
谱法(附录 VID)〔1〕测定。
4.1　色谱条件〔2〕　以十八烷
基硅烷键合硅胶为填充剂;以
甲醇∶醋酸∶水 35∶4∶61 为流
动相 , 流速为 1.0m L·min-1 ,
柱 温 40℃, 检 测 波 长 为
283nm。
4.2　对照品溶液的制备〔3〕　
精密称取干燥至恒重的柚皮
苷对照品 5mg , 置于 10mL 的
容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 使
全部溶解 , 摇匀 , 得到 200μg·
m L-1的柚皮苷对照溶液。
4.3　线性关系考察试验　从柚皮苷对照溶液中分别吸取1
m L , 2mL , 2.5mL , 4mL , 5mL 分别置于 10mL 量瓶中 , 加甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 , 所得 5 份溶液的浓度分别为 20μg·mL-1 ,
40μg·m L-1 , 50μg·mL-1 , 80μg·mL-1 , 100μg·mL -1。以柚皮
苷色谱峰面积(Y)为纵坐标 , 对照品浓度(X)为横坐标 ,绘制
标准曲线并进行线性回归(见图 5), 得回归方程:y=8723.1x
+2820.6 , r=0.9993。表明柚皮苷在 20～ 100μg 范围内具良
好的线性关系。
4.4　稳定性试验　取同一样品溶液 , 按含量测定项下 ,分别
于0 、2 、4 、8 、12 小时进样 , 连续测定 5 次 ,每次 10μL ,实验表明
12h 内稳定 , RSD 为 2.1%。
4.5　精密度试验　按拟定的含量测定方法 , 用同一批品(周
至)分别制备供试液 ,按上述色谱条件 , 重复进样 5 次 ,测得平
均峰面积积分值为 446484.3755 , RSD(%)值为 0.17%, 柚皮
苷对 照(50μg · mL-1)测得 的平 均峰 面 积积 分值 为
468141.5785。
4.6　重复性试验　按拟定的含量测定方法 , 用同一批品(周
至)分别制备供试液 , 测得含量的 RSD(%)值为 0.30%(n=
6), 结果表明本法重现性较好。
4.7　回收率试验　采用加样回收法 ,精密称取已知含量的样
品适量 , 分别精密加入一定量的柚皮苷对照品 , 按供试品制备
与测定方法 , 在上述色谱条件下 , 平行做 6 组 ,结果(见表 1)。
表 1　柚皮苷回收率试验结果
编号 样品中柚皮苷的量(g) 加入量(g) 测得量(mg) 回收率/ % 平均回收率/ % RSD(%)
1 0.6873 0.7000 1.3892 100.3
2 0.6735 0.7000 1.3710 99.6
3 0.7367 0.7000 1.4193 97.5
4 0.7283 0.6000 1.3205 98.7 99.8 1.53
5 0.6810 0.6600 1.3518 101.6
6 0.7321 0.7300 1.4701 101.1
图 4　柚皮苷对照品液相图谱
A 柚皮苷对照品液相图　B样品液相图
4.8　供试品溶液的制备〔4〕　取本品粉末约0.15g , 精密称定 ,
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 21 No.7 2009
置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 25m L , 称定重量 , 加热回流
1.5h ,放冷 , 再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 ,
过 0.45μm 微孔滤膜 ,即得。
柚皮苷含量测定　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 , 即得 ,测定结果(见表 2)。
表 2　柚皮苷含量测定结果
产地 柚皮苷含量(mg·g -1)
周至 1 9.52
周至 2 8.98
周至 3 9.37
长安 1 4.51
长安 2 4.20
长安 3 3.68
4　讨论
4.1　有关文献〔3 , 4〕曾对绿衣枳壳中柚皮苷 、枳壳中柚皮苷成
分进行测定。本文就“超声回流 、回流提取”二种提取方法 、回
流时间的比较 ,结果显示以甲醇回流提取 1.5h 为佳 ,灵敏度
高 , 重现性好 ,可用于枸橘的质量控制。
4.2　根据资料显示 ,枸橘中可能含有 3 种主要的成分 ,包括
橙皮苷 , 辛弗林和柚皮苷 , 以此 3 种标准品溶液为对照 ,用薄
层的方法进行鉴别 , 可以发现枸橘中确实含有柚皮苷 , 而不能
确定是否含有橙皮苷和辛弗林。但在后面的含量测定中 , 可
以通过更为灵敏的高效液相色谱法证明薄层色谱的鉴别结果
是否正确。通过本实验的结果可以看到 ,薄层鉴别的结果完
全正确 , 而且薄层图谱符合薄层色谱鉴别的要求 , 说明该方法
切实可行 , 可以作为参照的标准方法 , 用于枸橘的质量控制。
参考文献
〔1〕国家药典委员会编.《中国药典》2005版一部〔S〕.北京:化学工业
出版社 , 2005 ,附录 Ⅵ B ,附录Ⅸ H ,附录Ⅸ K ,附录Ⅹ A ,附录 Ⅵ D.
〔2〕赵清 ,解世权 ,贾天柱 ,等.高效液相色谱法测定伤痛舒片中柚皮
苷的含量〔J〕.辽宁中医学院学报, 2006 , 8(2):108-109.
〔3〕潘馨.绿衣枳壳中柚皮苷含量测定方法的研究〔J〕.中南药学 ,
2005 , 3(2):82-84.
〔4〕崔宇宏 ,常海萍 ,史宪海 ,等.枳壳中柚皮苷含量测定方法的改进
〔J〕.中国药品标准 , 2005 , 6(1)(总 46):46-48.
RP-HPLC法同时分析蜂房中槲皮素 、山萘酚 、木犀草素 、芹菜素
王锦军1 ,张秀梅2 ,张　冕1 ,罗　磊1(1.湖北荆楚理工学院药物研究所 荆门 448000;2.荆门市第二人民医院
荆门 448000)
摘要:目的　建立蜂房中槲皮素 、山萘酚 、木犀草素 、芹菜素含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法 ,色谱柱 ZORBAX SB-C18(150＊4.6mm ,
5μm);检测波长 360nm ;甲醇-0.2%磷酸(45∶55)为流动相;柱温 30℃;流速 1.0m L·min-1。槲皮素 、山萘酚 、木犀草素 、芹菜素理论板数分别大
于 5000 、6000 、6000 、7000;四种化合物的分离度均大于 1.5。结果　槲皮素 、山萘酚 、木犀草素 、芹菜素回归曲线分别为 Y=1504.412X+
9.9756 , Y=1991.745X+8.6051 , Y=567.591X+2.5397 , Y=1811.803X+0.3074 ,在 5.5216×10-2 ～ 19.3256×10-2μg·mL -1 、4.608×10-2
～ 16.128×10-2μg·mL-1、12.5504×10-2 ～ 43.9264×10-2μg·mL -1 、6.0288×10-2 ～ 21.1008×10-2μg·mL -1范围内线性关系良好 ,相关系数
r 0.99992～ 0.99998 ,槲皮素 、山萘酚的加样回收率分别为 95.7%、96.9%, RSD 分别为 2.99%、1.89%。样品分别含槲皮素 、山萘酚 、木犀草素 、
芹菜素 0.2204 、0.9175 、0.0 、0.0mg·g -1。结论　本法为蜂房提供了分析黄酮化合物方法 ,该法简便可行 ,重复性好 , 数据及结果可靠。 蜂房中
富含槲皮素 、山萘酚值得进一步研究。
关键词:蜂房;槲皮素;山萘酚;木犀草素;芹菜素;含量测定;反相高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2009)-07-0076-04
作者简介:王锦军 ,男(1963.11-),硕士研究生 ,高级工程师 ,天然产物化学 , E-mail:w jinjun40@tom.com
Simultaneously determinat ion of flavonoids in Nidus vespae.by Rp-HPLC
method
WANGJin-jun1 ,ZHANGXiu-mei2 ,ZHANGMian1 ,LUO Lei1(1.The Inst itute of drug research Jingchu university of
technology Jingmen 448000 China;2.The Second people s hospital of Jingmen City ,Jingmen 448000 ,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Rp-HPLC method w as developed for analyse of quercetin , kaempferol , luteolin and
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海峡药学　2009年　第 21卷 第 7期