免费文献传递   相关文献

金刚藤有效部位群对慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织炎症介质的影响



全 文 :3 瞻前顾后 讲“长”也要“好”
恶性骨肿瘤的中医理论尚不完善,需要紧密结合
现代科技手段如影像学、解剖检查、病理组织学检查、
血管介入造影技术、分子代谢技术等,对疾病本质充分
认识,综合指导临床,制定最为个体化的中西医结合方
案,积极采取有效手段干预肿瘤的进展,提高患者生活
质量,延长患者生命时间。我们追求的治疗目标是
“既让患者活的长,还要患者活的好”。
中医药与现代疗法相结合,可减轻放疗、化疗及核
素治疗中的毒性反应,延长疼痛缓解期。恶性骨肿瘤
是本虚标实之证,通过辨证施治可以很好的改善患者
的免疫机能,提高抗癌能力,并可减少化疗、放疗的副
作用,从而保证了疗效。中医药的优势在于既可抗癌,
又可以很好地改善患者的免疫功能,提高抗病能力,减
少止痛药物的用量或者减轻止痛药物的不良反应,并
可减少放、化疗的毒副作用,明显改善晚期患者的生存
质量。非常符合我们“既让患者活的长,还要患者活
的好”的目标。
收稿日期:2010 - 11 - 29
基金项目:国家自然科学基金(30870256)
作者简介:黄显章(1977 -) ,男,河南南阳人,讲师,博士研究生,研究方
向:中药及复方物质基础。
通讯作者:刘焱文,博士生导师,教授,E - mail:ywliu@ public. wh. hb.
cn。
那么如何发挥中医药的优势呢,从经典中找灵感,从现
代的科技中找支架,形成独特的一个综合诊疗及预防
模式是一条可以探求的路。如《灵枢·官能》说:“法
于往古,验于来今,观于窈冥,通于无穷”,笔者认为这
种瞻前顾后,法古取今的办法是可取的。王新华等[4]
在对《内经》“阴阳”理论进行研究、提炼和现代诠释的
基础上,以蕴涵在《内经》中的“阴阳时空整体系统论”
为指导,采用“中体西用”的中西医结合探索模式,同
时结合最近几年中外有关恶性肿瘤防治领域的新成
果,尝试性提出“阴阳失衡”理论,探讨了肿瘤防治的
方向问题,认为对癌细胞的“打和杀”及对自身免疫力
的“调、和”是阴阳整体系统一个治疗肿瘤的模式,吾
是认同的。中医药治疗癌症的路还很长,希望在不久
的将来,我们有更多的新成果出来,和世界一起攻克癌
症这个难题。
参考文献
[1] 凌耀星,吴士延,施晓芬,等.应用《内经》理论治疗癌庭的临证体
会[J].上海中医药大学学报,2005,19(3) :3.
[2] 古建立,李东升,郭建刚,等.化岩胶囊对 S180 荷瘤小鼠免疫功能
的影响[J].新中医,2002,34:63 - 64.
[3] 古建立,张志勇,郭建刚,等.化岩胶囊对小鼠 S180 肉瘤的抑制作
用[J].辽宁中医杂志,2001,28:254.
[4] 王新华,张莽,乔俊红,等.从对《内经》“阴阳”理论总结中管窥肿
瘤防治探索的方向[J]. 现代中西医结合杂志,2004,13(20) :
2667 - 2668.
金刚藤有效部位群对慢性盆腔炎
模型大鼠子宫组织炎症介质的影响
黄显章1,2,汪鋆植3,昝俊峰1,刘焱文1
(1. 湖北中医药大学资源与复方教育部省部共建重点实验室,湖北 武汉 430061;
2. 南阳理工学院张仲景国医学院,河南 南阳 473004;
3.三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室,湖北 宜昌 443002)
摘 要:目的:通过研究金刚藤有效部位群对慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织中炎症介质(PGE2、组胺和 5 -羟色胺)
的影响,探讨金刚藤有效部位群的抗炎作用机理。方法:用苯酚胶浆注入大鼠子宫造成大鼠慢性盆腔炎模型,给药后用
酶联免疫法检测大鼠子宫组织中 PGE2 的含量,用荧光法测定大鼠子宫组织中组胺和 5 -羟色胺的含量。结果:金刚藤
有效部位群能够显著减少慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织中 PGE2、组胺和 5 -羟色胺的含量。结论:金刚藤有效部位群抑
制 PGE2、组胺和 5 -羟色胺等炎症介质的合成及释放是其发挥抗炎作用的机理之一。
关键词:金刚藤;有效部位群;慢性盆腔炎;炎症介质
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1000 - 1719(2011)07 - 1334 - 03
Effect of Jingangteng's Effective Ingredients on Inflammatory
Media in Uterus of Chronic Pelvic Inflammation Rats
HUANG Xian-zhang1,2,WANG Jun-zhi3,ZHAN Jun-feng1,LIU Yan-wen1
(1. Key Laboratory of Resources and Compound Preseription of Traditional Chinese Medicine,
Ministry of Education,Hubei College of TCM,Wuhan 430061,Hubei,China;
2. Zhang Zhong - jing Traditional Chinese Medicine College,Nangyang University of Technology,Nanyang 473004,Henan,China;
3. Hubei Key Laboratory of Natural Products Research and Development,Three Gorges University,Yichang 443002,Hubei,China)
Abstract:Objective:To study the anti - inflammation mechanism of Jingangteng's effective ingredients(JGTEI)by assaying
·4331· 辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 7 期
DOI:10.13192/j.ljtcm.2011.07.88.huangxzh.076
the prostaglandin E2(PGE2) ,5 - hydroxytrptamine(5 - HT)and histamine(HA)in uterus of chronic pelvic inflammation rats.
Methods:The models of chronic pelvic inflammation disease(CPID)rats were made by injection of brei admixed with Phenol and
tragacanth into the uterus of rats,the PGE2,5 - HT and HA contents in the uterus of CPID rats were measured by enzyme - linked
immunosorbent assay(ELISA)and fluorescence spectrophotometry. Results:JGTEI can significantly decrease the level of PGE2,5
- HT and HA in the uterus of CPID rats. Conclusion:Decreasing the level of inflammatory media may be one of the anti - inflam-
mation mechanisms of JGTEI.
Key words:Jingangteng;Effective ingredients;Chronic Pelvic inflammation;Inflammatory media
金刚藤为百合科(Liliaceae)植物菝葜 Smilax china
L. 的干燥根茎,具有祛风利湿,解毒散瘀的功效[1]。
以金刚藤药材为原料制成的金刚藤制剂临床主要用于
治疗慢性盆腔炎、附件炎等妇科炎症,疗效显著。本实
验室已对金刚藤的抗炎物质基础进行了系统的实验研
究,并采用大孔吸附树脂纯化技术,获得了主要含有黄
酮、皂苷和鞣质等成分的抗炎有效部位群,其含量达
75%以上[2]。本文从炎症介质方面对其进行药理学研
究,以探讨其抗炎镇痛作用机理。
1 试验材料
1. 1 药物
金刚藤有效部位群:金刚藤药材经乙醇提取后用
大孔吸附树脂纯化制得,为棕红色粉末,其黄酮、皂苷
和鞣质含量达 75%以上(其中总黄酮含量达 33. 1%以
上,总皂苷含量达 13. 9%以上,总鞣质含量达 29. 1%
以上)。试验时用蒸馏水碾磨混悬均匀,配成实验所
需浓度的溶液。
金刚藤胶囊:湖北福人药业股份有限公司提供,批
号 090329;试验时取出内容物以蒸馏水配成所需浓度
的溶液。
1. 2 动物
Wistar种大鼠,体重(200 ± 20)g,SPF 级,合格证
号为 00002514,由湖北省实验动物中心提供,许可证
号为 SCXK(鄂)2008 - 0005。
1. 3 试药
25%苯酚胶浆(液化苯酚 5mL,西黄耆胶 1g,甘油
4mL,加蒸馏水至 20mL研磨配制) ;戊巴比妥钠(中国
医药集团上海化学试剂公司,批号 F20090405) ;苯酚
(国药集团化学试剂有限公司,批号 20081021) ;西黄
耆胶(国药集团化学试剂有限公司,批号 20090304) ;
甘油(国药集团化学试剂有限公司,批号 20080508) ;
硫酸庆大霉素(石家庄市康达制药厂,批号 090206) ;
邻苯二甲醛(北京金龙化学试剂有限公司,批号
20081204) ;正庚烷(天津市科密欧化学试剂有限公
司,批号 20090110) ;PGE2ELISA试剂盒(ADL公司,批
号 10 - 0301) ;其余试剂为市售分析纯。
1. 4 仪器
多功能荧光酶标仪(德国 Tecan 公司) ;BS110S 分
析天平(德国 sartorius公司)。
2 试验方法
2. 1 大鼠慢性盆腔炎模型的复制[3]
取 Wistar雌性大鼠 60 只,禁食不禁水 24h,3%戊
巴比妥钠 50mg·kg -1腹腔麻醉后,剪去下腹正中毛,
常规消毒,于下腹部正中切口 3cm,暴露子宫,用 4 号
头皮针头在子宫分叉处右侧方向进针,缓缓注入 25%
苯酚胶浆 0. 1mL,逐层关腹,用硫酸庆大霉素消毒术区
后用消毒纱布覆盖;保留 10 只仅进行开腹和关腹手
术,未注射苯酚胶浆造模,作为假手术对照组。
2. 2 分组及给药
造模后第 7 天将造模大鼠按体重随机分为模型
组、金刚藤胶囊组、金刚藤有效部位群高、中、低剂量
组,每组 10 只;灌胃给药(灌胃体积为 1mL·100g -1) ,
金刚藤胶囊组、金刚藤有效部位群组分别给予金刚藤
胶囊和金刚藤有效部位群药液,假手术组和模型组同
法予以等量生理盐水,每日 1 次,连续 14 天。
2. 3 取材及组织匀浆的制备[4]
连续灌胃给药 14 天后,于末次给药 24h 后,将各
组大鼠以 3%戊巴比妥钠 50mg·kg -1腹腔麻醉,剪取
子宫,剔除脂肪、系膜等组织,精确称量,放微型匀浆器
中,加无水乙醇 0. 8mL,轻研磨,再加生理盐水 3. 2mL,
研磨制成组织匀浆,3000r /min,4℃离心 10min,分离取
上清,分装置 - 70℃保存。
2. 4 炎症介质的检测
2. 4. 1 子宫组织中 PGE2 含量的测定 取上清液,采
用酶联免疫法按照试剂盒说明书方法测定组织中
PGE2 的含量。
2. 4. 2 子宫组织中组胺含量的测定 使用荧光法测
定大鼠子宫组织中组胺含量[5]。取上清液 2mL,加
5moL·L -1NaOH溶液 0. 25mL,NaCl 1g,正丁醇 5mL,
振荡 5min。3000rpm离心 10min,取正丁醇层 4mL,加
入 0. 1moL·L -1 HCl 4. 25mL,振荡 5min。3000rpm 离
心 10min,取 HCl 层 3mL,加 1mol· L -1 NaOH 溶液
0. 9mL,0. 2%邻苯二甲醛甲醇溶液 0. 15mL,冰浴中反
应 40min。取出加 2mol·L -1柠檬酸 0. 45mL。在激发
波长 360nm,荧光波长 440nm处测定荧光值。
2. 4. 3 子宫组织中 5 - HT含量的测定 使用荧光法
测定大鼠子宫组织中 5 - HT 含量[6]。取上清液
1. 5mL,加入到盛有 1. 5gNaCl 的试管内,加入 3. 5mL
的酸性正丁醇,振荡 10min,取正丁醇相 2. 5mL,加入
正庚烷 5. 0mL和 0. 1moL·L -1HCl1. 0mL,振荡 10min,
取水相 0. 4mL加入 0. 5%半胱氨酸 0. 1mL和 0. 008%
邻苯二甲醛 - 10M 盐酸溶液 2. 5mL,置于沸水浴中反
应 10min,冷却。在激发波长 355nm,荧光波长 475nm
处测定荧光值。
2. 5 数据处理
运用 SPSS 11. 0 统计软件进行数据统计分析,数
值采用 珋x ± s 表达,显著性检验采用单侧 t 检验,P≤
0. 05 或 P≤0. 01 认为具有统计学意义。
3 实验结果
3. 1 金刚藤有效部位群对模型大鼠子宫组织中 PGE2
含量的影响
由实验结果可知,苯酚胶浆所致 CPID 模型组大
鼠与假手术组相比较,模型组大鼠子宫组织中 PGE2
的含量显著升高(P < 0. 01) ;金刚藤胶囊组与模型对
·5331·辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 7 期
照组相比较,大鼠子宫组织中 PGE2 的含量有所降低
(P < 0. 05) ,说明造模成功。金刚藤有效部位群的低
剂量组与模型对照组相比较,其差别没有统计学意义
(P > 0. 05) ;而金刚藤有效部位群的中、高剂量组与模
型对照组相比较,大鼠子宫组织中 PGE2 的含量均降
低,差别有显著性(P < 0. 05 或 P < 0. 01) ;提示金刚藤
有效部位群通过抑制大鼠子宫组织中 PGE2 的合成或
释放而发挥抗炎作用。结果见表 1。
表 1 金刚藤有效部位群对 CPID模型大鼠子宫组织中
PGE2 含量的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
相当于原药材剂
量 /(g·kg -1·d -1)
PGE2 /(ng·g - 1)
假手术对照组(生理盐水) - 16. 58 + 1. 61
CPID模型组(生理盐水) - 21. 29 + 1. 94△△
金刚藤胶囊 10. 5 19. 25 + 1. 70*
有效部位群 5. 25 20. 13 + 1. 62
10. 5 19. 15 + 1. 76*
21. 0 18. 58 + 2. 00**
注:与假手术组比较,△△P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05,*
*P < 0. 01。
3. 2 金刚藤有效部位群对模型大鼠子宫组织中组胺
含量的影响
由实验结果可知,苯酚胶浆所致 CPID 模型组大
鼠与假手术组相比较,模型组大鼠子宫组织中组胺的
含量显著升高(P < 0. 01) ;金刚藤胶囊组与模型对照
组相比较,大鼠子宫组织中组胺的含量降低,差别有显
著性(P < 0. 05)。金刚藤有效部位群的低剂量组与模
型对照组相比较,大鼠子宫组织中组胺的含量差别没
有统计学意义(P > 0. 05) ;而金刚藤有效部位群的中、
高剂量组与模型对照组相比较,大鼠子宫组织中组胺
的含量均降低,差别有显著性(P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,
提示金刚藤有效部位群可通过抑制大鼠子宫组织中组
胺的合成或释放而发挥抗炎作用。结果见表 2。
表 2 金刚藤有效部位群对 CPID模型大鼠子宫组织中
组胺含量的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
相当于原药材剂
量 /(g·kg -1·d -1)
荧光值
假手术对照组(生理盐水) - 214. 66 + 17. 11
CPID模型组(生理盐水) - 263. 00 + 21. 19△△
金刚藤胶囊 10. 5 246. 50 + 11. 74*
有效部位群 5. 25 257. 94 + 25. 11
10. 5 244. 41 + 14. 00*
21. 0 229. 50 + 21. 97**
注:与假手术组比较,△△P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05,*
*P < 0. 01。
3. 3 金刚藤有效部位群对模型大鼠子宫组织中 5 -
HT含量的影响
由实验结果可知,苯酚胶浆所致 CPID 模型组大
鼠与假手术组相比较,模型组大鼠子宫组织中 5 - HT
的含量显著升高(P < 0. 01) ;金刚藤胶囊组与模型对
照组相比较,大鼠子宫组织中 5 - HT 的含量降低,差
别有显著性(P < 0. 05)。金刚藤有效部位群的低、中、
高剂量组与模型对照组相比较,大鼠子宫组织中组胺
的含量均降低,差别有显著性(P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,
提示金刚藤有效部位群亦可通过抑制大鼠子宫组织中
5 - HT的合成或释放而发挥抗炎作用。结果见表 3。
表 3 金刚藤有效部位群对 CPID模型大鼠子宫组织中
5 - HT含量的影响(n = 10,珋x ± s)
组别
相当于原药材剂
量(g·kg -1·d -1)
荧光值
假手术对照组(生理盐水) - 298. 25 + 8. 40
CPID模型组(生理盐水) - 328. 66 + 13. 12△△
金刚藤胶囊 10. 5 313. 47 + 16. 28*
有效部位群 5. 25 316. 04 + 13. 02*
10. 5 305. 06 + 17. 14**
21. 0 303. 38 + 16. 48**
注:与假手术组比较,△△P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05,*
*P < 0. 01。
4 讨 论
目前中药治疗慢性盆腔炎作用机理的研究主要集
中在对血液流变学的影响[7]、对机体免疫功能的影响
及对细胞因子的影响[8]等方面。本研究从抗炎镇痛角
度探讨金刚藤有效部位群治疗慢性盆腔炎的作用机
理,采用苯酚胶浆注入大鼠子宫造成大鼠慢性盆腔炎
模型,采用酶联免疫法和荧光法检测模型大鼠子宫组
织中炎症介质 PGE2、组胺和 5 -羟色胺的含量。研究
结果表明,金刚藤有效部位群能够显著降低慢性盆腔
炎模型大鼠子宫组织中 PGE2、组胺和 5 -羟色胺的含
量,说明金刚藤有效部位群抑制 PGE2、组胺和 5 -羟
色胺等炎症介质的合成与释放是其抗炎镇痛作用的机
理之一。
本研究采用文献方法[3],向大鼠子宫注射苯酚胶
浆 0. 05mL造成大鼠慢性盆腔炎模型,但经病理切片
观察,所致炎症不十分明显,可能与实验动物个体差异
及实验环境等因素有关。经过预试,认为向大鼠子宫
注射苯酚胶浆 0. 1mL致炎效果较为理想。
本实验室前期研究中已采用现代大孔吸附树脂纯
化技术获得金刚藤有效部位群(黄酮、皂苷和鞣质含
量达 75%以上) ,并经药效学研究表明,金刚藤有效部
位群为其主要作用物质基础[9]。本研究是在前期研究
的基础上,从对炎症介质的影响方面探讨金刚藤有效
部位群抗炎镇痛的作用机理,为将其二次开发为物质
基础明确、作用机理清楚的现代中药制剂提供了科学
依据。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[S]. 北京:化学工
业出版社,2005:216.
[2] 刘焱文,干国平,孙 进.菝葜有效成分及其提取方法[P]. 中国专
利:CN101401896,2009 - 04 - 08.
[3] 陈颖异,何晓文,肖振宇.舒康汤对慢性盆腔炎大鼠血液流变学影
响的实验研究[J].中国中医药科技,2003,10(2) :128.
[4] 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学[M]. 3 版. 北京:人民卫
生出版社,2002:883 - 885.
[5] 杨东旭,何克勤,程桂芳,等. 特里杨甙对过敏性慢反应物质和组
胺的拮抗作用[J].药学学报,1995,30(4) :254.
[6] 孙曼雯,郗宏钊,荣康泰,等. 皮下渗出物中 5 羟色胺及组织胺含
量荧光测定法[J].军事医学科学院院刊,1984,5:593.
[7] 王琪,汪家双.中药三联疗法治疗慢性盆腔炎疗效观察及对血液
流变学影响的研究[J].成都中医药大学学报,2009,32(3) :26.
[8] 李莉,卢如玲,林兴栋. 盆炎康合剂对慢性盆腔炎患者 HSP60 抗
体及细胞因子的影响[J].辽宁中医杂志,2006,33(8) :967.
[9] 孙进.金刚藤活性部位群提取纯化工艺及其血清药化研究[D].
武汉:湖北中医学院,2009.
·6331· 辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 7 期