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HPLC法测定不同产地苦瓜根中苦瓜皂苷的含量



全 文 :China Pharmacy 2012Vol.23No.19 中国药房 2012年第23卷第19期
苦瓜Momordica charantia L.为葫芦科苦瓜属植物,果实
为常见蔬菜。苦瓜的入药历史十分悠久,在亚洲许多国家和
地区均有入药记载,具有明显的降血糖、抗肿瘤、杀精和堕胎
等药理作用[1]。苦瓜皂苷是苦瓜中有效成分之一,具有较高的
药用和保健价值[2]。笔者通过对湖北十堰地区民间用药调查,
发现用苦瓜根粉预防及治疗糖尿病,临床效果较好,可见以苦
瓜根为君药的民间药方具有潜在的开发价值。鉴于此,本试
验采用高效液相色谱(HPLC)法测定不同产地苦瓜根中苦瓜
皂苷的含量,为苦瓜植物的深入开发和综合利用提供参考依
据。
1 仪器与试药
UltiMateTM3000型HPLC仪,包括四元梯度泵、自动进样
器、柱温箱、紫外检测器、变色龙(Chromeleon)软件数据处理系
统(美国戴安公司);AUW120D分析天平(日本岛津公司);电
热恒温水箱(北京市长风仪器仪表公司);UP5200HE超声波清
洗器(功率:100W,超声频率:40kHz,熊猫集团南京电子计量
有限公司)。
苦瓜根均系市场采购(来源见表1),经湖北中医药大学中
药资源教研室陈科力教授鉴定为真品。苦瓜皂苷标准品(三
峡大学湖北省天然产物开发与利用重点实验室自制,含量:
98.0%);水为超纯水,甲醇为色谱纯,无水乙醇、正丁醇均为分
析纯。
表1 苦瓜根的来源
Tab 1 Source of the root of M. charantia
编号
1
2
3
4
5
产地
湖北竹溪县县城
湖北竹溪县水坪镇
湖北房县红塔乡
湖北房县土城镇
湖北房县大木镇
编号
6
7
8
9
10
产地
湖北丹江口市城关镇
湖北丹江口市六里坪镇
湖北郧县城关镇
湖北郧西县县城
湖北十堰城区
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Gemini C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:水-
甲醇(45∶55);柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1;检测波长:205
nm[3];进样量:10μL。色谱见图1。
2.2 标准品溶液的制备
精密称取苦瓜皂苷标准品25. 0mg,置于25mL容量瓶
中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,即得。
2.3 供试品溶液的制备
*副主任药师,副教授,博士研究生。研究方向:中药研发与质量
控制。电话:0719-8801157。E-mail:chenli0201@sina.com
#通讯作者:主任药师,副教授,博士研究生。研究方向:中药研
发与质量控制。电话:0719-8801157。E-mail:taihe0719@163.com
HPLC法测定不同产地苦瓜根中苦瓜皂苷的含量
陈 黎*,陈 林 #,申德堰,何秀丽,方建敏(湖北医药学院附属太和医院药学部,湖北十堰 442000)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001- 408(2012)19-1784-02
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012. 9.24
摘 要 目的:建立测定不同产地苦瓜根中苦瓜皂苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Gemini C18(250
mm×4.6mm,5μm),流动相为水-甲醇(45∶55),流速为1.0mL·min-1,检测波长为205nm,进样量为10μL。结果:苦瓜皂苷的检
测浓度在0.051~1.020mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9998);平均加样回收率为99.38%,RSD=
1.99%(n=6)。结论:不同产地苦瓜根中苦瓜皂苷的含量有较大差别,可用此法较好地评价该品种的质量。
关键词 苦瓜根;苦瓜皂苷;高效液相色谱法;含量测定
Content Determination of Saponins in the Root of Momordica charantia from Different Areas by HPLC
CHEN Li,CHEN Lin,SHEN De-yan,HE Xiu-li,FANG Jian-min(Dept. of Pharmacy,The Affiliated Taihe Hos-
pital of Hubei Medical University,Hubei Shiyan 442000,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To determine the content of saponins in the root of Momordica charantia from different areas. METH-
ODS:HPLC method was adopted. The determination was performed on Gemini C18(250mm×4.6mm,5μm)column with mobile
phase consisted of water-methanol(45∶55)at the flow rate of 1.0mL·min-1. The detection wavelength was set at 205nm,and the
injection volume was 10μL. RESULTS:The linear range of saponins was 0.051~1.020mg·mL-1(r=0.9998)with an average re-
covery of 99.38%(RSD=1.99%,n=6). CONCLUSION:The content of saponins in the root of M. charantia from different areas
varies greatly,and the method can be used for quality evaluation of the species.
KEY WORDS The root of Momordica charantia;Saponins;HPLC;Content determination
0 102030405060
t/min
A
0 102030405060
t/min
B
0 102030405060
t/min
C
图1 高效液相色谱图
A.苦瓜根样品;B.苦瓜皂苷标准品;C.空白溶剂
Fig 1 HPLC chromatograms
A.the root of M. charantia;B.saponins standard substance;C.blank sol-
vent
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中国药房 2012年第23卷第19期 China Pharmacy 2012Vol.23No.19
取不同产地的苦瓜根细粉约2g,精密称定,置圆底烧瓶
中,加60%乙醇50mL,回流提取2次,分别提取2、1h,回收乙
醇至无醇味,得浸膏,用水饱和的正丁醇萃取3次,用量分别为
30、20、20mL,回收正丁醇至无醇味,得浸膏,用甲醇溶解并定
容至25mL容量瓶中[4],即得。
2.4 线性关系考察
分别精密量取苦瓜皂苷标准品溶液(1.02mg·mL-1)0.5、
1.0、2.0、5.0、10. mL,置10mL量瓶中,加流动相定容,制成浓
度分别为0.051、0.102、0.204、0.510、1.020mg·mL-1的苦瓜皂
苷标准品溶液。分别取各浓度溶液10μL,注入液相色谱仪,
测定峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标,峰面积积分值
(Y)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为 Y=1.7504X-
0.3545(r=0.9998,n=5)。结果表明,苦瓜皂苷的检测浓度在
0.051~1.020mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性
关系。
2.5 精密度试验
取苦瓜皂苷标准品溶液10μL,按“2.1”项下色谱条件重复
进样5次,记录峰面积。结果,RSD=1.67%(n=5),表明仪器
精密度良好。
2.6 稳定性试验
取1号供试品溶液适量,按“2.1”项下色谱条件分别于0、
4、8、12、24h测定峰面积。结果,RSD=1.77%(n=5),表明供
试品溶液在24h内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取8号苦瓜根细粉适量,共6份,分别按“2.3”项下
方法制备供试品溶液,分别进样10μL,测定苦瓜皂苷的含
量。结果,苦瓜皂苷的平均含量为1.13%,RSD=1.73%(n=
6),表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的8号样品约0.1g(苦瓜皂苷含量为1.14%),
共6份,分别精密加入苦瓜皂苷标准品溶液1mL,按“2.3”项下
方法制备供试品溶液,进样10μL,测定峰面积,计算苦瓜皂苷
的含量和加样回收率,结果见表2。
表2 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 2 Results of recovery tests(n=6)
称样量/g
0.098 89
0.098 72
0.098 29
0.097 56
0.096 25
0.102 30
样品含量/mg
1.127
1.125
1.121
1.112
1.097
1.166
加入量/mg
1.02
1.02
1.02
1.02
1.02
1.02
测得量/mg
2.16
2.11
2.13
2.12
2.13
2.16
回收率/%
101.3
96.6
98.9
98.8
101.3
97.5
x/%
99.38
RSD/%
1.99
2.9 样品含量测定
分别精密吸取标准品溶液与供试品溶液各10μL,注入液
相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件测定样品中苦瓜皂苷的含量,
结果见表3。
表3 样品含量测定结果
Tab 3 Results of content determination of samples
编号
1
2
3
4
5
含量/%
0.97
1.28
1.22
0.70
1.30
编号
6
7
8
9
10
含量%
0.91
1.20
1.14
1.28
0.44
3 讨论
由于市面上无法购到苦瓜皂苷标准品,因此本试验采用
自制的苦瓜皂苷标准品,试验结果显示重复性好、结果准确、
回收率高。
在供试品溶液的制备过程中[5],笔者比较了苦瓜根直接回
流提取和回流提取后经正丁醇萃取2种制备方法,分别进行了
含量测定,发现经过萃取后的供试品溶液中苦瓜皂苷的含量
高于直接回流提取的供试品。
笔者分别采用乙腈-水、甲醇-水等不同配比的流动相系统
进行试验,发现甲醇-水系统可获得较好的分离效果;进而尝试
了不同比例的甲醇-水流动相系统,发现甲醇∶水=55∶45时,
苦瓜根中各成分分离度较好。
试验结果表明,不同产地苦瓜根中苦瓜皂苷的含量差异
明显,其中苦瓜皂苷含量最高的为房县大木镇产苦瓜根(5
号),苦瓜皂苷含量达1.30%;含量最低的为十堰城区产苦瓜根
(10号),含量仅为0.44%。提示苦瓜根中苦瓜皂苷的含量与
药材的产地、生长环境、采收时间等因素具有相关性。
参考文献
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tial uses of Momordica charantia:a review[J]. J Ethno-
pharmacol,2004,93(1):123.
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酒中的苦瓜皂苷[J].食品科学,2007,28(7):438.
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[5] 雷 磊,王 兴.糖康胶囊质量标准研究[J].中国药房,
2008,19(6):449.
(收稿日期:2011-07-11修回日期:2012-01-09)
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