全 文 ：2008 No．17
Serial No．194 China Brewing Analysis and Examination
白苏不同部位中齐墩果酸和乌索酸的测定比较
邹盛勤 1，刘 霞 2
（1.江西省天然药物活性成分研究重点实验室宜春学院生物工程研究所，江西 宜春 336000；
2.宜春学院物理科学与工程技术学院，江西 宜春 336000）
摘 要：建立反相高效液相-光电二极管阵列检测器法（RP-HPLC-PAD）测定白苏叶、茎、根中的齐墩果酸和乌索酸，并对2种三萜酸
成分进行定性定量分析。采用Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-0.2 %磷酸溶液（90:10，v/v）为流动相进行等度洗
脱，流速0.8 mL/min，检测波长210 nm，柱温25℃。齐墩果酸在0.1248 μg~2.496μg、乌索酸在0.2184μg~4.368μg范围内具有良好的线性
关系，平均回收率分别为98.5%和101.3%。选定的色谱条件可精确的检测白苏不同部位中齐墩果酸和乌索酸的含量。
关 键 词：白苏；齐墩果酸；乌索酸；光电二极管阵列检测器；反相高效液相色谱
中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：0254－5071（2008）17-0066-03
Determination and comparison of oleanolic acid and ursolic acid in different parts of Perilla frutescens (L.) Britton
ZOU Shengqin1, LIU Xia2
(1. Key Laboratory of Jiangxi Province for Research on Active Ingredients in Natural Medicines, Bioengineering Research Institute of Yichun
University, Yichun 336000 China; 2. Institute of Physical Science and Technology , Yichun University, Yichun 336000 China)
Abstract: A determination method of oleanolic acid and ursolic acid in different parts of Pe rilla frutescens ( L . ) Britton was established by
reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) with photodiode array detector, and the qualitative and quantitative analysis for
two triterpene acids were further carried out. The method was carried on a Kromasil C18 column (4.6mm×250mm, 5μm) and equivalent elution was
achieved by methanol-0.2 % phosphoric acid solution (90:10，v/v) as the mobile phase. The flow rate was 0.8 mL/min and the detective wavelength
was 210 nm, the column temperature was 25℃. Under these conditions, the calibration curves of oleanolic acid and ursolic acid were linear within the
range from 0.1248μg to 2.496μg, 0.2148μg to 4.368μg, and the average recovery were 98.5% and 101.3%, respectively. The method can accurately
determine the contents of oleanolic acid and ursolic acid in different parts of P. frutescens (L.) Britton.
Key words: Perilla frutescens (L.) Britton; oleanolic acid; ursolic acid; photodiode array detector; RP-HPLC
白苏[Perilla frutescens (L.) Britton]为唇形花科紫苏属
植物，一年生草本，别名南苏、白紫苏、苏麻、山紫苏，分布
于河北至长江流域以南各地[1-2]。白苏富含紫苏酮、紫苏醛、
豆甾醇和挥发油等成分，其叶、根均可供药用，开发潜力巨
大[3-4]。白苏味辛、性温、无毒，具有显著的解热、止呕和抑菌
作用[5]，目前白苏化学成分研究的文献报道较少，主要集
中在挥发油、氨基酸、微量元素等方面[6-7]。本研究采用高效
液相色谱[8]分离了白苏不同部位中的齐墩果酸和乌索酸，
并进行了定性鉴别和定量分析，旨在为白苏的化学成分
研究和开发利用提供依据。
1 材料与仪器
1.1 仪器与试药
Waters Alliance系列高效液相色谱仪（515泵，手动进
样器，2996光电二级管矩阵检测器，柱温箱，Empower中
文色谱工作站）；超声清洗器（SK2510HP）：上海科导
超声仪器公司；分析天平（CP225D）：北京 Sartorius公司。
甲醇（色谱纯）：上海陆忠试剂厂；乙醇（分析纯）：江西
洪都生物化学有限公司；其他试剂为分析纯。
1.2 材料
齐墩果酸和乌索酸对照品（批号：110709- 200304，
110742-200314）：中国药品生物制品鉴定所；白苏：采自江
西省宜春市。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm，带保
护柱）；Waters 2996光电二极管阵列检测器；柱温 25℃；流
动相为甲醇 -0.2 %磷酸溶液（90:10，v/v）；检测波长 210nm；
流速 0.8mL/min。
2.2 样品溶液的制备
白苏不同部位样品干燥后粉碎，过 20目筛。精密称取
2g，置于具塞三角烧瓶中，加入 95%vol乙醇 40mL，超声
提取 60min，过滤，滤渣用乙醇洗涤 2次，合并滤液至
50mL容量瓶中，乙醇定容。滤液用微孔滤膜（0.45 μm）过
滤后进样。
2.3 定性分析
在选定的高效液相色谱条件下，对齐墩果酸和乌索酸
对照品溶液及样品溶液进行色谱分析（图 1），齐墩果酸
和乌索酸峰分离度为 1.92，对称因子均分别为 1 .02 和
收稿日期：2008-02-28
基金项目：国家“863”计划资助项目（2002AA2Z3217）
作者简介：邹盛勤（1970-），男，江西奉新人，副教授，主要从事天然药物成分提取与分析研究工作。
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中 国 酿 造
2008年 第 17期
总第 194期分析与检测
1.01，理论板数分别为 12766和 13627。色谱图中各物质的
保留时间、紫外光谱和峰纯度数据作为待测样品定性分
析的依据。
1.齐墩果酸，2.乌索酸
图 1 对照品（A）和样品（B）的 HPLC色谱图
Figure 1. HPLC chromatograms of reference (A) and samples (B)
2.4 齐墩果酸和乌索酸检测波长的确定
采用 PAD检测器在波长 190nm~600nm处扫描，对照
品中齐墩果酸和乌索酸在流动相中的最大吸收波长均为
202.2 nm，且紫外吸收光谱一致（图 2）。但由于流动相在
低波长处有较强的末端吸收，提取不同波长的色谱进行
比较，选择 210 nm为检测波长，可在消除流动相干扰时保
证较好的信噪比。
图 2 对照品（A）中齐墩果酸、乌索酸的紫外光谱图
Figure2.UVspectrasofoleanolicacidandursolicacid in the references
2.5 峰纯度的考察
峰纯度分析是将积分峰上每个数据点的光谱与峰顶
点光谱进行对照，分析色谱峰所有点的个别光谱图之间
的差异，计算出所有的光谱对照角，求其加权平均值（纯度
角）；同时，选定一段基线计算纯度噪音角与溶剂角之和
（阈值）。进行峰纯度分析时，纯度角和阈值角是平均所有
测量到的角度并加权吸收强度的结果，由 Empower软件
自动计算，并绘制纯度曲线和自动阈值曲线。当纯度角小
于阈值时，在测量的噪音内光谱是均匀的，为纯组分；当纯
度角大于阈值时，表示有共流出物存在。峰纯度分析条件：
检测波长 190nm~600nm，最小分辨率 1.2 nm，峰宽 30s，基
线噪音阈值 50μV·s，噪音间隔起止时间 0.25min~0.75min。
结果表明，对照品和样品中齐墩果酸、乌索酸峰的纯度角
均小于阈值，纯度图（图 3）中纯度线位于自动阈值线下
方，表明齐墩果酸和乌索酸色谱峰均为单一组分吸收峰，
无其他组分的干扰[9]。
图 3 白苏叶中齐墩果酸（A）和乌索酸（B）的峰纯度分析（210 nm）
Figure 3. Peak purity analysis of ursolic acid and oleanolic acid in the
leaves of Perilla frutescens (L.) Britton（210 nm）
2.6 线性关系考察
准确称取齐墩果酸对照品 3.12 mg和乌索酸对照品
5.46 mg，少量甲醇溶解后定容至 25 mL容量瓶中作为对
照品混合溶液。以 0.1248 mg/mL 齐墩果酸和 0.2184
mg/mL乌索酸的对照品混合溶液为样品，分别进样 1μL、
5μL、10μL、15μL、20μL，平行 3次，考察齐墩果酸和乌索
酸线性关系及其线性范围。以进样量（μg）对峰面积（μV·s）
平均值进行线性拟合，得齐墩果酸线性回归方程为 y=
2.17×105x+1.02×103，相关系数 r=0.9992；乌索酸线性回归
方程为 y=3.55×105x+3.68×103，相关系数 r=0.9995；表明当
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齐墩果酸进样量为 0.1248μg ~2.496μg的乌索熊果酸进
样量为 0.2184μg~4.368μg时，进样量与峰面积呈良好的线
性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取齐墩果酸和乌索酸的对照品混合溶液
20μL进样分析，重复 5次，测得齐墩果酸的峰面积分别
为 1368763μV·s、1347552μV·s、1367661μV·s、1347220μV·
s和 1369023 μV·s，相对标准偏差（RSD）为 0.9 %，乌索酸
峰面积分别为 4135635μV·s、4189671μV·s、4123681μV·s、
4136920μV·s和 4187219 μV·s，RSD为 0.8 %（n=5）。表明
进样方法和仪器精密度良好。
2.8 重现性试验
精密称取同一批白苏叶样品 5份，制备样品溶液，精密
吸取 20μL进样分析，外标法计算含量，齐墩果酸的含量分
别为 1.515mg/g、1.518mg/g、1.527mg/g、1.502mg/g和 1.543
mg/g，RSD为 1.0%（n=5），乌索酸的含量分别为4.890mg/g、
4.989mg/g、4.894mg/g、4.905mg/g和 4.996 mg/g，RSD 为
1.1%（n=5），方法重现性良好。
2.9 加样回收率试验
准确称取已知齐墩果酸和乌索酸含量的白苏样品 5
份，分别加入齐墩果酸和乌索酸对照品混合溶液适量，配
制加标样品溶液。进样测定齐墩果酸和乌索酸的含量，计算
回收率。由表 1结果可知，齐墩果酸和乌索酸的平均加样
回收率分别为 98.5%（RSD=1.9%）和101.3%（RSD=1.7%）。
表 1 齐墩果酸和乌索酸加样回收率试验结果
Table 1.Recovery experiment results of oleanolic acid and ursolic acid
2.10 样品中齐墩果酸和乌索酸含量的测定
准确吸取白苏叶、茎和根样品溶液 20μL注入高效液
相色谱仪，平行 3次，测定齐墩果酸和乌索酸峰面积，按外
标法计算样品中乌索酸与齐墩果酸的含量，结果见表 2。
表 2 白苏样品中齐墩果酸和乌索酸含量测定结果
Table2. Contents of oleanolic acid and ursolic acid in the samples
3 讨论
测定结果表明，3批白苏样品不同部位中均含有五环
三萜酸类化合物齐墩果酸和乌索酸，但含量差异较大，白
苏叶中齐墩果酸和乌索酸含量最高，根中最低。紫苏所有
部位中乌索酸的含量均明显高于齐墩果酸。
在选定的色谱条件下，HPLC与光电二极管阵列检测
器联用，可直接对白苏中齐墩果酸和乌索酸进行定性鉴
别，并精确的测定白苏中齐墩果酸和乌索酸的含量，方法
简单，分离效果好，回收率高，检测时间较短。
参考文献：
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[9]邹盛勤，陈 武. RP-HPLC-PAD法测定薄荷中乌索酸和齐墩果酸的
含量[J].福建林学院学报，2008，28（1）：73-76.
样品编号
1
2
3
白苏部位
叶
茎
根
叶
茎
根
叶
茎
根
齐墩果酸/（mg·g-1）
1.416
0.501
0.373
1.521
0.452
0.366
1.358
0.412
0.299
乌索酸/（mg·g-1）
4.267
1.291
0.932
4.935
1.360
1.017
4.172
1.063
0.825
试验号 组分
样品中
含量/mg
添加
量/mg
实测
值/mg
回收
率/%
平均回
收率/% RSD/%
1
齐墩
果酸
0.521 0.512 1.014 96.3 98.5 1.9
2 0.520 0.512 1.035 100.6
3 0.508 0.512 1.004 96.9
4 0.512 0.512 1.019 99.0
5 0.506 0.512 1.017 99.0
1
乌索酸
1.343 1.226 2.590 101.7 101.3 1.7
2 1.340 1.226 2.561 99.6
3 1.309 1.226 2.575 103.3
4 1.319 1.226 2.576 102.5
5 1.304 1.226 2.574 99.5
《中 国 酿 造》合 订 本（含 邮 费）
2002年 100元；2004年 150元；2005年 160元；2006年 160元；2007年 160元。
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