全 文 ：65※工艺技术 食品科学 2009, Vol. 30, No. 02
枇杷花三萜化合物提取工艺
胡 娟1,2，张 宏1,3,*，刘 刚1,3，张晓喻1,3，陶宗亚1,3
(1.四川师范大学生命科学学院，四川 成都 610068；2.四川师范大学化学与材料科学学院，四川 成都 610068；
3.四川师范大学植物资源应用与开发研究所，四川 成都 610068)
摘 要：目的：研究枇杷花三萜类成分熊果酸、齐墩果酸最佳工艺条件。 方法：采用反相高效液相法同时测定
熊果酸、齐墩果酸含量，应用单因素及 L9(34)正交试验得到提取枇杷花中三萜类化合物的最佳工艺。 结果：确定
最佳工艺条件为95%乙醇10倍量体积在80℃下提取1次，每次2h。结论：本实验采用的方法和指标适合于枇杷
花的提取，为将其开发成为现代中药成方制剂提供科学依据。
关键词：枇杷花；齐墩果酸；熊果酸；反相高效液相色谱法；正交试验
Extraction Technology of Triterpenes from Flowers of Eriobotrya japonica
HU Juan1,2，ZHANG Hong1,3,*，LIU Gang1,3，ZHANG Xiao-yu1,3，TAO Zong-ya1,3
(1. College of Life Science, Sichuan Normal University, Chengdu 610068, China；
2. College of Chemistry and Materials, Sichuan Normal University, Chengdu 610068, China；
3. Institute of Phytochemistry, Sichuan Normal University, Chengdu 610068, China)
Abstract ：This study aimed to optimize the extraction process of the triterpenes from flowers of E iobotrya japonica. The
extraction conditions were optimized via single-factor and orthogonal tests. The obtained optimal extraction process is as
follows: extracting flowers of Eriobotrya japonica with 10 times volume of 95% alcohol at 80 ℃ for one times.
Key words：flowers of Eriobotrya japonica；ole n l acid；ursolic acid；RP-HPLC；orthogonal test
中图分类号：O658 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)02-0065-04
收稿日期：2007-11-28
作者简介：胡娟(1981-)，女，硕士研究生，主要从事药用植物研究。E-mail：hzy-hot@163.com
*通讯作者：张宏(1965-)，女，教授，博士，主要从事药用植物研究。E-mail：zwyjs2006@yahoo.com.cn
枇杷花为蔷薇科枇杷属植物枇杷 [Eriobotrya japonica
(Thunb) Lindl] 的干燥花蕾及花序。主要分布在四川、
陕西、广东、云南等省区。枇杷花味淡、性微温，
枇杷花味淡性平，入肺经，能疏风止咳，通鼻窍，主
治感冒咳嗽，鼻流清涕，虚劳久咳，痰中带血。民
间常用于小儿肺热咳嗽，老年人及久咳不愈患者[1]。临
床常用于治疗急、慢性呼吸道疾病[2]。
近年来发现，枇杷花中含有生物活性的三萜酸类[3]
物质，如熊果酸、齐墩果酸及其盐(如钾盐或钠盐)等既
可以用作食品、药品和化妆品的添加剂[4]，还具有抗炎
抗菌、抗肝炎、抗氧化[5]、降血糖[6]、止咳、显著的
免疫作用和抗致癌作用等多种药理活性[7]，并且是很好
的免疫增强剂[8]，可望成为低毒、有效的新型抗癌[9]和
抗爱滋病毒药物。本课组研究发现枇杷花中含有齐墩果
酸和熊果酸。因此，本实验就齐墩果酸和熊果酸的提
取工艺做深入研究。
目前枇杷花的提取工艺研究未见报道，参考枇杷叶
的提取工艺研究[11]，本实验采用热回流提取法从枇杷花
中提取熊果酸、齐墩果酸，并确定了其最佳工艺条件，
为以后分离纯化工作提供理论依据，为枇杷花黄酮类化
合物的应用奠定基础。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
枇杷花于2005年10月采集于四川蒲江，经四川师范
大学生命科学学院植物教研室鉴定，为蔷薇科枇杷属植物
枇杷(Eriobotrya japonica (Thunb) Lindl)的花。在80℃的温
度下干燥24h，粉碎。
对照品熊果酸(ursolic acid，批号：10742-200516)、
齐墩果酸(oleanolic acid，批号：10709-200304) 中国药
品生物检定所。
1.2仪器与设备
DIONEX双三元型高效液相色谱仪(SOR-100溶剂脱
气架、P680 HPLC泵、ASI-100自动进样器、PDA-100
二极管陈列检测器、TCC-100柱温箱) 美国戴安公司；
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Milli-Q(licel)型超纯水器 Milipore公司；BP211D型十万
分之一天平 Sartoo-rius公司；星海R501B型旋转蒸发
器 无锡市星海王生化设备有限公司。
1.3方法
1.3.1线性关系及检出限
参照文献[14]的方法，绘制熊果酸、齐墩果酸标准
工作曲线。
1.3.2单因素试验样品制备
1.3.2.1溶剂选择
准确称取枇杷花样品5.0g，按料液比为1:8在40℃
下回流提取2h，选用水、95%乙醇、75%乙醇、50%
乙醇四种溶剂提取，滤液抽滤后浓缩至100ml容量瓶，
用95%乙醇定容至刻度，即得样品溶液。
1.3.2.2温度选择
准确称取枇杷花样品5.0g，按料液比为1:8加入95%
乙醇40ml，选取40、50、60、70、80℃五个温度水
平，回流2h，抽滤，旋转蒸发至少量溶液，用95%
乙醇定容至25ml容量瓶中，即得样品溶液。
1.3.2.3时间选择
准确称取枇杷花样品5.0g，按料液比为1:8加入95%
乙醇40ml，在40℃下选取0.5、1、1.5、2、2.5h回
流，抽滤，旋转蒸发至少量溶液，用95%乙醇定容至
25ml容量瓶中，即得样品溶液。
1.3.2.4次数选择
准确称取枇杷花样品5.0g，按料液比为1:8加入95%
乙醇40ml，在40℃下选取1、2、3、4、5次回流2h，
抽滤，旋转蒸发至少量溶液，用95%乙醇定容至25ml
容量瓶中，即得样品溶液。
1.3.2.5料液比选择
准确称取枇杷花样品5.0g，选取料液比(m/V)1:10、
1:20、1:30、1:40加入95%乙醇40ml，在80℃下回流
2h，抽滤，旋转蒸发至少量溶液，用95%乙醇定容至
25ml容量瓶中，即得样品溶液。
1.3.3正交试验样品制备
根据单因素试验结果，选取温度、时间、提取次
数、料液比四个影响熊果酸、齐墩果酸含量的主要因
素，每个因素试验三个水平，进行L9(34)正交试验，滤
液抽滤后浓缩至25ml容量瓶，用95%乙醇定容至刻度，
即得样品溶液。
1.3.4样品中熊果酸、齐墩果酸含量的测定
采用反相HPLC法以熊果酸、齐墩果酸对照液为标
样测定枇杷花中熊果酸、齐墩果酸含量。取样品溶液
10μl进样，在1.3.6条件下进行分析，得样品溶液峰面
积，样品浓度计算公式如下：
C标/A标=C样/A样
C样=C标×A样/A标
式中：C标表示配得对照品溶液；C样表示待测样品浓
度；A标表示为对照品溶液峰面积；A样表示样品峰面积。
样品含量计算：
C×V×n
P(%)=————————×100
W×V1×10
式中：P为三帖类物质提取率(%)；C为从上式计算
得样品中三帖类物质浓度；n为稀释倍数；V为浓缩液的
体积(ml)；V1为测定体积(ml)；W为枇杷花投料量(g)。
1.3.5三萜化合物含量计算
根据熊果酸与齐墩果酸的峰面积比为7:3(见图1、2)，
故采用权重法衡量工艺参数。
三萜化合物含量平均值=熊果酸含量平均值×0.7+
齐墩果酸含量平均值×0.3
1.3.6色谱条件
色谱柱：Alltech Apollo C18(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：甲醇-醋酸水溶液(pH3.4，9 :6)；流速：
0.5ml/min；柱温：20℃；检测波长：210nm；进样量：
10μl。
2 结果与分析
2.1线性关系及检出限
根据1.3.1操作结果，用最小二乘法作线性回归，得
熊果酸、齐墩果酸浓度(Y)与吸光度(A)的关系曲线的回归
方程， Y与A之间呈良好的线性关系，结果见表1。
对照品 线性方程 相关系数 线性范围(mg/L)检测限(mg/L)
齐墩果酸 Y=0.1588X+0.00550.999625.34～506.80.6335
熊果酸 Y=0.1717X－0.08160.99979.11～ 82.000.4550
表1 线性范围及检出限(n=7)
Table 1 Linear ranges and limit of detections of oleanolic acid
and ursolic acid (n=7)
2.2对照品及样品溶液色谱分析
110
90
70
50
30
10
0
0 5 10 15 20 25
1齐墩果酸
峰
面
积
(
m
A
U
)
时间(min)
2熊果酸
图1 对照品HPLC色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of standard
-10
67※工艺技术 食品科学 2009, Vol. 30, No. 02
在1.3 6色谱条件下，齐墩果酸和熊果酸的分离度大
于1.5，由图2可见，样品中的齐墩果酸和熊果酸出峰
时间与对照品(图1)的基本一致，且干扰峰较少，该色
谱条件能满足样品中的齐墩果酸和熊果酸的含量分析[12]。
2.3单因素试验结果
2.3.1枇杷花熊果酸、齐墩果酸提取溶剂选择
取率也在不断增大。从工艺学角度及三萜化合物的性质
考虑，不宜选用更高的温度，所以热回流提取水浴温
度定为80℃。
2.3.3枇杷花熊果酸和齐墩果酸提取时间选择
由图5可知，三萜化合物含量在2.0h时有个峰值，
而2.0h后含量反而下降，这可能是由于三萜化合物长时
间受热而导致其结构发生了改变。综合考虑产品的收率
和生产效益，选择热回流提取时间为2.0h。
2.3.4枇杷花熊果酸和齐墩果酸提取次数选择
由图6可看出，提取次数对熊果酸和齐墩果酸提取
影响很大，提取1次已提出枇杷花中91.25%的三萜化合
物，从生产工艺的角度考虑，故选用1次。
2.3.5枇杷花熊果酸和齐墩果酸提取料液比选择
图2 样品HPLC色谱图
Fig.2 HPLC chromatogram of deanolic acid and ursolic acid
samples
1100
900
700
500
300
100
0
0 5 10 15 20 25
1齐墩果酸峰
面
积
(
m
A
U
)
时间(min)
2熊果酸
-100
由图3可以看出，水做溶剂不能提取出三萜化合物
(本实验指熊果酸和齐墩果酸)，其含量随乙醇浓度的增
大而提高。三萜化合物为弱极性分子，溶于乙醇，不
溶于水，提取溶剂中乙醇含量越高，越有利于熊果酸
的提取。
2.3.2枇杷花熊果酸和齐墩果酸提取温度选择
图3 提取溶剂对三萜化合物含量的影响
Fig.3 Effects of extraction solvent on triterpenes yield
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
水 50%乙醇 75%乙醇 95%乙醇
三
萜
化
合
物
含
量
(‰
)
溶剂
由图4可知，随着提取温度的升高，熊果酸的提
图5 提取时间对三萜化合物含量的影响
Fig.5 Effects of extraction time on triterpenes yield
0.365
0.360
0.355
0.350
0.345
0.340
0.335
0.330
0.325
1 1.5 2 2.5 3
三
萜
化
合
物
含
量
(‰
)
时间(h)
图6 提取次数对提取枇杷花三萜化合物影响
Fig.6 Effects of extraction times on triterpenes yield
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
1 2 3 4
三
萜
化
合
物
含
量
(‰
)
提取次数
图7 料液比对三帖类含量的影响
Fig.7 Effects of ratio of material to solution on triterpenes yield
0.3650
0.3645
0.3640
0.3635
0.3630
1:10:151:201:251:301:351:40
三
萜
化
合
物
含
量
(‰
)
料液比(m/V)
由图7可看出，熊果酸和齐墩果酸提提取率随料液
图4 提取温度对三萜化合物含量的影响
Fig.4 Effects of extraction temperature on triterpenes yield
0.375
0.370
0.365
0.360
0.355
0.350
40 50 60 70 80
三
萜
化
合
物
含
量
(‰
)
温度(℃)
2009, Vol. 30, No. 02 食品科学 ※工艺技术68
比增大而下降，当料液比大于1:10 时，增大料液比，
熊果酸和齐墩果酸提取率开始下降，说明当料液比达到
1:10 以后，熊果酸和齐墩果酸已经基本全部溶出，所以
提取率不会随料液比的增大而明显上升，因此，1:10 为
提取较佳料液比。
2.4正交试验结果
按照1.3.3正交试验方法操作，正交试验结果及方
差分析见表2～4，正交直观分析见图8。
水平
因素
A温度(℃) B提取时间(h)C料液比(m/V)D提取次数(次)
1 40 1.0 1:10 1
2 60 1.5 1:20 2
3 80 2.0 1:30 3
表2 正交试验因素水平表
Table 2 Factors and levels of orthogonal test
试验号 A B C D 熊齐果酸含量(‰)
1 1 1 1 1 2.103
2 1 2 2 2 2.387
3 1 3 3 3 2.450
4 2 1 2 3 2.506
5 2 2 3 1 2.178
6 2 3 1 2 2.492
7 3 1 3 2 2.461
8 3 2 1 3 2.559
9 3 3 2 1 2.336
K1 6.947.077.156.62
K2 7.187.127.237.34
K3 7.367.287.097.52
R 0.420.210.14 0.9
表3 正交试验结果
Table 3 Results of orthogonal test
方差来源 平方和 自由度 方差 F p值
A 0.06782 0.033919.94＜0.05
B 0.00812 0.00412.41
C(误差) 0.00342 0.00171.00
D 0.19902 0.09958.53＜0.05
表4 正交试验方差分析
Table 4 Variance analysis of orthogonal test
注：F0.05(2，2)=19.0；F0.1(2，2)=99.0。
提取次数(次) 1 2 3
三萜化合物含量(‰) 2.458 2.507 2.565
三萜化合物含量平均值(‰) 2.510
RSD(%) 2.134
表5 验证实验结果
Table 5 Results of verification experiment
从表 5可以看出，利用正交试验方法确定的
A3B3C1D1为最佳的工艺条件，即提取温度80℃、10倍
量体积、回流提取2h、提取次数为1次。
3 结 论
3.1采用反相高效液相色谱法，以熊果酸、齐墩果酸
含量为指标，通过正交试验结果可得，各因素影响顺
序为提取次数＞提取温度＞提取时间＞料液比，提取温
度、提取次数两因素有显著性差异(p＜0.05)，而提取
时间和料液比无显著性差异(p＞0.05)。
3.3验证实验表明按A3B3C1D1的条件进行提取3次，结
果熊齐果酸的含量平均值为2.510‰，因此选用80℃、
10倍量体积、回流提取2h、提取次数为1次为最佳优
化工艺条件。
参考文献：
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2.5验证实验
按A3B3C1D1的条件提取3次，三萜化合物含量平均
值为2.510‰，结果见表5。
图8 正交试验直观分析图
Fig.8 Visual analysis of orthogonal test results
4
3
2
4
0
6
0
8
0
温度(℃)
1
1
.
5
2
1
:
1
0
1
:
2
0
1
:
3
0
1 2 3
时间 (h)料液比(m/V)提取次数(次)