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火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化



全 文 :分子植物育种,2015年,第 13卷,第 9期,第 2100-2108页
Molecular Plant Breeding, 2015, Vol.13, No.9, 2100-2108
技术主题
Technology Feature
火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化
晋海军 1 徐铭键 1 陈惠 1* 张世熔 2 布同良 1 唐自钟 1 孙蓉 1 刘默洋 1
1四川农业大学生命科学学院,雅安, 625014; 2四川农业大学环境学院,成都, 611130
*通讯作者, chen62hui@126.com
摘 要 采用响应面法优化籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)根中镉元素的火焰原子吸收检测条件。在单
因素试验的基础上,本研究利用 Design Expert V 8.0.5b软件中的 Box-Benhnken试验设计,研究灯电流、狭
缝宽度、乙炔/空气流量比和燃烧器高度 4个因素对籽粒苋根系中镉吸光度值的影响。用响应面分析法得出
最优的测定条件为:灯电流 5.67 mA;狭缝宽度 0.62 nm;乙炔 /空气流量比 0.17(1/6);燃烧器高度 5.14 mm,
此时的理论预测吸光度值为 0.209 4。通过验证实验证实:吸光度的理论预测值与真实测定值接近,样品检
测中的相对标准偏差 0.94%,加标回收率在 96.3%~103.7%之间,说明该检测方法重现性好,数据准确可靠。
本实验将为下一步准确检测籽粒苋不同部位(根,茎,叶和果实)镉含量和筛选优良的籽粒苋耐镉新品种提
供技术资料。
关键词 籽粒苋,镉,响应面法,火焰原子吸收
Optimization of Detecting Conditions of Cd Element in Root of Amaranthus
hypochondriacus using Flame Atomic Absorption Based on Response
Surface Methodology
Jin Haijun 1 Xu Mingjian 1 Chen Hui 1* Zhang Shirong 2 Bu Tonglian 1 Tang Zizhong 1 Sun Rong 1 Liu
Moyang 1
1 College of Life Science, Sichuan Agricultural University, Yaan, 625014; 2 College of Environmental Sciences, Sichuan Agricultural University,
Chengdu, 611130
* Corresponding author, chen62hui@126.com
DOI: 10.13271/j.mpb.013.002100
Abstract To optimize the detecting conditions of Cd element in root of Amaranthus hypochondriacus using flame
atomic absorption based on response surface methodology. On the basis of single factor experiment, effects of lamp
current, slit width, acetylene/air flow ratio and burner height were investigated based on the Box-Behnken design
of Design Expert V 8.0.5b on the absorbance value of Cd element in root of Amaranthus hypochondriacus. The
optimal detecting conditions were as follows: lamp current 5.67 mA, slit width 0.62 nm, acetylene/air flow ratio
0.17; burner height 5.14 mm, and the theoretical prediction of the absorbance was 0.209 4. The experimental results
showed that the theoretical value of absorbance was close to that of the real detection, and the relative standard
deviation was 0.94%, and the recovery rates ranged from 96.3% to 103.7%. This showed that the method had a good
reproducibility, and the data was accurate and reliable. This experiment will provide technical data for accurate
detection of cadmium content of different parts (roots, stems, leaves and fruits) and screening of new varieties of
cadmium resistance in Amaranthus hypochondriacus.
Keywords Amaranthus hypochondriacus, Cadmium, Response surface methodology, Flame atomic absorption
spectrophotometers
收稿日期:2015-08-28 接受日期:2015-09-10 网络出版日期:2015-09-20
URL: http://www.biopublisher.cn/index.php/mpbopa/article/view/3866
基金项目:本研究由四川主要农区面源污染控制与土壤生态修复技术与示范项目(2007NGY006)资助
图 1 Cd元素灯电流对吸光度值的影响
Figure 1 Effect of light current on absorbance value of Cd ele-
ments
图 2狭缝宽度对 Cd元素吸光度值得影响
Figure 2 Effect of slit width on absorbance value of Cd elements
镉在环境中具有稳定、不易清除和积累的特点,
可以通过食物链的富集作用使人体产生慢性中毒
(宋瑜等, 2008)。近年来,由于工业生产和自然因素影
响,如三废排放、矿产开发、农药化肥的施用,土壤镉
污染状况越来越严重。植物修复技术是目前经济有
效的重金属污染土壤修复方法之一,张小川(2011)报
道籽粒苋具有明显的富集镉的能力,可用于土壤镉
污染的生态修复。
镉的检测方法较多,目前常用的镉的检测方法
有火焰原子吸收法(flame atomic absorption, FAAS)和
石墨炉原子吸收法(graphite furnace atomic absorp-
tion, GFAAS)。石墨炉原子吸收法的样品处理及仪
器工作条件等影响因素相对较多,很小的误差都有
可能导致最终分析结果的准确性出现较大偏差(张
华生和何春林, 2011)。有报道指出火焰法比石墨炉
原子吸收更稳定和更精准的检测镉 (魏本杰等 ,
2013)。目前尚无火焰原子吸收光谱法检测籽粒苋镉
含量条件优化的报道,以前籽粒苋镉含量的检测大
多借鉴国标食品中镉含量的检测条件。张小川
(2011)、李凝玉等(2010)均采用国标食品中镉含量的
检测条件对籽粒苋不同部位镉含量进行了检测,李
虹颖和苏彦华(2012)则参照《土壤农业化学分析方
法》对籽粒苋中镉含量进行了检测,以上研究报道
均未对检测过程中的影响因素进行优化。时玉珍
(2009)、方琦等(2010)均指出为提高火焰原子吸收分
析结果的准确度,应当对检测过程中的影响因素
进行优化。
本研究对火焰原子吸收光谱法测定籽粒苋根中
镉含量的影响因素进行了优化,将为下一步准确检
测籽粒苋不同部位(根,茎,叶和果实)镉含量和筛选
优良的籽粒苋耐镉新品种提供技术资料。
1结果与分析
1.1单因素实验分析
1.1.1灯电流对吸光度值的影响
灯电流是影响火焰原子吸收的重要因素之一,
灯电流过小时,能量弱,灯输出强度低,引起仪器工
作条件不稳定;灯电流过大,会引起谱线变宽,能量
强,灯寿命缩短(张峰, 2009)。本实验灯电流变化梯度
为 5~10 mA,随着灯电流的加大,吸光度值越来越小
(图 1)。并不是灯电流越小就越好,灯电流太小可能
引起仪器工作不稳定。选取 5~7 mA作为 Cd元素灯
电流的响应面考察范围。
1.1.2狭缝宽度对吸光度值的影响
狭缝宽,会引起背景信号强,照成仪器工作不稳
定,实验重复性差;狭缝窄,背景信号弱,检测准确性
也会降低,因此选择合适的狭缝宽度对于元素的检
测很重要。本实验设置 0.2 nm、0.4 nm、0.6 nm、0.8 nm、
1.0 nm的狭缝宽度检测其对吸光度值得影响,结果
显示 0.6 nm时吸光度值较高。在响应面实验时,把
0.4~0.8 nm作为狭缝宽度的考查范围(图 2)。
1.1.3乙炔/空气流量比对吸光度值的影响
乙炔-空气火焰是广泛使用的一种火焰,可以
测定 35种以上的元素。乙炔-空气流量比例直接影
响火焰的性质,不同性质的火焰可以满足不同的分
析要求(周淼, 2006)。本实验设置乙炔/空气流量比
1/3、1/4、1/5、1/6、1/7。结果显示,乙炔/空气流量比 1/6
时,吸光度值较高(图 3)。因此将 1/5、1/6、1/7作为响
应面实验时乙炔/空气流量比的考查范围。
1.1.4燃烧器高度对吸光度值的影响
由于待测元素的基态原子在火焰中是不均匀分
布的,检测时,需调节燃烧器高度,使测量光束刚好
在基态原子浓度最大的火焰区域通过(周淼, 2006)。
本实验设置燃烧器高度考察范围 4~8 mm。结果显
示,燃烧器高度 5 mm时,吸光度值最高(图 4)。因此,
将 4~6 mm作为燃烧器气高度响应面考察范围。
火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化
Optimization of Detecting Conditions of Cd Element in Root of Amaranthus hypochondriacus using Flame Atomic Absorption 2101
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
表 1 Box-Benhnken试验因素水平表
Table 1 Factors and levels in the Box-Benhnken experimental de-
sign
因素
Factor
灯电流(mA)
Lamp current (mA)
狭缝宽度(nm)
Slit width (nm)
乙炔 /空气流量比
Acetylene/air flow ratio
燃烧器高度(mm)
Burner height (mm)
代码
Code
A
B
C
D
-1
5
0.4
1/5
4
0
6
0.6
1/6
5
1
7
0.8
1/7
6
水平
Level
表 2 Box-Benhnken试验设计与结果
Table 2 Box-Benhnken experimental design matrix and results
试验号
Test number
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
A
-1
1
-1
1
0
0
0
0
-1
1
-1
1
0
0
0
0
-1
1
-1
1
0
0
0
0
0
0
0
B
-1
-1
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
-1
1
-1
1
0
0
0
0
-1
1
-1
1
0
0
0
C
0
0
0
0
-1
1
-1
1
0
0
0
0
-1
-1
1
1
-1
-1
1
1
0
0
0
0
0
0
0
D
0
0
0
0
-1
-1
1
1
-1
-1
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
-1
-1
1
1
0
0
0
吸光度值
Absorbance value
0.176
0.100
0.161
0.165
0.150
0.113
0.159
0.140
0.150
0.124
0.175
0.133
0.146
0.154
0.104
0.144
0.177
0.142
0.150
0.113
0.121
0.151
0.136
0.164
0.206
0.205
0.204
图 3乙炔/空气流量比对 Cd元素吸光度值得影响
Figure 3 Effect of acetylene/air flow ratio on absorbance value of
Cd elements
图 4燃烧器高度对 Cd元素吸光度值得影响
Figure 4 Effect of burner height on absorbance value of Cd ele-
ments
1.2 Box-Benhnken 试验
依据 Box-Benhnken实验原理,在单因素实验基
础上,选取灯电流、狭缝宽度、乙炔/空气流量比及燃
烧器高度为检测籽粒苋不同部位镉含量影响显著的
4个因素,镉元素的吸光度值作为响应值,用四因素
三水平的响应面分析法进行试验,共有 27个试验
点,24个为分析因子(1~24),3个为中心试验点(25~
27),试验因素水平见表 1,结果见表 2。
1.2.1模型建立与显著性检验
用 Design Expert V 8.0.5b软件对表 2中的数据
进行回归拟合,得吸光度值对 4个影响因素的回归方
程预测模型:吸光度值=-2.3861+0.2456A+0.1543B+
12.4556C+0.3174D+0.1AB-0.0219AC-3.9×10-3AD+
1.3825BC-2.0×10-3BD+0.1584CD-0.025A2-0.7635-
B2-42.0683C2-0.0312D2,对此方程方差分析见表 3。
由表 3可知,此预测模型具有较高的显著性(p<
0.0001),且失拟项不显著 (p=0.1282>0.05),R2Adj=
0.9887,信噪比为 47.219,因而此回归方程的可信度、
拟合度很高,可用此模型对火焰原子吸收法测定籽
粒苋根中镉含量的最佳测定条件进行预测和分析。
1.2.2响应面分析与优化
Design Expert V 8.0.5b 软件根据回归方程作出
2102
火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化
Optimization of Detecting Conditions of Cd Element in Root of Amaranthus hypochondriacus using Flame Atomic Absorption
表 3响应面二次回归方程模型的方差分析
Table 3 Analysis of variance for each term in the fitted regression model
变异来源
Sources of variation
模型
Model
A
B
C
D
AB
AC
AD
BC
BD
CD
A2
B2
C2
D2
残差
Residual
失拟项
Lack of fit
误差项
Pure Error
总和
Cor total
SS
0.021
3.749×10-3
2.033×10-3
2.236×10-3
8.020×10-4
1.600×10-3
1.562×10-6
6.084×10-5
2.496×10-4
6.400×10-7
8.190×10-5
3.334×10-3
4.975×10-3
6.290×10-3
5.185×10-3
1.093×10-4
1.064×10-4
2.960×10-6
0.021
R2=0.994 8
df
14
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
12
10
2
26
R2Adj=0.988 7
MS
1.496×10-3
3.749×10-3
2.033×10-3
2.236×10-3
8.020×10-4
1.600×10-3
1.562×10-6
6.084×10-5
2.496×10-4
6.400×10-7
8.190×10-5
3.334×10-3
4.975×10-3
6.290×10-3
5.185×10-3
9.111×10-6
1.064×10-5
1.480×10-6
F值
F value
164.22
411.45
223.15
245.39
88.02
175.06
0.17
6.68
27.40
0.07
8.99
365.96
546.00
690.32
569.04
7.19
p值
p value
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
0.686 1
0.023 9
0.000 2
0.795 5
0.011 1
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
<0.000 1
0.128 2
信噪比=47.219
Adeq precisior
显著性
Significant
**
**
**
**
**
**
*
**
*
**
**
**
**
注: **:在 α=0.01水平显著; *:在 α=0.05水平显著
Note: **: alpha=0.01 significant level; *: alpha=0.05 significant level
等高线图和响应曲面图,分析灯电流、狭缝宽度、乙
炔/空气流量比和燃烧器高度对吸光度值的影响。
图 5中的 6组等高线图和响应曲面图直观反映了各
因素对吸光度值的影响。
等高线图的形状反应两因素间相互作用的强
弱,如果等高线成椭圆形则两因素相互作用显著,圆
形则与之相反。比较图 5中的 6组图并结合表 3中 P
值,可知灯电流、狭缝宽度、乙炔 /空气流量比和燃烧
器高度及它们之间的相互作用都在一定水平上显著
影响吸光度值。这表明该 4个影响因素对吸光度值
的影响并不是简单地线性关系。
对预测回归方程求一阶偏导令其为 0,得出最佳
的测定条件为:灯电流 5.67 mA;狭缝宽度 0.62 nm;
乙炔 /空气流量比0.17(1/6);燃烧器高度 5.14 mm,此
时的理论预测吸光度值为 0.209 4。
1.2.3验证试验
利用上述最优检测条件,重复测定样品 6次,测
的平均吸光度值为 0.211,与理论预测值相比,相对
误差为 0.76%。说明 Box-Benhnken实验所得最优检
测条件准确可靠,可应用于实践。
1.2.4绘制标准曲线
横坐标镉元素的质量浓度,纵坐标为吸光度值
绘制标准曲线。在 0.3~1.8 μg/mL范围内与吸光度值
呈现较好的线性关系,线性方程为:y=0.1861x+
0.0039,线性系数:R2=0.9995。
1.2.5籽粒苋根中镉的测定
按照最佳的测定条件,平行检测样品 6次,镉质量
2103
分子植物育种
Molecular Plant Breeding2104
浓度分别为 1.110 μg/mL、1.109 μg/mL、1.110 μg/mL、
1.109 μg/mL、1.112 μg/mL、1.109 μg/mL,由此得到
样品中镉的质量浓度为 1.110 μg/mL,该方法的相对
标准偏差 0.94%,说明该方法重现性好,适合籽粒苋
根中镉含量检测。
1.2.6样品的加标回收率实验
结果可知,样品的加标回收率在 96.3%~103.7%
之间,均值为 99.54% (表 4),说明该方法检测籽粒苋
中镉含量的结果准确可靠。
本实验是用 0.5 g籽粒苋根系(干重)配制的 50 mL
样品溶液,其样品液中镉离子浓度为 1.110 μg/mL,
则籽粒苋根系样品中镉离子质量浓度为 110 mg/kg。
2讨论
对于重金属镉来说,一般认为植物体镉吸收量
超过 100 mg/kg (干重),便可认为其有较好的富集吸
收镉的能力(姚银安等, 2008)。本实验,在 60 mg/kg
镉污染的土壤中,测得籽粒苋根系吸收镉的量达到
110 mg/kg,说明籽粒苋根系具有较好的富集吸收镉
的能力。根是植物的重要组成部分,在对外界环境的
感知及控制上起了关键的作用,根是镉离子进入植
物体的第一道屏障。
样品中镉的消解方法主要有湿法消解、干法消
解和微波消解 3种。孙旭峰等(2014)采用此 3种消解
方法检测了大米中镉含量,发现湿法消解设备投入
少,可处理样品量大,方法成熟,适宜用于常规实验
检测。尚永辉(2008)选用不同消解方式检测茶叶中
的镉,发现采用硝酸-高氯酸的湿法消解方法结果
结果较为理想。因此本实验采用湿法消解对样品进
行前处理。
目前,植物体中镉含量的检测常用的方法是火
焰原子吸收法和石墨炉原子吸收法。火焰原子吸收
法是经典的分析方法,具有操作简单,分析速度快,
信号稳定和干扰相对较小等优点;石墨炉原子吸收
法具有样品预处理简单,灵敏度高等优点,适用于常
用痕量元素的检测分析,但其基体干扰较为严重(沈
宏杰, 2008)。魏本杰等(2013)指出火焰原子吸收法检
测镉元素的精确度要高于石墨炉原子吸收法,石墨
炉原子吸收法较适用于低浓度镉的检测。但也有文
献指出火焰法和石墨炉两种原子吸收方法检测镉元
素时,可相互替代,等效使用(顾咏红, 2005)。籽粒苋
图 5两因素交互作用对吸光度值影响的等高线图和响应面
Figure 5 Response surface and contour plots reflecting the interactive effects of two determination conditions on absorbance of tested
samples
火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化
Optimization of Detecting Conditions of Cd Element in Root of Amaranthus hypochondriacus using Flame Atomic Absorption 2105
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
表 4加标回收率试验
Table 4 Experimental results on the recovery of spiked standard
样品质量浓度(μg/mL)
Sample mass concentration
(μg/mL)
1.110
1.110
1.110
加入镉标准品质量浓度(μg/mL)
Quality concentration of cadmium
(μg/mL)
0.600
0.600
0.600
测定质量浓度(μg/mL)
Determination concentration
(μg/mL)
1.688
1.702
1.732
加标回收率(%)
Recovery ratio
(%)
96.30
98.62
103.70
为镉超富集植物,可大量富集镉,因此本实验选用火
焰原子吸收法检测籽粒苋中镉含量。影响火焰原子
吸收的主要因素有灯电流、狭缝宽度、乙炔/空气流量
比和燃烧器高度(程岭等, 2009)。刘新等(2012)用响
应面优化法,对锌元素火焰原子吸收的影响因素(灯
电流、狭缝宽度、乙炔/空气流量比和燃烧器高度)进
行了优化,得到了各影响因素的最优条件。王亚东等
(2014)用响应面法优化了石墨炉法检测大米中镉的
影响因素,得到了最优的检测条件。目前尚无火焰原
子吸收法检测籽粒苋中镉含量影响因素优化的报
道。张小川(2011)对镉胁迫(60 mg/kg镉的土壤) 90 d
的籽粒苋进行检测,其根系中镉含量为 66 mg/kg。本
实验在相同条件下(土壤处理方式、籽粒苋镉胁迫时
间和检测仪器均相同),采用响应面优化后的检测条
件,发现籽粒苋根系中镉含量为 110 mg/kg。李凝玉
等(2010)也对籽粒苋不同部位吸收镉的情况进行了
检测,发现 50 mg/kg镉的土壤胁迫 60 d后,籽粒苋
根中镉含量为 212.6 mg/kg。本实验中土壤处理方式
及镉胁迫籽粒苋的时间均与李凝玉等(2010)不同,这
可能是二者实验结果产生较大差异的原因。李虹颖
和苏彦华(2012)也检测了籽粒苋不同部位吸收镉的
情况,其籽粒苋的栽培方式及所用的检测仪器均与
本实验不同,因而检测结果没有可比性。
本实验通过对火焰原子吸收法测定籽粒苋根中
镉含量的研究,建立了高度显著(P<0.000 1)的回归方
程数学模型。通过试验验证,此模型方程可较好预测
测定结果。最终得到了火焰原子吸收法检测籽粒苋
根中镉含量的最优条件:灯电流 5.67 mA;狭缝宽度
0.62 nm;乙炔/空气流量比 0.17(1/6);燃烧器高度
5.14 mm。本实验将为下一步准确检测籽粒苋不同部
位(根,茎,叶和果实)镉含量和筛选优良的籽粒苋耐
镉新品种提供技术资料。
3材料与方法
3.1材料
本实验所用籽粒苋种子采自四川农业大学农
场,经四川农业大学资源环境学院张世熔教授鉴定。
选取籽粒饱满种子,浸泡消毒(0.1% NaClO),多次蒸
馏水冲洗干净,而后播种、育苗。幼苗长到一定大小
(株高为 5~6 cm, 4~5片新叶)后,选择长势良好,生长
一致的幼苗进行盆栽试验。试验土壤风干过 4 mm筛
备用,将 6.0 kg供试土壤装入实验盆(40 cm×20 cm×
15 cm)。镉以 CdCl2·2.5H2O的形式加入并与土壤混
匀(每千克土加入 60 mg CdCl2·2.5H2O),平衡四周
后,将长势一致的籽粒苋幼苗分别移栽到实验盆中,
每盆各 4株苗。为保证生长所需营养物质,施相同底
肥。盆栽培养 90 d后,收获籽粒苋根。
3.2试剂与仪器
试剂:HNO3;HClO4;超纯水;乙炔气;1 000 μg/mL
Cd标准溶液(由国家钢铁材料测试中心提供)。
仪器:原子吸收 AA-6300 分光光度计(日本岛
津);Cd元素空心阴极灯 (北京有色金属研究总院生
产);超纯水机(艾柯公司);DHG-9075A型电热恒温
鼓风干燥箱(上海和呈仪器制造有限公司);BS224S
型电子分析天平(杭州科博仪器有限公司)。
3.3 方法
3.3.1样品的前处理
将收获的籽粒苋根先用自来水多次冲洗去除粉
尘,而后用超纯水淋洗 3次,晾干,105℃杀青 30 min,
然后 80℃烘干至恒重,粉碎机粉碎材料。
3.3.2样品溶液的制备
准确称取 0.5 g左右粉碎的根,置于 100 mL聚
四氟乙烯烧杯中,加入 HNO3-HClO4(4:1) 25.00 mL
浸泡过夜,80℃消煮至溶液澄清透明近干为止,超纯
水定容到 50.00 mL同时做样品空白。
3.3.3标准溶液的制备
取 6只 10 mL容量瓶,分别加入 0.8 mL配制的
基体改进剂溶液,在各容量瓶中依次加入一定体积,
用 0.5%HNO3将 1 000μg/mLCd标准溶液逐级稀释成
0.3μg/mL、0.6μg/mL、0.9μg/mL、1.2μg/mL、1.5μg/mL、
2106
1.8 μg/mL的系列标准液,并配制镉空白溶液。
3.3.4单因素实验
根据仪器说明书及厂家工程师建议设定仪器工
作条件:元素:Cd;光源:Cd空心阴极灯;点灯方式:
BGC-D2;波长:228.8 nm;灯电流:8 mA;狭缝宽度:
0.7 nm;乙炔/空气流量比:0.2(1/5);燃烧器高度:6 mm。
在进行单因素优化实验时,改变其中一项因素参数
时,其他因素参数则固定如表 1。每次改变考察因素
时,用 0.5% HNO3进行分光光度计的能量平衡。样品
溶液作为检测溶液,考察灯电流、狭缝宽度、乙炔 /空
气流量比和燃烧器高度对 Cd吸光度的影响。
3.3.5仪器工作条件响应面优化
在单因素实验的基础上,利用 Design Expert V
8.0.5b软件的 Box-Benhnken实验方案,选取灯电流、
狭缝宽度、乙炔 /空气流量比及燃烧器高度 4个影响
因素进行响应面法的优化。
作者贡献
晋海军是本研究的实验设计和实验研究的执行
人,完成论文的初稿写作;陈惠和张世熔是项目的负
责人及构思者,指导实验设计,论文写作与修改;孙
蓉和刘默洋参与实验研究和结果分析;吴琦和唐自
钟参与实验设计和数据分析。全体作者都阅读并同
意最终的文本。
致谢
本研究由四川主要农区面源污染控制与土壤生
态修复技术与示范项目(2007NGY006)资助。
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